Отзыв официального оппонента Василова Р.Г. (1091780)
Текст из файла
отзыв официального оппонента Василова Раифа Гаяновича на диссертационную работу Ковалевой Екатерины Викторовны <<разработка и применение методов ПЦР и ИФА для анализа остаточной ДНК и белков штаммов-продуцеитов в биофармацевтических субстанциях», представленную на соискание ученой степени кандидата химических наук по специальности 03.01.06 — Биотехнология (в том числе бионанотехнологии) Актуальность избранной диссертантом Ковалевой Е.В темы не вызывает сомнений, поскольку работа посвящена разработке методов определения остаточных белков и ДНК в биофармацевтнческих субстанциях.
На данном этапе развития фармацевтической промышленности в России и все большей потребности в разработке и внедрении в производство биофармацевтических препаратов, получаемых с использованием техники рекомбинантной ДНК, необходимо наличие современных надежных, воспроизводимых методов подтверждения качества таких лекарственных средств. Одними из таких важньгх показателей качества являются примеси клетки штамма-продуцента, превышение порогового уровня которых„может приводить к нежелательным последствиям для организма человека.
Поэтому разработка и внедрение метода анализа остаточной ДНК клетки-хозяина в активных фармацевтических субстанциях (АФС) является весьма актуальной работой. Методы анализа остаточной ДНК разрабатывались на примере двух АФС вЂ” инсулина человеческого генно-инженерного и Н1.3 бисметно нилгистона человеческого генноинженерного производства ИБХ РАН. Выбор этих АФС определялся спецификой их применения: препараты инсулина являются препаратами пожизненного, постоянного использования, а препараты гистона, которые на данные момент находятся в стадии разработки, будут применяться для лечения онкобольных с неходжкинскими лимфомами.
Поэтому необходимо подтверждение наличия минимальных допускаемых количеств примесей чувствительными методами для обеспечения максимальной безопасности этих лекарственных средств. Следует отметить, что за последние 5-7 лет появилось достаточное количество коммерческих наборов для количественного определения остаточных примесей клеток штаммов-продуцентов в биофармацевтических АФС. Эти наборы имеют необходимую чувствительность и универсальность для анализа примесей остаточных белков н ДНК в АФС, и их очень удобно использовать при разработке технологии получения и контроля качества нового или воспроизводимого лекарственного средства. Однако при запуске производства промышленных серий генно-инженерных препаратов следует иметь свой, более чувствительный и специфический метод определения примесей.
Именно этот момент продемонстрирован в представленной работе, где проведено подробное исследование условий проведения анализа методом ПЦР в реальном времени и сравнение полученных результатов с результатами с применением коммерческих наборов. В отличие от существующих методик, диссертантом Ковалевой Е.В.
разработаны условия анализа, которые позволяют увеличить чувствительность метода в 30 раз, что дает возможность производителям на порядок снизить количество остаточной ДНК и гарантировать более высокое качество АФС, что и определяет научную новизну и практическую значимость работы. Степень обоснованности научных положений, выводов и рекомендаций. Для выбора условий анализа остаточной ДНК в АФС с таким уровнем чувствительности проведена большая работа, а именно исследовано использование в реакции различных праймеров, различных способов детекции, получен и охарактеризован стандартный образец ДНК, оптимизированы способы п робо подготовки в соответствии с особенностями исследуемых АФС. При этом приведенные результаты по исследованию положительных и отрицательных контрольных (стандартных) образцов, позволяют сделать достоверные выводы по результатам всей работы.
Приведение в работе ссылок и цитат на российскую и европейскую нормативную документацию по требованиям к контролю качества лекарственных средств свидетельствуют о том, что диссертантом была поставлена задача создания метода анализа, применимого для реальных биофармацевтических производств. И такое внедрение в практику показано Ковалевой Е.В. при испытании с помощью разработанного метода анализа промышленных серий АФС инсулина и гистона. Можно сказать, что диссертация Ковалевой Е.В.
представляет не только разработанный метод анализа для конкретных АФС, но дает общие методические подходы для разработки специфического, чувствительного метода анализа остаточной ДНК для биофармацевтических АФС. Вторая часть работы посвящена способу анализа остаточных количеств проинсулнна в АФС инсулина генноинженерного, валидации метода иммуноферментного анализа (ИФА) с использованием двух коммерческих наборов.
Следует отметить, что набор, производства Санкт-Петербурга «Алкор-био» предназначен именно для определения остаточного проинсулина в АФС генно-инженерного инсулина и рекомендован МЗ РФ, а немецкий набор ВКб-Рго1пзийп — для анализа проинсулина в сыворотке крови. В работе Ковалевой Е.В. на основании данных по сравнительной валидации метода анализа с обоими наборами убедительно показано, что набор УЖО имеет более высокую чувствительность и достоверно определяет до 0,05 нг проинсулина в АФС инсулина. Это свидетельствует применимости этого набора для контроля качества АФС инсулина и о возможности детекции меньших количеств проинсулина, а значит возможности снижения этой примеси при производстве генно-инженерного инсулина.
В целом диссертационная работа Ковалевой Е.В. имеет традиционную структуру и состоит из введения, литературного обзора, описания экспериментальной части, результатов и их обсуждения, выводов и списков опубликованных ей работ и цитируемой литературы. Литературный обзор охватывает большой круг вопросов, а не только теоретические основы используемых в работе методов. Описаны технологические аспекты производства АФС инсулина и гистона, что свидетельствует о понимании диссертантом взаимосвязи производства и контроля качества лекарственных средств. Именно в этом ключе рассмотрены подходы к анализу рисков на фармацевтическом производстве и политике валидации, в частности, валидации аналитических методик.
Литературный обзор написан понятным языком, все приводимые данные подкреплены соответствующими ссылками на литературные источники. К сожалению, как в литературном обзоре, так и во всей работе допущено много опечаток. В экспериментальной работе подробно описаны методы работы, что позволяет быть уверенным в возможности их воспроизведения по такому описанию. Раздел «Результаты и их обсуждение» логично поделен на разделы, соответствующие этапам работы и соответственно выводам, сделанным по каждому разделу. Полученные результаты достоверны, грамотно интерпретированы. Выводы четко сформулированы, обоснованы и логично вытекают из представленных результатов.
Подводя итог рассмотрению диссертационной работы Ковалевой Е.В., можно с уверенностью утверждать, что поставленные цели были достигнуты в полном объеме. Вынесенные на защиту положения полностью подтверждены результатами проведенных экспериментов. К замечаниям по существу можно отнести: 1) не совсем удачную формулировку темы диссертационной работы. Безусловно, и метод ПЦР в реальном времени, и метод ИФА давно известные и разработанные методы. Корректнее было бы говорить о разработке метода анализа остаточной ДИК и проинсулина в АФС; 2) недостаточная статистическая обработка полученных результатов при анализе промышленных серий АФС инсулина и гистона. Требованием фармацевтической системы качества при проведении контроля качества является статистическая обработка результатов по крайней мере трех независимых определений.
Сделанные замечания не снижают значимость диссертационной работы. Василов Раиф Гаянович, д.б.н. по специальности 14.00.36 — Аллергология и иммунология Заведующий отделом Биотехнологии и Биоэнергетики Курчатовского комплекса НБИКС-технологий НИЦ «Курчатовский Институт» е-ша11: Чаз11оч КО®пгсЫ.гп тел. 8(499)196-7100(32-04) Подпись сотрудника НИЦ «Курчатовский Институт» Василова Р.Г.
заверяю НИЦ «Курчатовский Институт», ффффф~,чф.'..,,:;:;ъ"..: "'.;, ~~к С.Ю. Стремоухов е бюджет ' ""' ение «Национальный исследовательский центр «Курчатовский институт» (НИЦ «Курчатовский институт») 123182, Россия, г. Москва, пл. Академика Курчатова, д. 1 Главный ученый секретарь Адрес: Федеральное государственно Телефон: +7 (499) 196-9539 е-ша(1: лги®пгсЫ.гп Таким образом, диссертация Ковалевой Е.В. «Разработка и применение методов ПЦР и ИФА для анализа остаточной ДНК н белков штаммов-продуцентов в биофармацевтическнх субстанциях» на соискание ученой степени кандидата наук является законченной научно- квалификационной работой, в которой представлены данные по разработке и технологическому внедрению в опытное биотехнологическое производство чувствительных и специфичных методов ПЦР в реальном времени и ИФА, и соответствует п. 9 «Положения о порядке присуждения ученых степеней».
Автор диссертационной работы Ковалева Е.В. заслуживает присуждения ученой степени кандидата химических наук по специальности 03.01.06 — Биотехнология (в том числе бионанотехнологии). Список публикаций официального оппонента, доктора биологических наук, профессора Василова Раифа Гаяновича 1Национальный исследовательский центр «Курчатовский институт») 1.
Я1ере1ш Р., КоглпЫп М., ЧапуизЬ1па А., А11рег А., Вопзоч Х., Чая1оч К., УЬи1соч 1Ч., Бокоч Р., Ргаззо1оч Ч., бяМ1ш Х., УЬачогоп1гоч А., В1ш11аг В., Вихйп А. — Мо1еси1ах рагЬччау асйчагюп Геа~агез 1ш1сес1 МГЬ Ггапяйоп йош поппа1 за го ргппагу апй шегазгайс ше1апошаз ш 1пппап // Опсогагйеп 2016.
Ч. 7. № 1. Р. 656-670. 2. БЬаг1со Р.Б., БЬароча1оча А.А., Тзудап1соча Б.Ч., Копюча А Ч., Вои1у81па Е.Б., Тез1уи1г А.В., Оогочгзеч Р.М., Ь1ашзагаеч Х.В., К1щша1г Т:Ч., Хебо1ихЫго А.Ч., Чая1оч К.б.— Ргай йепоше зег1иепсе оТ "На1отопаз сЬ отаг/гейисепз" зггаш АОО 8-3, а Ьа1оаПса11рЬ111с СЬгошаге- апй Бе1еп1ге-гедисш8 ОапипаргогеоЬасгепиш // Оепоше Ашюипс. 2016. Ч.
4. №2. рй: е00160-16. 3. Пожидаев В.М., Сергеева Я.Э., Горин К.В., Бадранова Г.У., Готовцев П.М., Борголов А.В., Василов Р.Г. — Определение степени конверсии продуктов микробиологического синтеза в биодизель методом газовой хроматографии // Журнал аналитической химии. 2016. Т.
71. № 6. С. 653-659. 4. Готовцев П.М.„Юзбашева Е.Ю., Горин К.В., Бутылин В.В., Бадранова Г.У., Перковская Н.И., Мостова Е.Б., Намсараев З.Б., Руднева Н.И., Комова А.В., Василов Р.Г., Синеокий С.П. — Иммобилизация микробных клеток для биотехнологических производств.
Современные решения и перспективные технологии // Биотехнология. 2015. № 2. С. 33-45. 5. Готовцев П.М., Воробьев В.В., Мигалев А.С., Бадранова Г.У., Горин К.В., Решетилов А.Н., Василов Р.Г. — Биоэнергетика для автономных роботов. Перспективные решения и современное состояние // Вестник биотехнологии и физико-химической биологии им. Ю.А. Овчинникова.
2015. Т. 11. № 2. С. 49 — 58. 6. Пожидаев В.М., Горин К.В., Ульянова Ю.В., Савин К.А., Сергеева Я.Э., Комова А.В., Борголов А.В., Василов Р.Г. — Современные технологии получения биодизельного топлива // Вестник биотехнологии и физико-химической биологии им. Ю.А. Овчинникова. 2015.
Т. 11. № 3. С. 20-39. 7. ЧепЬи~а 1., А11рег А., Яппгзоча М., КЬо1ос1е~йо Я,, БЬере1ш П., Вог1зоч Х., Ма1а1гЬоча О., Уая1оч К., Копппапгзеч Я.,,г,Ьачогоп1гоч А., Впхйп А. — СогпЬшагог1а1 Ь18Ь-гЬгои8Ьрпг ехрег1шепга! апд Ью!пГоппайс арргоасЬ Ыепг16ез шо1есп1аг рагЬччауз 1ш1гед чч1гЬ 1Ье зепяйч1гу го апйсапсег гаг8ег йп8в // Опсогаг8ег. 2015 Ч. 6. № 29.
Р. 27227 — 27238. 9. Василов Р. Г., Решетилов А. Н., Шестаков А. И. — Биотопливные элементы // Природа. 2013. № 12. С. 65-70. Заведующий отделом Биотехнологии и Биоэнергетики Р.Г. Василов Подпись сотрудника НИЦ «Курчатовский Институт» Василова Р.Г. заверяю Главный ученый секретарь ,~Фаь НИЦ «Курчатовский Институт», к.ф-м 1Р„",...„,",:.! .. ' ',Л л ~ -;~,:.,"'::::,.:":-'-' "' "''=,;.:-.=::А С.Ю. Стремоухов 8. Оогочгзеч Р.М., Оопп К.У., Вшу!ш Ч Ч., Вайгапоча ОЛЗ., Ь!аптзагаеч Х.В., Кошоча А Ч.„ Чав11оч К.О., УпхЬазЬеча ЕХ., Рег1гочз1гауа Х.1., Мозгоча Е.В., ЯпеоЫ! Б.Р., Кис!печа Ь!.1.
— 1пипоЬ111хаг1оп оГ ппсгоЬ1а1 се11в 1ог ЬюгесЬпо1о81са! ргойисг1оп: шог1егп зо1пйопз апг! Ргош1яп8 ГесЬпо1о81еа // Арр1. ВюсЬеш. М1сгоЬю1. 2015. Ч. 51. № 8. Р. 792 — 803. .
Характеристики
Тип файла PDF
PDF-формат наиболее широко используется для просмотра любого типа файлов на любом устройстве. В него можно сохранить документ, таблицы, презентацию, текст, чертежи, вычисления, графики и всё остальное, что можно показать на экране любого устройства. Именно его лучше всего использовать для печати.
Например, если Вам нужно распечатать чертёж из автокада, Вы сохраните чертёж на флешку, но будет ли автокад в пункте печати? А если будет, то нужная версия с нужными библиотеками? Именно для этого и нужен формат PDF - в нём точно будет показано верно вне зависимости от того, в какой программе создали PDF-файл и есть ли нужная программа для его просмотра.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
