Диссертация (1091787), страница 6
Текст из файла (страница 6)
Гистон H1 проникает через гематоэнцефалический барьер, поэтому он можетиспользоваться в лечении отдаленных метастазов мозга [28].Разработка препаратов, аналогов Ритуксимаба на основе производного гистона классаН1 наиболее активно велась немецкими корпорациями SYMBIOTEC GMBH и RICHTERHELM BIOLOG GMBH & CO. Результатом разработок явились 5 патентов и патентныхзаявок за рубежом на применение и способ получения рекомбинантного человеческогогистона Н1 (H1.3) для лечения НХЛ. Патентов равно как и патентных заявок на препараты наоснове производного гистона Н1 в Российской Федерации не выдавалось. В настоящее времятолько один препарат «Онкогист» с действующим веществом бис-мет-гистон, производстваSYMBIOTECGMBH(Германия)/TYTONISBV(Нидерланды)выведеннабиофармацевтический рынок для лечения НХЛ.В приведенных патентах по способу выделения гистона Н1, а также в непатентныхисточниках [33, 34, 35] описаны технологии получения и очистки рекомбинантногочеловеческого гистона Н1.
Однако во всех случаях не достигается либо эффективностьтехнологии в силу малого суммарного выхода белка, либо требуемая для созданияфармацевтической субстанции степень чистоты белка.252.4. Разработка биотехнологии получения активной фармацевтическойсубстанции – аналога Ритуксимаба.Исходя из вышеизложенного, безусловно актуальным и патентоспособным являетсяразработка в Российской Федерации эффективной технологии выделения и очисткирекомбинантного человеческого гистона Н1, аналога Ритуксимаба, высокой степеничистоты. Это позволит получить активную фармацевтическую субстанцию для созданияотечественного лекарственного препарата для лечения НХЛ, способного заместить наРоссийском биофармацевтическом рынке импортный препарат Ритуксимаб.На ОБП ИБХ РАН разработка биотехнологии получения АФС рекомбинантного белкаАР – аналога ритуксимаба заключалась в создании:- технологии наращивания штамма-продуцента E.coli его ферментацией с последующимсбором клеточной биомассы, содержащей не менее 10% целевого рекомбинантного белкаАР;- технологии выделения и очистки этого целевого рекомбинантного белка АР с помощьюметодов экстракции и хроматографии- методов контроля физико-химических и микробиологических параметров полученнойАФС рекомбинантного белка АР.2.4.1.
Перечень основных технологических операций в производствесубстанции гистона H1.3.2.4.1.1. Технологические операции, выполняемы в цехе промышленнойферментации. Выращивание инокулята (посевного материала), Культивирование клеток штамма-продуцента, Сбор и отмывка клеток штамма-продуцента, Разрушение (дезинтеграция) клеток штамма-продуцента, с получением суспензии.262.4.1.2.
Технологические операции, выполняемые в цехе выделения иочистки. Экстрагирование рекомбинантного белка, Очистка рекомбинантного белка при помощи катионообменной хроматографии, Очистка рекомбинантного белка при помощи ВЭЖХ, Очистка рекомбинантного белка при помощи гель-фильтрации Сушка активной фармацевтической субстанции гистона H1.3 человека Маркировка и упаковка активной фармацевтической субстанции гистона H1.3человека.2.4.1.3.
Контроль качества АФС, физико-химические свойства.Для использования полученного путем ферментации и высокоэффективной очисткирекомбинантного белка АР, гистона H1.3 – аналога Ритуксимаба в качестве активнойфармацевтической субстанции необходимо разработать параметры, характеризующиекачествополученнойАФС,иметодыконтроляэтихпараметров.Разработкахарактеристических параметров и их нормативных показателей проводилась в 2010 г. всоответствии с ОСТ № 91500.05.001-00 «Стандарты качества лекарственных средств.Основные положения» и Государственной фармакопеей XI и XII издания.
Была созданаспецификация на АФС рекомбинантного белка АР, гистона H1.3 – аналога ритуксимаба суказанием параметров контроля, их нормативных значений и методов контроля. Наосновании разработанной спецификации была создана Фармакопейная статья предприятия,как стандарт качества АФС рекомбинантного белка АР, гистона H1.3 – аналога ритуксимаба,с описанием методов контроля по приведенным в спецификации параметрам качества.27Таблица 4. Спецификация на АФС рекомбинантного белка, гистона H1.3 – аналога РитуксимабаПоказательМетодНормаОписаниеВизуальныйБелая рыхлая таблетка, прирастворении – прозрачныйрастворРастворимостьОпределение растворимости поГФ XIIНе менее 100 мг/млПотери массы привысушиванииМетод прямой сушки по ГФ XIIНе более 10 %ЭФ в ПААГ с последующейденситометриейОсновная полоса (не менее 60%)на электрофореграмме ПААГдолжна соответствовать мол.массе 22-23 кДа.ОФ ВЭЖХГФ ВЭЖХВремя удерживания основногопика на хроматограммеиспытуемого препарата должносоответствовать времениудерживания пика гистона нахроматограмме стандартногораствора.ПодлинностьБиологический методПодавление роста клеток линиичеловеческого лейкоза U-937ОФ ВЭЖХМенее 2%ГФ ВЭЖХМенее 3%Бактериальные эндотоксиныЛАЛ-тест по ГФ XIIНе более 0,5 ЕЭ/мг белкаМикробиологическая чистотаМетод по ГФ XIIКатегория 1.2.БОстаточные белки штаммапродуцентаМетод иммуноферментногоанализаМенее 100 ppmОстаточная ДНК штаммапродуцентаМетод полимеразной цепнойреакции в режиме реальноговремениМенее 5 пг/мг белкаБиологическая активностьПодавление роста клеток линиичеловеческого лейкоза U-937IC 50 от 0,5 до 3,5 мММаркировкаВ соответствии с ФСПУпаковкаВ стеклянных банках предназначенных для хранения особо чистыхвеществ объемом на 250 или 500 мл с завинчивающимися крышкамии уплотнительным тефлоновым кольцом.ХранениеВ сухом, защищенном от света месте, при температуре от –10°С до –20 °С.Срок годности3 годаПосторонние примеси28Для обеспечения надлежащего производственного контроля в критических точкахтехнологического процесса при производстве ЛС, необходимо формирование и применениенадежной системы управления рисками.2.5.
Система управления рисками на производстве генно-инженерныхбелков.Из имеющихся методологий по управлению рисками для качества хорошуюэффективность имеет система анализа риска и контроля критических точек (HACCP —Hazard Analysis and Critical Control Point), к тому же ее внедрение обходится беззначительных материальных затрат. Система HACCP позволяет со значительной степеньюнадежности гарантировать высокое качество и безопасность конечного фармацевтическогопродукта. Она регламентирует все стадии производственного процесса — от обработкисырья до хранения и потребления конечных продуктов.
В настоящее время эксперты ВОЗрассматривают систему НАССР в качестве перспективного подхода к комплексномууправлению качеством продукции, который мог бы использоваться в производстве ЛСпараллельно с внедрением правил GMP. По мнению экспертов, концепция определениякритических этапов производственных процессов и связанных с ними рисков ухудшениякачества продукции соответствует принципам системы GMP. В конце 2001 г.
эксперты ВОЗподтвердили ранее высказанное мнение о близости подходов в системах НАССР и GMP вчасти выявления критических, с точки зрения качества продукции, этапов в производстве ЛСи отметили целесообразность использования данного подхода в производстве лекарственныхсредств [36]. Анализ рисков носит циклический характер, направленный на систематическоеповышение надежности всей производственной цепи [37] (см. рисунок 8).Рисунок 8. Схема анализа рисков.29В нормативной и технической документации задаются предельно допустимые значенияпараметров или пределы их изменения. Для своевременного обнаружения тенденции выходапараметров за допустимые значения и предупреждения опасной ситуации целесообразноустановить два дополнительных уровня значений параметров:– уровень предупреждения;– уровень тревоги.В критических точках следует обеспечивать контроль параметров по обоим уровням.Контроль может быть периодическим или непрерывным.Для периодического контроля следует установить периодичность и методы егопроведения и предусмотреть порядок оформления факта проведения контроля и полученныхпараметров.
Для непрерывного контроля следует определить порядок регистрации ихранения полученных значений параметров. Следует предусмотреть меры, принимаемые вслучае выхода параметров за пределы уровней предупреждения и действия [37].В соответствии с этой схемой процесс управления рисками может быть представленследующим образом:1. Изучение возможных отклонений / ошибок (потенциальных рисков) для отдельныхкомпонентов и систем в целом (технологический процесс, оборудование, инженерныесистемы обеспечения, помещения и т.д.)2.
Анализ и оценка критичности отклонений в отношении качества3. Определение мер по предотвращению или снижению риска4. Использование результатов и документирование5. Информирование о рисках и пересмотр рисковHACCP-методологияДля управления рисками на производстве существует ряд специализированных методов.Выбор конкретного метода определяется в каждом случае отдельно и зависит от спецификипроизводства. В данном случае было принято решение об управлении рисками на основеметодологии HACCP. При правильном использовании этот метод может служить какэффективный инструмент, который позволяет выявить источники рисков и наиболеекритические факторы, оценить и предотвратить возможные проблемы, сэкономить ресурсы идостичь более высокого качества.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
