Диссертация (1141395), страница 14
Текст из файла (страница 14)
10. Вид хроматограммы: система спирт 95% /25% аммиак (3:2):1 – исследуемый образец ИЛФ-лио ЛХС-1208, 2 – СОВС-1 (не наносится), 3 – СОВС-24.1.3. Выбор подвижных фаз для ТСХ ЛХС-1208 и Kollidon 17 PFПоскольку значительное влияние на разделение веществ в тонком слоесорбента оказывает растворитель, основной задачей данного исследованияявлялся выбор подвижной фазы (системы растворителей), обеспечивающейэффективное разделение компонентов ИЛФ-лио ЛХС-1208 с последующейих идентификацией.Для полученияподвижнойфазыиспользовалиследующие растворители: аммиак водный 25%, ацетон, бензол, бутанол,вода, гексан, ЛУК, метанол, пропанол-2, спирт 95%, хлороформ, этилацетат.Системы растворителей оценивали по величине удерживания Rf, количествуобнаруживаемых зон (пятен) на пластинке и времени пробега подвижнойфазы.Проявившиеся пятна в образцах идентифицируют относительно пятенвеществ-свидетелейихарактеризуютпорассчитываемой по формуле:Rf = Lв/Lф,величинеудерживанияRf,83где: Lв – расстояние от линии старта до центра хроматографической зоныисследуемого вещества, мм; Lф – расстояние от линии старта до линиифиниша элюента, мм [6].На данном этапе было изучено 12 типов элюирующих системразличного состава.
Как видно из полученных результатов, представленных втабл. 13, на разделение хроматографических зон влияет качественный составподвижной фазы, так как в системах с разным содержанием тех или иныхрастворителей,входящихвихсостав,наблюдаютсяразличныехроматографические картины.Таблица 13Эффективность подвижной фазы при ТСХ-анализе ИЛФ-лиоЛХС-1208 на хроматографических пластинках SorbfilЗначение RfРастворителиВремяанализа,минЛФ-лио ЛХС-1208СОВС-1СОВС-2ЛХС-1208Kollidon 17 PFацетон: этилацетат: вода (10:4:1)350,5300,5250бензол: ацетон (1:1)400000бензол: спирт 95% (1:1)300,6600,660н-бутанол: н-гексан (1:1)1800,3300,320пропанол-2: 25% аммиак (10:1)1600000пропанол-2: 25% аммиак: ацетон (2:1:3)1000,5800,590спирт 95%1800,7900,780спирт 95%: 25% аммиак (3:2)18000,6900,69хлороформ: метанол (5:1)900,7700,760хлороформ: спирт 95%: ЛУК (8:4:1)1000,7500,730этилацетат: спирт 95%: 25% аммиак (9:1:2)500,3600,35084Однако практически во всех системахприпросмотрехроматограмм в УФ-свете с нанесенными образцами помимо круглого пятнажелтого цвета, которое соответствует ЛХС-1208, наблюдалось хорошоочерченное круглое светло-желтое пятно на старте, которое соответствуетKollidon 17 PF (Rf=0).Система бензол/спирт 95% (1:1) была отобрана среди всех системрастворителей для определения ЛХС-1208 (Rf=0,66), поскольку процедура еепроведения является самой непродолжительной по времени – 30 мин.Система спирт 95% /25% аммиак (3:2) была выбрана для определенияKollidon 17 PF (Rf=0,69), т.к.
в этой подвижной фазе удалось поднять Kollidon17 PF от стартовой линии.С учетом того, что совместный анализ компонентов ИЛФ-лио ЛХС1208 затруднен, а каждая из этих систем растворителей подходит дляидентификации только одного из компонентов ИЛФ-лио ЛХС-1208, топредставляется целесообразным качественный анализ ЛХС-1208 и Kollidon17 PF проводить отдельно.4.1.4. Оценка пригодности хроматографических системПригодность системы – это характеристика аналитической методики,которая показывает надежность анализа в заданных условиях его проведения.Параметры пригодности системы обеспечивают применение метода в техслучаях, когда в процессе анализа возникают некоторые внутрилабораторныеизменения условий анализа [9].Оценкупригодностивыбранныххроматографическихсистемпроводили путем определения предела обнаружения вещества. В результатепроведенныхисследованийустановили,чтопределобнаружения(минимальное содержание анализируемого вещества, определяемого даннымметодом) ЛХС-1208 в системе бензол/спирт 95%(1:1) составил 1 мкг.Предел обнаружения Kollidon 17 PF в системе спирт 95% /25% аммиак (3:2)составил 1 мкг.85Оценкапригодностисистемы бензол/спирт 95% (1:1)Приготовление раствора исследуемого образца ИЛФ-лио ЛХС-1208К содержимому флакона ИЛФ-лио ЛХС-1208 добавляют 9 мл ДМСО иперемешивают.
Концентрация ЛХС-1208 в полученном образце 1,0 мг/мл.Приготовление СОВССОВС-1 – раствор ЛХС-1208 в ДМСО 1,0 мг/мл. Навеску ЛХС-1208 1,0 мграстворяют в 1 мл ДМСО.Методика проведения анализаНа линию старта хроматографической пластинки наносят пробы:1 – 5 мкл исследуемого образца ИЛФ-лио(ЛХС-1208 – 5,0 мкг, Kollidon 17PF – 335,0 мкг),2 – 5 мкл СОВС-1 (ЛХС-1208 – 5,0 мкг),3 – 1 мкл СОВС-1 (ЛХС-1208 – 1,0 мкг).После подсушивания на воздухе в течение 10-15 мин. пластинку снанесеннымипробамипомещаютвхроматографическуюпредварительно насыщенную смесью бензол/спирт 95%камеру,(1:1), плотнозакрывают крышкой и хроматографируют восходящим способом. Когдарасстояние от фронта растворителей до конца пластины составляет 1 см, т.е.после достижения фронтом элюента линии финиша (пробег 12 см),пластинку вынимают из камеры и высушивают в потоке теплого воздуха дополного удаления запаха растворителя.
ЛХС-1208 идентифицируют напластинке визуально по характерным желтым пятнам без использованияспецифических реактивов.Значения Rf при проверке пригодности системы растворителейбензол/спирт 95% (1:1) составили (рис. 11):1 – исследуемый образец ИЛФ-лио: ЛХС-1208 – 0,66;2 – СОВС-1 5,0 мкг – 0,66;3 – СОВС-1 1,0 мкг – 0,66.86Рис. 11. Оценка пригодности системы бензол/спирт 95% (1:1)для качественного анализа ЛХС-1208:1 – исследуемый образец ИЛФ-лио ЛХС-1208 (ЛХС-1208 – 5,0 мкг, Kollidon 17PF – 335,0мкг), 2 – СОВС-1 (ЛХС-1208 – 5,0 мкг), 3 – СОВС-1 (ЛХС-1208 – 1,0 мкг).Таким образом, хроматографическую систему бензол/спирт 95% (1:1)можно считать пригодной, если на пластинке напротив СОВС-1 (ЛХС-12081,0 мкг) видно округлое пятно желтого цвета.Оценка пригодности системы спирт 95% /25% аммиак (3:2)Приготовление раствора исследуемого образца ИЛФ-лио ЛХС-1208К содержимому флакона ИЛФ-лио ЛХС-1208 добавляют 9 мл ДМСО иперемешивают.
Концентрация ЛХС-1208 в полученном образце 1,0 мг/мл.Приготовление стандартных образцов веществ-свидетелей (СОВС)СОВС-2 – раствор Kollidon 17PF в ДМСО 67,0 мг/мл. Навеску Kollidon 17PF67,0 мг растворяют в 1 мл ДМСО.Методика проведения анализаНа линию старта хроматографической пластинки наносят пробы:1 – 5 мкл исследуемого образца ИЛФ-лио(ЛХС-1208 – 5,0 мкг, Kollidon 17PF – 335,0 мкг),872 – 5 мкл СОВС-1 (Kollidon 17PF – 335,0 мкг),3 – 1 мкл СОВС-1 (Kollidon 17PF – 67,0 мкг).После подсушивания на воздухе в течение 10-15 мин.
пластинку снанесеннымипробамипомещаютвхроматографическуюкамеру,предварительно насыщенную смесью спирт 95% /25% аммиак (3:2), плотнозакрывают крышкой и хроматографируют восходящим способом. Когдарасстояние от фронта растворителей до конца пластины составляет 1 см, т.е.после достижения фронтом элюента линии финиша (пробег 12 см),пластинку вынимают из камеры и высушивают в потоке теплого воздуха дополного удаления запаха растворителя. Для обнаружения Kollidon 17PFпластинку помещают в камеру, насыщенную парами йода, и выдерживаютоколо 1 мин до появления светло-желтых пятен.Значения Rf при проверке пригодности системы растворителей спирт95% /25% аммиак (3:2) составили (рис.
12):1 – исследуемый образец ИЛФ-лио: Kollidon 17PF – 0,69;2 – СОВС-1 335,0 мкг – 0,69;3 – СОВС-1 67,0 мкг – 0,69.Рис. 12. Оценка пригодности системы спирт 95% /25% аммиак (3:2)для качественного анализа Kollidon 17PF:1 – исследуемый образец ИЛФ-лио ЛХС-1208 (ЛХС-1208 – 5,0 мкг, Kollidon 17PF – 335,0мкг), 2 – СОВС-2 (Kollidon 17PF – 335,0 мкг), 3 – СОВС-2 (Kollidon 17PF – 67,0 мкг).88Такимобразом, хроматографическую систему спирт95% /25% аммиак (3:2) можно считать пригодной, если на пластинкенапротив СОВС-2 (Kollidon 17PF 67,0 мкг) присутствует хорошо очерченноесветло-желтое пятно.4.2. Разработка методики спектрофотометрического анализа ЛХС-1208 вИЛФ-лио4.2.1.ИзучениеспектральныххарактеристикЛХС-1208иегоидентификация (определение подлинности) в ЛФРазработку методики количественного определения ДВ в ЛФ ЛХС1208 начали с изучения электронного спектра поглощения (ЭСП).
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
