Диссертация (1141356), страница 17
Текст из файла (страница 17)
Необходимо проводить контроль качества донорских, исходных, вспомогательных иупаковочных материалов, готовых продуктов и полупродуктов, который должен включать:− Отбор проб;− Проведение испытаний (все методики должны быть валидированы);− Регулярная проверка всей отчетной документации и выдача разрешения на выпускУполномоченным лицом.673.5.2. Контроль в процессе производства59. Для БМКП процесс культивирования является наиболее переменчивым производственнымэтапом.
Максимальная продолжительность культивирования должна быть определена, ивалидация должна подтвердить, что критерии приемлемости удовлетворены даже в условияхнаихудшего случая.60. Следующие показатели внутрипроизводственного контроля рекомендуются для оценкипроцесса культивирования, сохранения целостности и функции клеток:а) Жизнеспособность, т.к. неоптимальные условия могут оказывать существенноевлияние на жизнеспособность клеток (определяется автоматическими счётчикамиклеток или методом проточной цитометрии);б) Чистота, т.к.
контаминирующие клеточные популяции растут при тех же условиях,что и целевые популяции;в) Скорость размножения является мерой клеточного роста. Если не имеет местосистема непрерывного культивирования, должна быть определена точка, когдакультуры необходимо отделить. Критерием приемлемости является основание, накотором принято решение о разделении. Для суспензионных культур максимальнаяплотность культуры и скорость размножения являются числовыми параметрами имогут быть определены. Для адгезивных культур это субъективный параметр,микроскопический анализ позволяет определить степень слияния.г) Метаболическая активность – мера жизнеспособности клеток, оцениваетсяпосредством анализа надосадочной жидкости клеточной культуры и основныхметаболитов, глюкозы и лактата.д) Морфология - чтобы доказать идентичность и охарактеризовать общее состояниекультуры;е) Микробные загрязнения и стерильность;ж) Старение и генетическая стабильность, т.к.
длительное культивирование можетпривести к накоплению генетических изменений, которые могут повлиять накачество и безопасность продукта, и старению с последующей потерей функции.61. Кроме того, внутрипроизводственный контроль должен проводиться после важныхпроизводственных стадий, как активация или стимуляция клеточных популяций цитокинамиили генетической модификацией.62.
Еще одним критическим этапом производства является криоконсервация, которая оказываетсущественное влияние на жизнеспособность и количество клеток.6863. Необходимоучитывать,чтонекоторыеаналитическиеданные,полученныепривнутрипроизводственном контроле, используются в качестве критериев к выпуску готовогопродукта в обращение из-за отсутствия достаточного количества материала или короткогосрока годности.64.
Перечень важнейших контрольных точек производства, влияющих на качество конечногопродукта и обеспечивающих соблюдение установленного технологического режимарекомендуется отражать в таблице 3.5.2.1:Таблица 3.5.2.1. Перечень контрольных точек производстваОбозначНомерОбъектНаименовЗначениеениестадии/операконтроля,аниеконтролируе коеконтролции/порядокконтролир могоьнойоборудованиотбораточкияобъеми уемогопоказателяТехничесМетоди Контролируюпериодично щеесредствостьподразделениконтроляконтроляе,регистрациипоказателяданныхпробы123документ456783.5.3. Критерии к выпуску готового БМКП65. Для того, чтобы сертифицировать партию БМКП, как пригоднуюк выпуску,Уполномоченное лицо должно гарантировать, что, как минимум, следующие требованиявыполнены:− Производство соответствует регистрационному досье или протоколу клиническогоисследования;− Производство велось в соответствии с Правилами;− Результаты контроля качества готового продукта укладываются в установленныеспецификацией пределы.66.
Критерии к выпуску продукции определяются спецификацией и должны включатьрезультаты тестирования готового продукта на:а) идентичность (фенотипическая и генотипическая характеристика, определяетсяметодом проточной цитометрии);б) чистоту (оценивается, как процент нецелевых или неживых клеток в продукте,методом проточной цитометрии),69в) активность (уровень экспрессии белка клеточной линии - способность БМКПвызывать клинический эффект – часто оценивается на стадии доклиническихисследований),г) количественное содержание вспомогательных веществ в БМКП;д) примеси (относящиеся к продукту и к процессу),е) стерильность(микробиологическийконтроль,пирогены,эндотоксины,микоплазмы),ж) жизнеспособность клеток и их общее количество (валидация должна такжепоказать, что жизнеспособность клеток не падает после размораживания);з) доза (выражается в количестве целевых клеток на килограмм массы телареципиента, оценивается, к примеру, количество CD34+ ГСК).67.
Необходимые тесты утверждаются производителем. Невозможность выполнения каких-либотестов, например, в случае ограниченного времени при аутологичной трансплантации илиограниченного количества полученного биоматериала на этапе забора, должна бытьобоснована и задокументирована. В данном случае, контроль качества ограничиваетсявалидацией на этапе процессинга и промежуточным контролем.68. Для продуктов с коротким сроком годности, требующих немедленного введения пациенту,допускается использование результатов внутрипроизводственного контроля для оценки,например, стерильности, с последующим определением качества готового продукта и, принеобходимости, немедленным уведомлением врача/исследователя об обнаруженныхмикроорганизмах.69.
Требования стабильности конечного продукта должны быть определены в каждомконкретном случае. Проводится определение условий хранения, сроков годности(допускаетсяиспользованиеметодики«ускоренногостарения»),оценкавлиянияиспользуемых упаковочных материалов на срок годности БМКП, оценка стабильности послеразмораживания.70. Условия транспортировки и хранения должны быть подкреплены экспериментальнымиданными в отношении поддержания целостности клеток и стабильности продукта в течениеопределённого срока годности.703.5.4. Валидация71.
Валидация представляет собой документирование подтверждение того, что определеннаяметодика, процесс, оборудование, сырье, деятельность или система действительно приводятк получению продукта надлежащего качества.72. Валидация показывает, что процесс последовательно приводит к получению продукта,соответствующего его заданным характеристикам и исключает контаминацию на любом изэтапов производства [136].73. Валидация требует детальной подготовки и планирования различных этапов и стадий.
Всяработа должна выполняться в определенной последовательности по плану в соответствии сдействующими нормативными и технологическими документами. Все результаты должныбыть занесены в протоколы валидации и оформлены в виде отчета.74. Валидации подлежат, как минимум:− аналитические методики;− контроль микробиологической чистоты помещений;− оборудование;− все этап процессинга;− физико-химические параметры среды культивирования;− все используемые сопутствующие вещества, реагенты на предметсоответствия спецификациям производителя и стерильность;− процедуры производства сопутствующих веществ и реагентов, если онипроизводятся самим Учреждением;− меры исключения контаминации;− материалы упаковки;− условия транспортировки;− любые изменения в производственном процессе (также, должны иметьписьменное одобрение Уполномоченного лица).75.
Все аналитические методики должны подвергаться валидации с соответствующимипределами обнаружения и количественного определения (при необходимости).76. Набор исследуемых валидационных характеристик зависит от назначения аналитическойметодики. Ниже представлены типичные валидационные характеристики с учетомспецифики БМКП:а) Точность методики необходима для аналитических процедур, используемых дляопределения активности и состава БМКП. Образцы примесей или продуктов71разложения БМКП не всегда доступны, поэтому подтверждение проводятпосредством сравнения результатов анализа образцов, содержащих продуктыразложения или примеси, полученных с помощью другой арбитражной методики. Вкачестве последней может быть использована фармакопейная методика или другаявалидированная методика [22].б) Прецизионность аналитических методик определяется для изучения активности исостава БМКП.
Для БМКП, не подвергающихся криоконсервированию, срокгодности, зачастую, не позволяет проводить анализ в различные дни и сравниватьрезультаты друг с другом. Необходимо установить более широкие допустимыепределы для дисперсии, стандартного отклонения и относительного стандартногоотклонения, чем определенные для химических субстанций. Если методикаоснована на связывании антитела со специфическим антигеном, то необходимотитровать каждое антитело в процессе разработки методики для определениянеобходимого количества и/или концентрации, чтобы избежать полученияложноположительных и ложноотрицательных результатов.в) Предел обнаружения особенно важен для обнаружения критических параметровбезопасности, где необходимо демонстрация полного отсутствия примеси(например, онкогенных клеток или ретровирусных частиц). Чувствительностьметодики имеет решающее значение в данном случае.
Чтобы минимизироватьошибку выборки, объем выборки должен быть максимально возможным.г) «Предел количественного определения является валидационной характеристикойметодик количественного определения малых концентраций веществ в образце ирассматривается в основном при определении примесей и/или продуктовразложения.д) Линейность.Некоторыеаналитическиеметодики,например,иммунноаналитические, не показывают линейности ни при каких математическихпреобразованиях. В таких случаях аналитический отклик должен быть описанподходящей функцией концентрации анализируемого вещества в образце» [22].Если целевые клетки добавляются в пяти различных количествах к нецелевымклеткам,проточнаяцитометриядолжнапродемонстрироватьлинейнуюзависимость.е) Диапазон применения методики зависит от ее назначения и определяется приизучении линейности.
В пределах диапазона применения методика должнаобеспечивать требуемую линейность, правильность и прецизионность. Для готового72продукта максимально допустимый диапазон применения от 80-120% отноминального содержания.ж) Оценка робастности должна доказать надежность результатов анализа принебольших изменениях параметров методики. Для БМКП это могут быть: скоростьпотока проточной цитомерии; стабильность аналитического раствора (смесиантител); концентрация клеток в анализируемом образце; вариации во времениинкубации и времени между окрашиванием антителами клеток и их анализом путемцитометрии; изменение промежутка времени от сбора клеток до анализа и т.д.3.5.5. Анализ рисков77.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
