Диссертация (1141395), страница 10
Текст из файла (страница 10)
Методика количественного анализаИЛФ-лио ЛХС-1208 представлена в разделе 4.2.Валидация методики спектрофотометрического анализа ЛХС-1208Валидацию методики спектрофотометрического анализа ЛХС-1208проводили по следующим характеристикам: специфичность, линейность,правильность (точность), сходимость (повторяемость), внутрилабораторная(промежуточная) прецизионность. Валидацию методики проводили всоответствии с ОФС.1.1.0012.15 «Валидация аналитических методик» [16],«Типовым руководством предприятия по производству лекарственныхсредств.
Валидация аналитических методик для производителей лекарств»55под редакцией В.В. Береговых [11] и «Руководствомдляфармацевтическойрекомендациипромышленности.Методическиепредприятийповалидации методик анализа лекарственных средств» под редакцией Н.В.Юргеля [65].Определение рН ИЛФ-лио ЛХС-1208ОпределениерНосуществляютметодомпотенциометриисиспользованием рН-метра [16].Методика определения значения рН ИЛФ-лио ЛХС-1208Для определения значения рН лиофилизата к нему добавляют 10 млводы очищенной, перемешивают до получения однородного гомогенногораствора и измеряют значение. Предварительно измеряют значение рН воды.Измерения проводят в интервале температур от 20 до 25°С.Методика определения потери в массе при высушиванииТочную навеску препарата (0,7 г) помещают в предварительновысушенный и взвешенный бюкс и сушат до постоянной массы в вакуумномсушильном шкафу над пятиокисью фосфора при комнатной температуре иостаточном давлении 5 мм рт.ст.
Потеря в массе не должна превышать 3%[16].2.3.5. Статистическая обработка данныхСтатистическую обработку полученных в ходе эксперимента данныхпроводят в программах Excel, Origin 6.1, руководствуясь ОФС.1.1.0013.15«Статистическая обработка результатов химического эксперимента» [16].56РЕЗУЛЬТАТЫСОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙГЛАВА 3. Разработка состава и технологии получения ИЛФ-лио ЛХС12083.1. Разработка состава ИЛФ ЛХС-12083.1.1. Определение максимальной концентрации ЛХС-1208 в ДМСОСубстанцияЛХС-1208нерастворимавводеибольшинствеорганических растворителей.
В экспериментах установлено, что субстанцияЛХС-1208хорошорастворимавДМСО,определяливозможнуюмаксимальную концентрацию ЛХС-1208 в 100% ДМСО с целью включенияданного органического растворителя в состав ЛФ. При проведении серииэкспериментов для оценки максимальной концентрации ЛХС-1208 в ДМСОготовили растворы ДВ в ДМСО в концентрациях от 1 до 10% (предельнодопустимая концентрация ДМСО для парентерального введения). Полноерастворение ДВ наблюдали в растворах с концентрацией 1–7% (в 1 млДМСО от 10 до 70 мг ЛХС-1208).
При превышении этой концентрации прихранении раствора в течение 1–2 ч выпадал осадок. В дальнейшем дляполучениямодельныхЛФиспользовалиминимальновозможнуюконцентрацию органического растворителя (5%), исходя из того, что длябиологическогоисследования(внутривенноевведение)концентрациясубстанции ЛХС-1208 в растворе должна составлять не менее 2 мг/мл.3.1.2. Выбор состава модельной ЛФ ЛХС-1208 для внутривенного введенияИспользование Cremophor ELP в качестве солюбилизатораМетодика приготовления растворов ЛХС-1208 с Cremophor ELPК массе субстанции ЛХС-1208 добавляют 5% раствор ДМСО в воде.Субстанцию считают растворившейся, если в полученном растворе принаблюдении в проходящем свете не обнаруживаются частицы субстанции.Получают прозрачный раствор желтого цвета, к которому по каплямдобавляют Cremophor ELP при постоянном перемешивании, после этогодоводят водой для инъекций до нужного объема.
Готовый растворфильтруют через полиэфирсульфоновые фильтры с размером пор 0,22 мкм.57ДляполученияраствораЛХС-1208сцельюсозданияИЛФиспользовали Cremophor ELP в концентрации от 15 до 30% от состава ЛФ,при этом содержание ДВ варьировало от 0,2 до 0,4% от состава ЛФ, а доляДМСО составила не более 10% от состава ЛФ (табл. 4). Содержание ЛХС1208 определяли спектрофотометрически при длине волны 320±2 нм.Полученные данные позволяют утверждать, что оптимальным для получениястабильного раствора является состав с максимальным содержанием ДВ,минимальнойконцентрациейорганическогорастворителя(ДМСО),соотношением ЛХС-1208/Cremophor ELP 1/80 (состав № 4); он был выбран вкачестве модельного для проведения дальнейших технологических ибиологических испытаний (концентрация ЛХС-1208 – 2,5 мг/мл).Использование Kolliphor HS15 в качестве солюбилизатораМетодика приготовления растворов ЛХС-1208 с Kolliphor HS15К массе субстанции ЛХС-1208 добавляют 5% раствор ДМСО в воде.Субстанцию считают растворившейся, если в полученном растворе принаблюдении в проходящем свете не обнаруживаются частицы субстанции.Получают прозрачный раствор желтого цвета, к которому по каплямдобавляют Kolliphor HS15 и оставляют на 1 сутки с целью стабилизацииполученного раствора, к которому приливают рассчитанный объем воды дляинъекций.
Готовыйраствор фильтруют через полиэфирсульфоновыефильтры с размером пор 0,22 мкм.58Таблица 4Модельные составы ЛФ ЛХС-1208 с Cremophor ELPСостав модельной ЛФ(Вода для инъекций до 10 мл)№п/пв мг1.2.3.4.5.6.7.МассовоесоотношениеЗначениерНводногораствора1/75прозрачныйрастворкрасногоцвета4,71/100прозрачныйрастворжелтогоцвета4,01/88прозрачныйоранжевыйраствор4,21/80прозрачныйрастворжелтогоцвета3,81/100прозрачныйоранжевыйраствор4,21/67прозрачныйоранжевыйраствор4,31/75прозрачныйоранжевыйраствор4,6ЛХС-1208 /CremophorELPв%ЛХС-120820 мгЛХС-12080,20%ДМСО550 мгДМСО5,00%Cremophor ELP 1500 мгCremophor ELP 15,00%ЛХС-120820 мгЛХС-12080,20%ДМСО550 мгДМСО5,00%Cremophor ELP 2000 мгCremophor ELP 20,00%ЛХС-120825 мгЛХС-12080,25%ДМСО880 мгДМСО8,00%Cremophor ELP2200 мгCremophor ELP22,00%ЛХС-120825 мгЛХС-12080,25%ДМСО550 мгДМСО5,00%Cremophor ELP 2000 мгCremophor ELP 20,00%ЛХС-120830 мгЛХС-12080,30%ДМСО1100 мгДМСО10,00%Cremophor ELP 3000 мгCremophor ELP 30,00%ЛХС-120830 мгЛХС-12080,30 %ДМСО880 мгДМСО8,00 %Cremophor ELP 2000 мгCremophor ELP 20,00%ЛХС-120840 мгЛХС-12080,40%ДМСО1100 мгДМСО10,00%Cremophor ELP 3000 мгВнешнийвид водногораствораCremophor ELP 30,00%59С целью получения ИЛФ ЛХС-1208 применяли Kolliphor HS15 вконцентрации от 15 до 25% от состава ЛФ, при этом содержание ДВварьировало от 0,2 до 0,4% от состава ЛФ, а доля ДМСО составила 5% отсоставаЛФ(табл.Содержание5).ЛХС-1208определялиспектрофотометрически при длине волны 320±2 нм.Таблица 5Модельные составы ЛФ ЛХС-1208 с Kolliphor HS15Состав модельной ЛФ(Вода для инъекций до 10 мл)№п/пв мг1.2.3.4.5.МассовоесоотношениеВнешнийвид водногораствораЗначениерНводногораствора1/125прозрачныйрастворжелтогоцвета7,31/60прозрачныйрастворжелтогоцвета6,81/71прозрачныйрастворжелтогоцвета7,81/50мутныйрастворкрасногоцвета7,91/63мутныйраствороранжевогоцвета8,0ЛХС-1208 /KolliphorHS15в%ЛХС-120820 мгЛХС-12080,20%ДМСО550 мгДМСО5,00%Kolliphor HS152500 мгKolliphor HS15ЛХС-120825 мгЛХС-12080,25%ДМСО550 мгДМСО5,00%Kolliphor HS151500 мгKolliphor HS15ЛХС-120835 мгЛХС-12080,35%ДМСО550 мгДМСО5,00%Kolliphor HS152500 мгKolliphor HS15ЛХС-120840 мгЛХС-12080,40%ДМСО550 мгДМСО5,00%Kolliphor HS152000 мгKolliphor HS15ЛХС-120840 мгЛХС-12080,40%ДМСО550 мгДМСО5,00%Kolliphor HS152500 мгKolliphor HS1525,00%25,00%15,00%25,00%20,00%60Наоснованиипроведенных исследований в качестве состава,пригодного для проведения дальнейших биологических испытаний, отобралисостав № 1 для внутривенного введения (концентрация ЛХС-1208 – 2 мг/мл).Однако в ходе эксперимента с применением ЛФ, содержащей Kolliphor HS15,даже на интактных мышах была показана ее высокая токсичность (мышипогибли уже при введении однократной внутривенной дозы 20 мг/кг).
Всвязи с этим от применения данного солюбилизатора в дальнейшихисследованиях пришлось отказаться.Использование Kollidon 17PF в качестве солюбилизатораМетодика приготовления растворов ЛХС-1208 с Kollidon 17 PFК массе субстанции ЛХС-1208 добавляют 5% раствор ДМСО в воде,получают прозрачный раствор желтого цвета (раствор А).
Субстанциюсчитают растворившейся, если в полученном растворе при наблюдении впроходящем свете не обнаруживаются частицы субстанции. Отдельноготовят раствор Kollidon 17 PF в воде для инъекций (раствор Б). Затем враствор Б приливают по каплям, постоянно перемешивая, раствор А.Готовый раствор фильтруют через полиэфирсульфоновые фильтры сразмером пор 0,22 мкм.Так как для повышения стабильности ЛФ с Kollidon 17 PF планироваливпоследствиилиофилизироватьпрепарат,солюбилизаториформообразователь использовали в концентрации 10% от состава ЛФ.Содержание ЛХС-1208 и ДМСО в модельных составах составило 0,3–0,5% и5,0%, от состава ЛФ соответственно (табл.
6). Содержание ЛХС-1208определяли спектрофотометрически при длине волны 320±2 нм.Анализ приведенных в табл. 6 данных позволил говорить овозможности изготовления стабильного в течение 1 суток раствора ЛХС1208дляпарентеральногопримененияпримассовомсоотношениисубстанция ЛХС-1208/Kollidon 17 PF равном 1/67 (состав № 3, концентрацияЛХС-1208 – 3 мг/мл). Уменьшение этого соотношения до 1/50 (состав № 2)приводило к появлению опалесценции раствора спустя 2 ч.
Снизить61соотношениесубстанцияЛХС- 1208/ДМСО (состав № 5) также неудалось в связи с появлением опалесценции раствора спустя 2 ч.Таблица 6Модельные составы ЛФ ЛХС-1208 с Kollidon 17 PFСостав модельной ЛФ№п/п(Вода для инъекций до 10 мл)в мг1.2.3.4.5.МассовоесоотношениеВнешнийвид водногораствораЗначениерНводногораствора1/33мутныйоранжевыйраствор4,41/50прозрачныйоранжевыйраствор3,71/67прозрачныйоранжевыйраствор3,91/83прозрачныйоранжевыйраствор4,11/60прозрачныйоранжевыйраствор4,1ЛХС-1208 /Kollidon 17PFв%ЛХС-120830 мгЛХС-12080,30%ДМСО550 мгДМСО5,00%Kollidon 17PF1000 мгKollidon 17PF10,00%ЛХС-120830 мгЛХС-12080,30%ДМСО550 мгДМСО5,00%Kollidon 17PF1500 мгKollidon 17PF15,00%ЛХС-120830 мгЛХС-12080,30%ДМСО550 мгДМСО5,00%Kollidon 17PF2000 мгKollidon 17PF20,00%ЛХС-120830 мгЛХС-12080,30%ДМСО550 мгДМСО5,00%Kollidon 17PF2500 мгKollidon 17PF25,00%ЛХС-120850 мгЛХС-12080,50 %ДМСО550 мгДМСО5,00%Kollidon 17PF3000 мгKollidon 17PF30,00%3.1.3.
Оценка влияния стерилизующей фильтрации на содержание ЛХС1208 в моделях ЛФНа основании проведенных химико-фармацевтических исследований(внешний вид раствора, значение рН, содержание ЛХС-1208 в % оттеоретического) и предварительных биологических испытаний (определение62противоопухолевогоэффекта) предложенных модельных ЛФ ЛХС-1208 для инъекционного введения выбраны 2 состава (табл.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
