Заключение организации (1091844)
Текст из файла
УтВЕРжДАЮ: Первый проректор ский технологический ~".~ЙЗ(.)У"ВО «Маков $::,:::,.';.д.х'.н.;. и: Проко университет», в Николай Иванович 2017 г. ЗАКЛЮЧЕНИЕ федерального государственного бюджетного образовательного учреждения высшего образования «Московский технологический университет» по диссертационной работе очного аспиранта кафедры биотехнологии и промышленной фармации Института тонких химических технологий Макарова Дмитрия Александровича на тему «Разработка технологий получения рекомбинантного тимозина бета-4 человека и его аналогов», представленной на соискание ученой степени кандидата химических наук по специальности 03.01.06 — Биотехнология (в том числе бионанотехнологии) Диссертация Макарова Д.А. «Разработка технологий получения рекомбинантного тимозина бета-4 человека и его аналогов» выполнена в лаборатории биотехнологии Федерального государственного бюджетного учреждения науки «Институт биоорганической химии имени академиков М.
М. Шемякина и Ю. А. Овчинникова» РАН и на кафедре биотехнологии и промышленной фармации Института тонких химических технологий Федерального государственного бюджетного образовательного учреждения высшего профессионального образования «Московский технологический университет».
В 2011 г. окончил ФГБОУ ВПО «Московская государственная академия тонкой химической технологии им. М.В. Ломоносова» по специальности «Химическая технология и биотехнология». В 2014 г. окончил обучение в очной аспирантуре на кафедре биотехнологии и бионанотехнологии ФГБОУ ВПО «Московский государственный университет тонких химических технологий нм.
М.В. Ломоносова» по специальности «Биотехнология (в том числе бионанотехнологни)». Удостоверение о сдаче кандидатских экзаменов № 1721/725-2017 выдано «14» февраля 2017 года. Научный руководитель: Кандидат химических наук, старший научный сотрудник лаборатории биотехнологии Федерального государственного бюджетного учреждения науки «Институт биоорганической химии имени академиков М. М. Шемякина и Ю. А. Овчинникова» РАН Есипов Роман Станиславович.
Обсуждение диссертации Макарова Д.А. проводилось 28 сентября 2016 года на заседании кафедры биотехнологии и промышленной фармации ФГБОУ ВО «Московский технологический университет» (протокол № 2), На заседании присутствовали: зав. кафедрой, д.т.н., проф. Кедик С.А., д.х.н,, проф., академик РАН Швец В.И., доц., к.х.н. Сорокоумова Г.М., доц., к.х.н. Шастина Н.С, доц., к.х.н. Пшеничникова А.Б., доц., к.х.н.
Чудинов М.В,, доц., к.х.н. Кириллова Ю.Г., к.х.н., с.н.с. Лютик А.И., к.х.н., ст. преп. Еремин С.В., доц., к.х.н. Лукин А.Ю., к.х.н., н.с. Матвеев А.В., доц., к.х.н. Есипова О.В., доц., к.х.н. Панов А.В. В ходе обсуждения были заданы следующие вопросы: Вопросы д.т.н., проф. Кедика С.Ал 1) Почему для экспрессии целевого гена была использована система рЕТ32Ь(+)? Ответ 1: рЕТ система является одной из самых мощных систем, разработанных для клонирования и экспрессии целевого гена. Целевой ген при клонировании в рЕТ плазмиду оказывается под контролем сильного промотора из бактериофага Т7.
Экспрессия целевого гена обеспечивается наличиел< источника РНК-полимеразь> Т7 в клетке хозяине. РНК-полимераза Т7 настолько активна и селективна, что все ресурсы клетки-хозяина перенаправляются на экспрессию целевого . ена. При этом продукг<ия целевого белка может достигать более 50Ы от общего белка клепгки.
В данном случае система рЕТ321>(+), ко всему прочему, в качестве дополнительной белковой последовательности содержит тиоредоксин, который увеличивает продукцию и растворимость гибридного белка. 2) Какие еще дополнительные белковые последовательности кроме тиоредоксина закодированы в рЕТ32Ь(+) и их функции? Ответ 2: В данной плазмиде закодированы аффинные метки Н>з-Тас и Б-Тад, применяемые для выделения и очистки гибридного белка на стадии аффинной хроматографии, а также сайты узнавания протеиназ Тромбина и Энтерокиназы, которые гидролизуют пепп>идную связь в гибридном белке т> специфическому сайту. Данная процедура необходима для выделения целевого белка из гибридного. Вопросы доц., к.х.н. Н.С.
Шастиной: 1) Почему ПЭГилированные молекулы тимозина бета-4 на электрофореграмме располагаются в областях, которые не соответствуют их расчетным молекулярным массам? Ответ 1: Дело в том, что молекула ПЭГ обладает высокой гидрофильнос>пью и способна обволакивать х<олекулу белка, придавая ей совершенно новую электрофоретическую подвижность, Поэтому модифицированная молекуза тимозина бета-4 располагается в области 30 ьЯа, что не соответствует расчетной массе аналога 15 к11а. 2) По какому принципу происходит разделение молекул белков в полиакриламидном геле при проведении электрофоретического разделения по Лэммли? Отвепг 2: Разделение белков происходит под действием электростатического поля в зависимости от их молекулярной массы.
Перед нанесением на ПААГ в пробу добавляют меркаптоэтааол, который восстанавливает дисульфидные связи, и додецилсульфат натрия, который приводит к денатурации молекулы белка и придает ей отрицательньш" заряд, поэтому все молекулы белка имеют одинаковый удельный заряд и движутся от катода к аноду под дейспгвием электростатического поля. Вопрос доц., к.х.н.
Г.М. Сорокоумовой: 1) Вы показали, что химически ацетилированный тимозин бета-4 обладает биологической активностью, а как вы доказываете, что ацетилированный 1п >ччо тимозин бета-4 обладает ею? Ответ 1: Нз научной литературы известно, что тимозин бета-4 имеет динамичную, неструктурированную и подвижную конформацию. Анализ, проведенный методом кругового дихроизма, показал, что ТР4 в водном растворе в диапазоне рН 4,5-7,5 и диапазоне температур от 5 до 40 'С проявляет слабовыраженную вторичную структуру. Биологическая активность тимозина бета-4 определяется его первичной структурой, т,е.
активными участками в коротких пептидных последовательностях. Основываясь на наших собственных исследований и научной литературе, у нас нет сомнений, что полученный пептид обладает биологической активностью, поскольку его аминокислотнал последовательность совпадает с аминокислотной последовательностью человеческого нативного тимозина бета-4. Вопрос доц., к.х,н. Пшеничникова А.Б. 1) почему на стадии очистки гибридного белка ТВ4ОугА вы использовали дорогой хитиновый сорбент? Ответ 1: Использование хитиновой смолы является частью стандартной процедуры, описанной в руководстве по эксплуатации 1шрас1-ТЪТХ производителем интеиновой системы Хе~ч Епя1апд В1о1аЬз. Использование хитиновой смолы служит для достижения нескольких целей, а именно: быстрое и эффективное очищение гибридного белка от бактериальных белков, отщепление интеина от тимозина бета-4 и целевой очистки пептида для удаления интеина.
С оценкой работы выступили: В.И. Швец, Шастина Н.С., Сорокоумова Г.М. Они отметили, что работа Макарова Д.А. представляет собой весьма актуальный, охватывающий несколько объектов исследования, полностью завершенный научный труд. Результаты исследования опубликованы в ведущих журналах и были представлены на Международных научно-практических конференциях. Диссертацию Макарова Д.А. следует рекомендовать к защите на соискание ученой степени кандидата химических наук по специальности 03.01.06 — «Биотехнология (в том числе бионанотехнология)». После обсуждения на заседании кафедры принято заключение по диссертационной работе Макарова Д.А. Актуальность работы Открытие тимозинов в середине 19бО-х годов произошло в ходе исследований роли тимуса в развитии иммунной системы позвоночных. Тимозинами были названы небольшие белки, первоначально выделенные из вилочковой железы, но, как стало известно из дальнейших исследований, большинство из этих белков присутствует во многих тканях организма.
Среди тимозинов пептид тимозин бета 4 (ТР4) считается наиболее распространенным, наиболее изученным и, вероятно, наиболее биологически активным членом семьи бета тимозинов. Благодаря тому, что молекула Т1)4 является актин-связывающим пептидом, она регулирует полимеризацию актина, и, как следствие, регулирует клеточную миграцию, которая важна для процесса ангиогенеза, регенерации поврежденных тканей. В разных клеточных моделях и на уровне организма неоднократно было показано, что молекула Тр4 обладает уникальными кардиопротекторными свойствами, принимает участие в стимулировании ангиогенеза в условиях ишемии сердечной мышцы, блокирует в кардиомиоцитах проапоптотические каскады и, наоборот, активизирует внутриклеточные сигнальные пути, ответственные за выживаемость клеток в условиях стресса.
Характеристики
Тип файла PDF
PDF-формат наиболее широко используется для просмотра любого типа файлов на любом устройстве. В него можно сохранить документ, таблицы, презентацию, текст, чертежи, вычисления, графики и всё остальное, что можно показать на экране любого устройства. Именно его лучше всего использовать для печати.
Например, если Вам нужно распечатать чертёж из автокада, Вы сохраните чертёж на флешку, но будет ли автокад в пункте печати? А если будет, то нужная версия с нужными библиотеками? Именно для этого и нужен формат PDF - в нём точно будет показано верно вне зависимости от того, в какой программе создали PDF-файл и есть ли нужная программа для его просмотра.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
