Диссертация (1141395), страница 16
Текст из файла (страница 16)
17). Для измерения оптическойплотности модельную смесь разводили аналогично ЛФ по методике,представленной в разделе 4.2.5.А.Уравнение регрессии для данной зависимости имеет вид у=0,3127х0,0006. О достаточно тесной линейной связи между концентрацией ЛХС1208 и оптической плотностью в диапазоне концентраций от 80 до 120%говорит близость коэффициента корреляции к 1, значение коэффициентакорреляции составило более 0,999 (табл. 18).96Таблица 17Составы модельных смесей для оценки методикиспектрофотометрического анализа ИЛФ-лио ЛХС-1208 по показателям«линейность» и «правильность»Состав%мг/мл(растворЛХС-1208 компонентовЛФ вДМСО)мгДМСО, мгKollidon 17 PF, мгМодельная смесь3410011018029051202,42,73,03,33,67,2165,0600,08,1165,0600,09,0165,0600,09,9165,0600,010,8165,0600,0Примечание.
Приготовление модельной смеси ИЛФ-лио ЛХС-1208. Точные навески всехкомпонентов, указанных в таблице 16, растворяют в 2,8 мл воды очищенной (объемполученного раствора 3 мл).Таблица 18Оценка линейности методики спектрофотометрическогоколичественного анализа ЛХС-1208Концентрация ЛХС-1208%мг/мл80901001101202,4002,7003,0003,3003,600Среднее значениеоптическойплотности, А0,7500,8430,9381,0311,125Статистические характеристикиНаклон прямой (b)Отрезок на оси ординат (а)Доверительный интервал (95%) bКоэффициент корреляции (R)Регрессия0,7490,8440,9371,0311,125Результаты0,3127-0,00060,3127±0,5900,999997Дополнительнымподтверждениемлинейностизависимостиисследуемых величин является графическое изображение регрессионнойО пт ич ес кая пл от нос т ь(А)прямой (рис.
18).21.51y = 0.3127x - 0.00060.5000.511.522.533.544.55Концентрация ЛХС -1208 (С ), мг/млРис. 18. Графическое изображение регрессионной прямой линейности методикиколичественного анализа ЛХС-1208 в ЛФ при 320 нмПравильность (точность)Для доказательства правильности аналитической методики проводиликоличественное определение активного вещества в модельных смесях,включающих все компоненты ЛФ и отличающихся только содержаниемЛХС-1208 (метод плацебо), с этой целью готовили по три модельные смесидля каждой из трех концентраций: 80, 100 и 120%.
Оценивали результатыанализа путем сравнения полученного результата с ожидаемым значениемвеличины (концентрация ЛП, мг/флакон).Оценку правильности методики на основе 9 результатов проводилипутем расчета процента восстановления (отклик), стандартного отклонения,коэффициента вариации, доверительного интервала среднего значения(Р=95%) и относительной погрешности среднего результата (табл. 19).Согласно представленным табл. 19 данным разработанную методикуспектрофотометрического анализа можно считать правильной, так какотклонения от среднего значения (100,03±0,13) укладываются в интервал98концентрацийЛХС-1208(8,1-9,9 мг/флакон), заявленных в проекте НДна ИЛФ-лио ЛХС-1208, и относительная погрешность среднего результата непревышает 1%.Таблица 19Оценка правильности методики спектрофотометрическогоколичественного анализа ЛХС-1208ЛХС-1208, мгСодержание ЛХС-1208 Найденноев модельной смеси, мг значение, мг18,108,128028,098,1038,118,0949,609,6110059,629,6369,609,62711,0411,02120811,0511,04911,0511,05Статистические характеристики, %Наименьшее значениеНаибольшее значениеСреднее значениеСтандартное отклонениеКоэффициент вариацииДоверительный интервалОтносительная погрешностьКонцентрация,%№пробыОтклик, %100,25100,1299,75100,10100,10100,2199,8299,91100,00Результаты99,75100,25100,030,1720,17100,03±0,130,13ПрецизионностьА.
Повторяемость (сходимость)Для изучения повторяемости (сходимости) аналитической методикисравнивали результаты, полученные в одной лаборатории, в одинаковыхусловиях, а именно с использованием одного и того же спектрофотометра,одним и тем же исследователем, в короткий промежуток времени. Испытаниепроводили на 6 образцах ИЛФ-лио ЛХС-1208 одной серии. Критерийприемлемости выражался величиной коэффициента вариации.На основании полученных данных (табл. 20) коэффициент вариациисоставил менее 1% (0,075%), что свидетельствует о незначительной99изменчивости вариационного ряда и прецизионности(сходимости)предложенной методики анализа в условиях повторяемости.Таблица 20Оценка повторяемости методики спектрофотометрическогоколичественного анализа ЛХС-1208№ образца123456Статистические характеристикиНаименьшее значение, мг/флНаибольшее значение, мг/флСреднее значение, мг/флСтандартное отклонение, мг/флКоэффициент вариации, %Доверительный интервал, мг/флОтносительная погрешность, %Содержание ЛХС-1208 во флаконе, мг9,2869,3059,3059,2989,3009,298Результаты9,2869,3059,2980,0070,0759,298±0,0070,075Б.
Внутрилабораторная (промежуточная) прецизионностьАнализ с целью определения внутрилабораторной (промежуточной)прецизионности производился в условиях работы одной лаборатории двумясотрудниками, на разных спектрофотометрах с целью показать, чтоаналитическаяметодикаобеспечиваетполучениесогласующихсярезультатов независимо от изменений внешних условий при использованииоднородныхпроб. Для определенияпромежуточной прецизионностиизмеряли содержание ДВ в 6 пробах, полученных в условиях работы однойлаборатории разными аналитиками в разные дни.При анализе результатов определения концентрацииЛХС-1208(мг/флакон) в различных условиях (табл.
21) обнаружено, что при сравнениитабличного значения критерия Стьюдента с рассчитанным (на основе данныханализа двух исследователей) видно, что расчетные значения значительноменьше, т.е. выполнялось неравенство tрас=0,5 < tтаб=2,23, что свидетельствуетоб отсутствии систематической ошибки измерений. Это обстоятельство100указывает на случайность различиймеждусреднимизначениямиистандартным отклонением результатов первого и второго исследователя.Такимобразом,установленапромежуточнаяпрецизионностьспектрофотометрической методики количественного определения ЛХС-1208в разработанной ЛФ.Таблица 21Оценка внутрилабораторной прецизионности методикиспектрофотометрического количественного анализа ЛХС-1208№ пробы123456Статистические характеристикиНаименьшее значение, мг/флНаибольшее значение, мг/флСреднее значение, мг/флДисперсия S2, мг/флСтандартное отклонение, мг/флКоэффициент вариации, %Доверительный интервал, мг/флОтносительная погрешность, %tтаб(95%;10)=2,23Содержание ЛХС-1208 во флаконе, мгАналитик 1Аналитик 29,2869,3019,3059,2929,3059,2979,2989,3039,3009,3019,2989,306Результаты9,2869,2929,3059,3069,2989,3004,7×10-54,9×10-50,00690,00700,0740,0759,298±0,00729,300±0,00700,0770,075tрас=0,5101ЗАКЛЮЧЕНИЕВ результате проведенных исследований разработаны методикикачественного ТСХ-анализа и количественного спектрофотометрическогоопределения ЛХС-1208 в ИЛФ и ИЛФ-лио.Определеныоптимальныеусловияхроматографированияипредложены системы растворителей, обеспечивающие наилучшее разделениекомпонентов ЛФ.
Для качественного анализа компонентов ИЛФ-лио ЛХС1208 выбраны две системы растворителей: бензол/спирт 95% (1:1) – дляобнаружения ЛХС-1208 (Rf=0,66), спирт 95% /25% аммиак (3:2) – дляобнаружения Kollidon 17 PF (Rf=0,69). Проведена оценка пригодностиуказанных хроматографических систем.При изучении абсорбционных характеристик ЛХС-1208 выявлено, чтоспектрпоглощенияраствораЛФ-лиоЛХС-1208идентиченспектрупоглощения субстанции ЛХС-1208 по положению максимумов и формекривой.
Установлено, что вспомогательные вещества, входящие в состав ЛФ,и ДМФА, используемый в качестве растворителя и раствора сравнения,практически не поглощают излучение в области максимумов поглощенияЛХС-1208. В качестве рабочей длины волны для анализа ЛХС-1208 в ИЛФ иИЛФ-лио выбрана полоса поглощения средней интенсивности с максимумом320±2 нм. Поглощение раствора ЛХС-1208 подчиняется закону БугераЛамберта-Бера: линейная зависимость значения оптической плотности отконцентрации ЛХС-1208 показана в интервале концентраций от 0,003 до0,010 мг/мл. Ошибка спектрофотометрического определения концентрацииЛХС-1208 в ИЛФ до и после лиофилизации составила менее 2%. Припомощи валидационной оценки установлено, что разработанная методикаколичественного анализа ЛХС-1208 является специфичной, линейной,правильной и прецизионной.102Глава 5.
Стандартизация и изучение стабильности в процессе храненияИЛФ-лио ЛХС-12085.1. Показатели качества для стандартизации ИЛФ-лио ЛХС-1208ДляразработкипроектаНДна«ЛХС-1208,лиофилизатдляприготовления раствора для инъекций 9 мг» требовалось определитькритерии, по которым следует контролировать качество данного препаратапосле получения и в процессе хранения. Для стандартизации данной ЛФсогласно ГФ XIII были выбраны следующие показатели качества: описание,растворимость, подлинность, количественное определение, однородностьдозирования, средняя масса содержимого флакона, значение рН, потеря вмассе при высушивании.
Приведенные критерии качества были приняты наоснованиирезультатов,полученныхвходеисследованияобразцовразработанной ЛФ, с учетом требований НД.Описание.Повнешнемувидувсенаработанныесериипрепаратапредставляли собой сухую пористую массу желтого цвета.Растворимость. При добавлении к содержимому флакона 2,8 мл воды иперемешивании в течение 10 мин образовывался однородный раствороранжевого цвета.Подлинность.Спектрофотометрический анализ (методика представлена в разделе4.2.5.Б.).
В области от 200 до 800 нм электронные спектры поглощениярастворов, приготовленных для количественного определения ЛХС-1208 вЛФ, имели максимумы поглощения при длинах волн: (287±2) и (320±2) нм.ТСХ-анализ (методика представлена в разделе 4.1.1). При использованиисистемы бензол/спирт 95%(1:1) на хроматограмме наблюдали округлоепятно желтого цвета на уровне СОВС-1 ЛХС-1208 (Rf=0,66). Прииспользовании системы спирт 95% /25% аммиак (3:2) и после помещенияхроматограммы в йодную камеру проявлялось хорошо очерченное светложелтое пятно Kollidon 17PF на уровне СОВС-2 (Rf=0,69).103Количественное определение ЛХС-1208 в ЛФ осуществляли методомспектрофотометрии с использованием раствора СО (методика представлена вразделе 4.2.5.Б.)Однородность дозирования.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
