Заключение дисс совета (1091771)

Просмтор этого файла доступен только зарегистрированным пользователям. Но у нас супер быстрая регистрация: достаточно только электронной почты!

Текст из файла

ЗАКЛЮЧЕНИЕ ДИССЕРТАЦИОННОГО СОВЕТА

Д 212.131.06 НА БАЗЕ Федерального государственного бюджетного образовательного учреждения высшего образования «Московский технологический университет» Министерства образования и науки Российской Федерации ПО ДИССЕРТАЦИИ НА СОИСКАНИЕ УЧЕНОЙ СТЕПЕНИ КАНДИДАТА ХИМИЧЕСКИХ НАУК.

аттестационное дело № _______________

решение диссертационного совета от

12.12.2016, протокол № 5

О присуждении Ковалевой Екатерине Викторовне, гражданке РФ, ученой степени кандидата химических наук.

Диссертация «Разработка и применение методов ПЦР и ИФА для анализа остаточной ДНК и белков штаммов-продуцентов в биофармацевтических субстанциях» в виде рукописи по специальности 03.01.06 – биотехнология (в том числе бионанотехнологии) принята к защите 03 октября 2016 года, протокол № 3, диссертационным советом Д 212.131.06, созданном на базе Федерального государственного бюджетного образовательного учреждения высшего образования «Московский технологический университет» Министерства образования и науки Российской Федерации (МИТХТ), 119571, Москва, пр-т Вернадского, д.86, приказ № 935/нк от 14.07.2016.

Соискатель Ковалева Екатерина Викторовна, 1985 года рождения, в 2008 году окончила Московскую государственную академию тонкой химической технологии им. М.В. Ломоносова по специальности «биотехнология» с присуждением квалификации инженера. В 2008 г. Ковалева Е.В. поступила в очную аспирантуру кафедры биотехнологии и бионанотехнологии Московской государственной академии тонкой химической технологии им. М.В. Ломоносова. С 2010 по 2013 гг. находилась в декретном отпуске. С 2013 г. продолжила обучение в аспирантуре. В 2015 г. завершила обучение в аспирантуре.

С 2009 г. по настоящее время Ковалева Е.В. работает на Опытном биотехнологическом производстве Института биоорганической химии им. академиков М.М. Шемякина и Ю.А. Овчинникова РАН в должности инженера Контрольно-аналитической лаборатории.

Работа выполнена на кафедре биотехнологии и промышленной фармации Института тонких химических технологий Московского технологического университета и в Контрольно-аналитической лаборатории Института биоорганической химии им. акад. М. М. Шемякина и Ю. А. Овчинникова РАН .

Научный руководитель:

Академик РАН и РАМН, профессор, доктор химических наук, профессор кафедры биотехнологии и промышленной фармации Института тонких химических технологий Московского технологического университета Швец Виталий Иванович.

Официальные оппоненты:

доктор биологических наук, профессор, начальник отдела биотехнологии и биоэнергетики Национального исследовательского центра «Курчатовский институт» Василов Раиф Гаянович;

кандидат химических наук, старший научный сотрудник Федерального научно-клинического центра физико-химической медицины ФМБА Варижук Анна Михайловна,

дали положительные отзывы о диссертации.

Ведущая организация - Институт молекулярной генетики РАН - дала положительный отзыв, составленный заведующим лабораторией молекулярной диагностики, канд. мед. наук Демкиным Владимиром Витальевичем и утвержденный заместителем директора Института по научной работе, д.б.н., проф. Сломинским Петром Андреевичем.

Диссертационная работа Ковалевой Е.В. посвящена актуальной теме -разработке чувствительных и специфичных методов по определению остаточной ДНК и белков штаммов-продуцентов в активных фармацевтических субстанциях, что особенно важно для жизненно необходимых лекарственных препаратов, применяемых у пациентов с сахарным диабетом, а также онкологическими заболеваниями. Ковалевой Е.В. были разработаны праймеры к фрагменту гена 16S РНК E.coli для анализа остаточной ДНК штамма-продуцента в АФС генно-инженерного человеческого инсулина и гистона Н1.3 и проведена оптимизация различных параметров метода, что позволило увеличить чувствительность метода в 30 раз. Это дает возможность производителям гарантировать более высокое качество АФС и на порядок снизить количество остаточной ДНК.

Автором показано успешное применение нестандартного набора «Proinsulin ELISA» для ИФА при анализе проинсулина в субстанции генно-инженерного инсулина человека, что позволяет проводить анализ проинсулина в субстанции инсулина с низким содержанием проинсулина, что недоступно при использовании набора «ПанкреоИФА-проинсулин».

Результаты исследований, выполненных автором, внедрены в технологическое производство. Данные, полученные диссертантом Ковалевой Е.В., могут быть использованы различными производителями фармацевтических субстанций, применяющих в своих разработках технологию рекомбинантных ДНК, а также такими организациями, как Федеральный научно-клинический центр физико-химической медицины ФМБА, НИЦ «Курчатовский институт», Институт биохимии им. А.Н. Баха РАН, Институт молекулярной генетики РАН, Московский государственный университет им. М.В. Ломоносова.

Соискатель имеет 6 опубликованных работ по теме диссертации, среди них 3 статьи в научных журналах, которые включены в перечень ВАК, и 3 тезиса к международным конференциям. В опубликованных работах соискателя отражены все основные результаты диссертации по выполнению поставленных задач. Объем публикаций 1,3 п.л., авторский вклад составил 90%.

Наиболее значимые научные работы по теме диссертации опубликованы:

1) Ковалёва Е.В., Баранник А.П., Шибанова Е.Д., Скоблов Ю.С., Швец В.И. Разработка и применение метода рвПЦР для анализа остаточной ДНК штамма-продуцента в субстанции гистона Н1.3.// Биотехнология – 2015. - №2. – С. 65-75.

2) Ковалёва Е.В., Кириллова Л.Н., Шибанова Е.Д., Баирамашвили Д.И. Сравнение валидационных характеристик метода ИФА при использовании коммерческих наборов для определения проинсулин-подобных иммунореактивных белков в субстанции инсулина человеческого генноинженерного.// Биофармацевтический журнал. – 2014. – Т.6. – С. 52-61.

3) Скоблов М.Ю., Шибанова Е. Д., Ковалева Е.В., Баирамашвили Д.И., Скоблов Ю.С., Мирошников А.И. Количественное определение содержания ДНК в генно-инженерных активных фармацевтических субстанциях методом ПЦР в реальном времени.// Биоорганическая химия. – 2010. - Т.36. – №1. – С. 119-123

На автореферат диссертации поступило 4 положительных отзыва. Отзыв из Института биохимии им. А.Н. Баха РАН от научного сотрудника лаборатории инженерной энзимологии, к.х.н. Дергоусовой Н.И. содержит замечание по поводу формальности языка и оформлению работы. Отзыв из Научного центра экспертизы средств медицинского применения Министерства здравоохранения России от главного эксперта лаборатории биотехнологических препаратов Испытательного центра экспертизы лекарственных средств, к.х.н., Швеца С.В. замечаний не содержит. Отзыв из Московского государственного университета имени М.В. Ломоносова от старшего научного сотрудника кафедры химической энзимологии, к.х.н., доцента Балабушевич Н.Г. содержит замечания, касающиеся недостаточного рассмотрения динамики разрушения ДНК штамма-продуцента ультразвуком и недочетов в оформлении автореферата. Отзыв из ФГБУ «Антидопинговый центр» от директора учреждения, к.х.н. Дикунца М.А. содержит замечания, касающиеся буквенного сокращения терминов DL и QL, возможности указания оборудования в автореферате, а также опечаток в тексте и технических ошибок в подрисуночных подписях.

Выбор официальных оппонентов обоснован тем, что они являются успешными учеными, эффективно работающими в области биотехнологии и иммунохимии. Выбор ведущей организации обоснован тем, что Институт молекулярной генетики РАН занимает ведущие позиции в стране в области фундаментальных научных исследований и прикладных разработок в области молекулярной генетики, молекулярной биологии, биотехнологии и медицины. Работы направлены на разработку систем детекции и идентификации различных возбудителей инфекционных заболеваний на основе метода ПЦР, систем определения фетальной ДНК в крови матери, разработку систем экспрессии некоторых генов человека, изучение механизмов репликации специализированных ДНК-полимераз.

Диссертационный совет отмечает, что на основании выполненных соискателем исследований:

разработан новый методический подход для метода ПЦР в реальном времени для определения остаточной ДНК штамма-продуцента E.coli на примере промышленных серий активной фармацевтической субстанции генно-инженерного инсулина человеческого и генно-инженерного гистона Н1.3 человеческого. Метод заключается в использовании праймеров к геномной ДНК штамма-продуцента и значительно повышает чувствительность методики при анализе на основе праймеров к плазмидной ДНК штамма-продуцента;

предложен нетрадиционный подход по применению чувствительного нестандартного набора для определения проинсулина в активной фармацевтической субстанции генно-инженерного инсулина человеческого методом ИФА и разработан анализ проинсулина в сыворотке и плазме крови. Успешное применение рассматриваемого набора подтверждено данными валидационных испытаний;

доказана возможность применения полученных результатов в качестве общих методических рекомендаций для производителей лекарственных средств на основе генно-инженерных белков;

Теоретическая значимость исследования обоснована тем, что:

доказана целесообразность применения в ПЦР в реальном времени разработанных праймеров к геномной ДНК штамма-продуцента, поскольку праймеры к плазмидной ДНК не позволяют оценить реальное содержание тотальной ДНК;

применительно к проблематике диссертации результативно использован разработанный метод ПЦР в реальном времени с праймерами к геномной ДНК штамма, чувствительность анализа в 30 раз больше соответствующей величины метода с применением праймеров к плазмидной ДНК штамма-продуцента, что и определяет научную новизну исследований диссертанта;

разработаны праймеры к геномной ДНК штамма-продуцента, а именно, к фрагменту 16S РНК E.coli, соответствующие ампликонам с широким диапазоном длин, также разработаны флуоресцентные зонды с различными флуоресцентными красителями и гасителями флуоресценции.

изучены и оптимизированы параметры метода ПЦР в реальном времени, проведено сравнение двух методов с разными системами детекции сигнала, на основе интеркалирующего красителя SYBR GREEN I и флуоресцентных зондов TaqMan;

изложены результаты сравнения показателей разработанной методики ПЦР в реальном времени (SYBR GREEN I) и параметров коммерческого набора при анализе остаточной ДНК штамма - продуцента инсулина и гистона Н1.3 человека;

разработаны и внедрены в опытное биотехнологическое производство Института биоорганической химии им. академиков М.М. Шемякина и Ю.А. Овчинникова РАН результаты исследований диссертанта, которые успешно применяют для выявления остаточных ДНК и белков штаммов-продуцентов при контроле качества активных фармацевтических субстанций. На основе результатов данных исследований была разработана производственная документация, стандартные операционные процедуры для методик ПЦР, ПЦР в реальном времени и ИФА;

определены перспективы практического использования полученных методов различными производителями генно-инженерных лекарственных препаратов, для широкого спектра штаммов-продуцентов E.coli;

представлены методические рекомендации по применению набора для ИФА для анализа проинсулина в сыворотке и плазме крови для определения проинсулина в активной фармацевтической субстанции, особенно при анализе субстанций с низким содержанием проинсулина, менее 1 нг/мг;

Оценка достоверности результатов исследования выявила:

результаты получены на сертифицированном и квалифицированном оборудовании на основе независимых серий экспериментов, результаты статистически обработаны, показана воспроизводимость полученных соискателем результатов;

использовано сравнение авторских данных и данных, полученных ранее по рассматриваемой тематике;

использованы современные методики статистической обработки экспериментальных данных;

Личный вклад соискателя состоит в непосредственном участии соискателя в получении исходных данных и научных экспериментах, личном участии соискателя в апробации и технологическом внедрении результатов исследования, обработке и интерпретации экспериментальных данных, выполненных лично автором, подготовке основных публикаций по теме диссертационной работе.

В диссертации решены основные вопросы поставленной научной задачи, она соответствует критерию внутреннего единства, что подтверждается наличием последовательного плана исследования и непротиворечивой методологической платформы и взаимосвязанностью выводов.

Диссертация соответствует п. 9 паспорта специальности 03.01.06 – биотехнология (в том числе бионанотехнологии), поскольку полученные результаты представляют интерес для технологических разработок по внедрению чувствительных и специфичных методов ПЦР в реальном времени и ИФА в биотехнологическое производство жизненно необходимых препаратов на основе генно-инженерных белков, применяемых в терапии диабета и онкологических заболеваний.

На заседании 12 декабря 2016 года диссертационный совет принял решение присудить Ковалевой Екатерине Викторовне учёную степень кандидата химических наук.

При проведении тайного голосования диссертационный совет в количестве 19 человек (из них 5 докторов наук по профилю рассматриваемой диссертации 03.01.06), участвовавших в заседании, из 27 человек, входящих в состав совета, проголосовали: за присуждение учёной степени - 18, против присуждения учёной степени - 0, недействительных бюллетеней – 1.

Зам. председателя диссертационного совета,

д.х.н., проф. Миронов А.Ф.

Ученый секретарь диссертационного

совета, к.х.н., с.н.с. Лютик А.И.

7

Характеристики

Тип файла документ

Документы такого типа открываются такими программами, как Microsoft Office Word на компьютерах Windows, Apple Pages на компьютерах Mac, Open Office - бесплатная альтернатива на различных платформах, в том числе Linux. Наиболее простым и современным решением будут Google документы, так как открываются онлайн без скачивания прямо в браузере на любой платформе. Существуют российские качественные аналоги, например от Яндекса.

Будьте внимательны на мобильных устройствах, так как там используются упрощённый функционал даже в официальном приложении от Microsoft, поэтому для просмотра скачивайте PDF-версию. А если нужно редактировать файл, то используйте оригинальный файл.

Файлы такого типа обычно разбиты на страницы, а текст может быть форматированным (жирный, курсив, выбор шрифта, таблицы и т.п.), а также в него можно добавлять изображения. Формат идеально подходит для рефератов, докладов и РПЗ курсовых проектов, которые необходимо распечатать. Кстати перед печатью также сохраняйте файл в PDF, так как принтер может начудить со шрифтами.

Список файлов диссертации