Диссертация (1091859)
Текст из файла
ОглавлениеСписок сокращений......................................................................................................................5Введение.........................................................................................................................................61. Литературный обзор...............................................................................................................91.1. Тимозины и их свойства. Тимозин бета 4 .................................................................................91.2.
Структура Тβ4 ..............................................................................................................................101.3. Способы получения Тβ4 .............................................................................................................101.4. Ацилирование белков in vivo .....................................................................................................121.5. Биологическая активность Тβ4 ................................................................................................141.5.1. Кардиопротекторные свойства Тβ4......................................................................................................141.5.2. Tβ4 стимулирует ангиогенез и неоваскуляризацию ишемизированного миокарда ........................161.5.3.
Роль Tβ4 в развитии опухолей и метастазировании ...........................................................................171.5.4. Влияние Tβ4 на восстановление кожных покровов и рост волос......................................................181.6. Обзор молекулярных механизмов, регулируемых активностью Tβ4 ...............................191.7. Cтратегия контролируемого высвобождения вещества: способ доставки Tβ4 к тканям................................................................................................................................................................231.8. Сульфоксид Tβ4 (Tβ4SO)............................................................................................................251.9.
Активные аминокислотные фрагменты в составе молекулы Tβ4 ....................................261.10. Применение Tβ4 в клинике .....................................................................................................292. Собственные исследования ..................................................................................................302.1. Материалы и методы исследований ...............................................................................302.1.1.
Оптимизация и масштабирование лабораторного метода получениярекомбинантного Tβ4 человека до пилотного производства.....................................................302.1.1.1. Материалы ...........................................................................................................................................302.1.1.2. Приготовление буферных растворов ................................................................................................312.1.1.3. Выращивание инокулята штамма ER2566/ pERTEVrsTB4 для засева ферментёра......................312.1.1.4.
Культивирование штамма-продуцента ER2566/pERTEVrsTB4 в ферментёре ...........................322.1.1.5. Разрушение биомассы ........................................................................................................................322.1.1.6. Подбор условий осаждения балластных белков из осветлённого клеточного лизата..................332.1.1.7.
Масштабирование процесса температурной обработки клеточного лизата..................................332.1.1.8. Хроматографическая очистка гибридного белка .............................................................................332.1.1.9. Подготовка телец включения TEV-протеиназы...............................................................................332.1.1.10.
Поиск оптимального соотношения фермент/субстрат протеолитического расщеплениягибридного белка .............................................................................................................................................342.1.1.11. Масштабирование реакции протеолитического расщепления гибридного белка ......................342.1.1.12.
Хроматографическое разделение дезацетилтимозина бета 4 и остаточного белка ....................342.1.1.13. Определение условий ингибирования реакции ацетилирования дезацетилтимозина бета 4 ....352.1.1.14. Масштабирование реакции ацетилирования дезацетилтимозина бета 4 и очистка продуктовреакции на ОФ ВЭЖХ.....................................................................................................................................352.1.1.15. Аналитические методы контроля ....................................................................................................352.1.2.
Разработка способов получения аналогов Tβ4 в виде конъюгатов, устойчивых кдеградации в токе крови....................................................................................................................362.1.2.1. Материалы ...........................................................................................................................................362.1.2.2. Подбор условий проведения реакции ацилирования дезацетилтимозина бета 4 ангидридомгексановой кислоты .........................................................................................................................................362.1.2.3. Масштабирование реакции ацилирования деацетилтимозина бета 4 ангидридом гексановойкислоты .............................................................................................................................................................362.1.2.4.
Очистка моногексаноилтимозина бета 4 ..........................................................................................372.1.2.5. Подбор условий проведения реакции сиалирования дезацетилтимозина бета 4..........................372.1.2.6. Масштабирование реакции сиалирования дезацетилтимозина бета 4...........................................3722.1.2.7. Очистка моносиалированного Tβ4 ....................................................................................................372.1.2.8. Подбор условий проведения реакции ПЭГилирования дезацетилтимозина бета 4......................382.1.2.9.
Масштабирование реакции ПЭГилирования дезацетилтимозина бета 4 ......................................382.1.2.10. Очистка моноПЭГилированного Tβ4..............................................................................................382.1.2.11. Определение структуры модифицированного Tβ4 ........................................................................382.1.2.12. Тестирование стабильности аналогов Tβ4 и химически синтезированного Tβ4 сиспользованием сыворотки крови..................................................................................................................392.1.2.13. Аналитические методы контроля ....................................................................................................392.1.3.
Разработка интеин-опосредованного метода получения рекомбинантного Tβ4 изацетилированного гибридного белка in vivo..................................................................................402.1.3.1. Материалы ...........................................................................................................................................402.1.3.2. Приготовление питательных сред .....................................................................................................412.1.3.3. Приготовление буферных растворов ................................................................................................412.1.3.4. Cинтез олигонуклеотидов для клонирования...................................................................................412.1.3.5.
Создание рекомбинантной плазмиды pER–Tb4–Gyr.......................................................................422.1.3.6. Создание рекомбинантной плазмиды pER –Tb4Gyr–RBS ..............................................................432.1.3.7. Создание рекомбинантных плазмид pER–Tb4GyrA–AcAla и pER–Tb4GyrA–AcSer ...................432.1.3.8. Подбор условий ацетилирования in vivo...........................................................................................442.1.3.9. Оптимизация условий культивирования штамма-продуцента E.
coli С3030/pER–Tb4GyrA–AcSer .................................................................................................................................................................442.1.3.10. Аффинная хроматография гибридного белка.................................................................................452.1.3.11. ОФ ВЭЖХ..........................................................................................................................................452.1.3.12. Аналитические методы контроля ....................................................................................................452.1.3.13. Метод отбора клонов ........................................................................................................................462.1.3.14.
Методы трансформации ...................................................................................................................462.1.4. Эффективность рекомбинантного Tβ4 в спонтанной мышиной модели хроническогодерматита .............................................................................................................................................472.1.4.1. Материалы ...........................................................................................................................................472.1.4.2. Определение эффективности рекомбинантного Tβ4 в спонтанной мышиной моделихронического дерматита..................................................................................................................................472.2.
Результаты и обсуждение ................................................................................................482.2.1. Оптимизация и масштабирование лабораторного метода получениярекомбинантного Tβ4 человека до пилотного производства.....................................................482.2.1.1. Масштабирование стадии культивирования штамма-продуцента и стадии разрушенияклеточной биомассы ........................................................................................................................................492.2.1.2.
Осаждение балластных белков из осветлённого клеточного лизата..............................................492.2.1.3. Оптимизация и масштабирование стадии анионообменной хроматографии гибридного белка.502.2.1.4. Оптимизация и масштабирование стадии протеолитического расщепления гибридного белка.512.2.1.5. Оптимизация и масштабирование стадии очистки дезацетилтимозина бета 4.............................522.2.1.6.
Оптимизация и масштабирование стадии ацетилирования дезацетилтимозина бета 4 ...............542.2.2. Разработка способов получения аналогов Tβ4 в виде конъюгатов, устойчивых кдеградации в токе крови....................................................................................................................572.2.2.1. Ацилирование дезацетилтимозина бета 4 ангидридом гексановой кислоты ................................582.2.2.2. Сиалирование дезацетилтимозина бета 4 .........................................................................................602.2.2.3. ПЭГилирование дезацетилтимозина бета 4......................................................................................622.2.2.4.
Характеристики
Тип файла PDF
PDF-формат наиболее широко используется для просмотра любого типа файлов на любом устройстве. В него можно сохранить документ, таблицы, презентацию, текст, чертежи, вычисления, графики и всё остальное, что можно показать на экране любого устройства. Именно его лучше всего использовать для печати.
Например, если Вам нужно распечатать чертёж из автокада, Вы сохраните чертёж на флешку, но будет ли автокад в пункте печати? А если будет, то нужная версия с нужными библиотеками? Именно для этого и нужен формат PDF - в нём точно будет показано верно вне зависимости от того, в какой программе создали PDF-файл и есть ли нужная программа для его просмотра.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
