Диссертация (1140411), страница 8
Текст из файла (страница 8)
Во 2-й группе материал былполучен от 12 пациентов 8 – 17 лет обоих полов с ВД грудной клетки, в 3-й – от12 пациентов 9 – 17 лет обоих полов с КД грудной клетки; в каждой из этих двухгрупп материал был взят при реконструктивной торакопластике, выполненной вГБУЗ города Москвы НИИ Неотложной детской хирургии и травматологииДепартамента здравоохранения города Москвы3.
У всех пациентов были полученодобровольное согласие на морфологическое исследование операционногоматериала. В исследование не были включены пациенты или умершие с травмамигрудной клетки, патологией органов грудной клеткизаболеваниямиопорно-двигательногоаппаратаи с системными(рахит,злокачественныеновообразования и др.). Демографические характеристики исследуемых группприведены на рисунке 2 и в таблице 4.__________________________________Примечания1Автор приносит благодарность д.м.н., проф. Шехтеру Анатолию Борисовичу за помощьв организации и проведении исследований2Автор приносит благодарность судебно-медицинскому эксперту Кильдюшову ЕвгениюМихайловичу за предоставленный секционный материал.3Авторприноситблагодарностьк.м.н.ПлякинуВладимирупредоставленные клинические данные и операционный материал.Анатольевичуза41Количество человек1412108Муж.6Жен.4Всего20Контрольная группаВДКДРисунок 2 – Диаграмма распределения детей в исследуемых группах по полу.Таблица 4 - возрастной состав детей в исследуемых группахВозраст (лет)ИсследуемыегруппыВсего891011121314151617Контроль102002301110ВД111001222212КД010203212112Всего223206735434Всего в исследовании были изучены реберные хрящи, взятые от 34 детей(по 12 в группах с ВД и КД грудной клетки и 10 в группе без деформаций).
Вгруппе контроля было 6 девочек и 4 мальчика от 8 до 17 лет, в группе с ВД – 5девочек и 7 мальчиков от 8 до 17 лет, с КД – 6 девочек и 6 мальчиков от 9 до 17лет.В группе с ВД грудной клетки только у двух (16,67 %) детей отмечаласьасимметричная форма деформации. В группе с КД грудной клетки у одного(8,3 %) ребенка была выявлена «грудь надувшегося голубя», еще у одного (8,3 %)- асимметричная форма деформации, у остальных (83,4 %) детей отмечаласьсимметричная пирамидная форма КД грудной клетки.42В ходе предоперационного обследования в группах с ВД и КД пациентыбыли обследованы на предмет клинических признаков ДСТ по Кадуриной Т.И. исоавторам [12].
В группе с ВД и КД грудной клетки у всех детей, помимо наличиядеформации, были обнаружены клинические признаки системного вовлечениясоединительной ткани других органов и систем (см. таблицы 5 и 6).Таблица 5 - внешние признаки ДСТ у детей с ВД и КД грудной клеткиКоличество детей спризнаком абс. (в %)Внешние признаки ДСТВДКД5 (41,7 %)6 (50 %)Сколиоз6 (50 %)4 (33,3 %)Кифоз1 (8,3 %)1 (8,3 %)Гипермобильность суставов4 (33,3 %)2 (17 %)Hallux valgus (пяточно-вальгусная косолапость)1 (8,3 %)1 (8,3 %)Арахнодактилия6 (50 %)5 (41,7 %)Другая деформация грудной клетки0 (0 %)0 (0 %)Плоскостопие6 (50 %)5 (41,7 %)ДолихостеномегалияГиперпигментация кожинадостистымипозвонковПовышенная растяжимость кожиЭкхимозы, петехии, носовые кровотеченияКелоидные рубцыАтрофические стрииотростками 1 (8,3 %)0 (0 %)5 (41,7 %) 4 (33,3 %)4 (33,3 %) 4 (33,3 %)6 (50 %)4 (33,3 %)5 (41,7 %) 4 (33,3 %)«Натоптыши» на тыльной поверхности стоп0 (0 %)0 (0 %)Видимая венозная сеть3 (25 %)4 (33,3 %)Аномалии прорезывания зубов4 (33,3 %) 4 (33,3 %)Диастаз прямых мышц живота1 (8,3 %)1 (8,3 %)Грыжа пупочная4 (33,3 %)6 (50 %)3 (25 %)3 (25 %)Грыжа паховая/мошоночнаяМышечная гипотония7 (58,3 %) 8 (66,7 %)43Таблица 6 - висцеральные признаки ДСТ у детей с ВД и КД грудной клеткиКоличество детей сВисцеральные признаки ДСТпризнаком абс.
(в %)ВДКДОстеопения выраженная/умеренная3 (25 %)2 (16,7 %)Пролапс митрального клапана (все типы)6 (50 %)5 (41,7 %)Ювенильный остеохондроз5 (41,7 %) 5 (41,7 %)Вертебро-базилярная недостаточность4 (33,3 %)3 (25 %)3 (25 %)2 (16,7 %)5 (41,7 %)3 (25 %)3 (25 %)2 (16,7 %)Другие малые аномалии сердцаНестабильность шейного отдела позвоночникаМальформация сосудовПатология органов зренияДискинезия желчевыводящих путей на фоне аномалииразвития желчного пузыряРасширение корня аорты7 (58,3 %) 5 (41,7 %)3 (25 %)2 (16,7 %)2 (16,7 %) 1 (8,3 %)Нефроптоз и/или птозы других органов3 (25 %)2 (16,7 %)Рефлюксная болезнь3 (25 %)2 (16,7 %)Спонтанный пневмоторакс1 (8,3 %)0 (0 %)Мегаколон и/или долихосигма2 (16,7 %) 1 (8,3 %)В группе с ВД грудной клетки у 9 из 12 детей (75 %), помимо наличиядеформации грудной клетки, были выявлены патологии со стороны других (двухи более) органов и систем.
У 8 (66,7 %) из них было отмечено наличиедиагностически значимого числа баллов при оценке внешних признаков(см. таблицы 2 и 5), при этом только у 3 (25 %) из них отмечалось диагностическизначимое число баллов при оценке висцеральных признаков (см. таблицы 3 и 6).В группе с КД грудной клетки у 8 из 12 детей (66,7 %), помимо наличиядеформации грудной клетки, также отмечались патологии со стороны других(двух и более) органов и систем.
У 7 (58,3 %) из них было отмечено наличиедиагностически значимого числа баллов при оценке внешних признаков44(см. таблицы 2 и 5), при этом только у 2 (16,7 %) из них отмечалосьдиагностически значимое число баллов при оценке висцеральных признаков(см. таблицы 3 и 6).В группах с ВД и КД грудной клетки только у 2 детей в каждой группе(по 16,67 %) был отягощен наследственный анамнез (деформации грудной клеткипо линии отцов).В группе контроля на аутопсии признаки у двух (20 %) детей былиобнаружены сосудистые мальформации.2.2 Методы исследования2.2.1 Светооптические и гистохимические методыГистологическое исследование проводили на базе кафедры патологическойанатомии имени академика А.И.
Струкова и лаборатории экспериментальнойморфологии Института регенеративной медицины ФГАОУ ВО Первый МГМУим. И.М. Сеченова (Сеченовский университет) Минздрава России. ДлягистологическогоисследованияфрагментытканейдекальцинироваливElectrolytic decalcifying solution («Bio Optica», Италия) в течение суток,фиксировали в растворе 10% нейтрального формалина, дегидратировали изаливали в парафиновые блоки. Для улучшения качества срезов в парафиндобавляли модификатор ГИСТОМИКС® ("БиоВитрум", Россия). Из всехобразцов изготавливали поперечные серийные микротомные срезы толщиной 4 –5 мкм (по 8 срезов на блок).
Депарафинированные срезы регидратировали вбатарее спиртов. Полученные срезы окрашивали гематоксилином и эозином,пикросириусом красным, а также по методу Маллори в модификации Gallego наколлагеновые волокна, толуидиновым синим на кислые ГАГ. После заключения всинтетическую среду «Shandon mountTM» (США) препараты изучали при помощисветовой, фазово-контрастной, темнопольной и поляризационной микроскопий.Исследование, анализ и фотографирование гистологических препаратовпроводили с использованием микроскопа «LEICA DM4000 B LED», оснащенного45цифровой видеокамерой «LEICA DFC7000 T» и программного обеспечения «LASV4.8» (Leica Microsystems, Швейцария).Для иммуногистохимического (ИГХ) исследования, нелинейной оптической(НЛОМ),сканирующейэлектронной(СЭМ)иатомно-силовой(АСМ)микроскопий использовали серийные срезы (по 4 среза на каждый метод) суказанных выше парафиновых блоков.2.2.2 Иммуногистохимическое исследованиеИГХ-исследование проводили на базе ФГБУ «НМИЦ АГП им.
В.И.Кулакова» Минздрава России. Для ИГХ-исследования парафиновые срезытолщиной 4-5 мкм наносили на адгезивные полилизиновые стекла. Далее срезысушили при температуре 37 °С в течение 18 часов, а затем депарафинировали ирегидратировали в батарее спиртов нисходящей концентрации: 95, 80 и 70 ‰ (вкаждом растворе по 2 минуты). Восстановление антигенной активностипроводили в модуле предподготовки PT Link («Dako», Дания) при температуре97 °С в течение 20 минут в 10 мМ цитратном буфере рН 6,0. Затем охлажденныедо 65 0С срезы промывали фосфатным буфером и обрабатывали гиалуронидазой(64 условных единиц, «НПО Микроген», Россия) в течение часа при 37 0С. Дляблокирования эндогенной пероксидазы срезы помещали во влажные камеры (дляпредотвращения высыхания) и инкубировали 15 минут в 3 % растворе перекисиводорода.Неспецифическоебелковоесвязываниепервичныхантителсисследуемым материалом не допускали благодаря 10-минутной реакции сбелковым блоком (Protein Block, Thermo scientificTM, США) при комнатнойтемпературе.
В исследовании использовали следующие первичные антитела:мышиные моноклональные антитела к коллагену человека I типа (клон COL-1,разведение 1 : 4000, GeneTex, США), кроличьи поликлональные антитела кколлагену человека II типа (разведении 1 : 20, ИМТЕК, Россия) и мышиныемоноклональные антитела к коллагену человека III типа (клон FH-7A, разведение1 : 8000, GeneTex); реакцию проводили в течение 30 минут при комнатнойтемпературе. Также использовали вторичные антитела (HRP rabbit/mouse, DakoREAL EnVision).
Для визуализации мест связывания антител с антигенами46использовали реакцию окисления субстрата 3,3-диаминобензидина (ДАБ)пероксидазойхренавприсутствииперекисиводородасобразованиемводонерастворимого конечного продукта коричневого цвета (Dako REALEnVision). Для правильной постановки ИГХ-реакций ставили положительные иотрицательные контроли. В качестве отрицательных контролей брали образцыисследуемых срезов, которые подвергали стандартной процедуре ИГХ-реакции,но без добавления первичных антител. Положительные контроли для каждогоантитела выбирали в соответствии со спецификациями от фирмы производителя(препарат кожи для коллагенов I и III типа, хондроциты для коллагена II типа).После проведения ИГХ-реакций срезы контрастировали гематоксилином Майера(Sigma-Aldrich, США) и заключали в синтетическую среду «Shandon mountTM»(США).
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
