Диссертация (1141302), страница 8
Текст из файла (страница 8)
Eur., DAB, JP and FCC, ФС 42-132497) от Ligamed, Peter Greven GmbH&Co, Германия - белый, очень легкий иочень мелкий порошок, жирный на ощупь. Практически нерастворим в водеи в безводном этаноле. Относится к группе скользящих вспомогательныхвеществ, способствует облегчению выталкивания таблетки из матричногоканала, предотвращает налипание таблетируемой массы на пуансоны истенки матрицы таблеточного пресса.Кремния диоксид коллоидный (аэросил) (USP, Ph. Eur., ГОСТ 14922-77)Sigma Aldrich, США - легкий, высокодисперсный порошок голубоватобелого цвета, применяется в качестве скользящего агента, снимаетэлектростатический заряд с частиц порошка или гранулята, улучшаеттекучесть гранулятов.В таблице 3 указаны использованные при проведении исследованийрастворители и реактивы.48Таблица 3НаименованиеКалия хлоридКалий фосфорнокислыйоднозамещенныйКалий фталевокислыйкислый (бифталат)Кислота аминоуксусная(глицин)Кислота лимонная б/вКислотахлористоводороднаяконцентрированнаяНатрия гидрокарбонатНатрия гидроксид– Растворители и реактивыНормативнаядокументацияР еа ктивыPh.Eur., BP, USP, FCCISO, Ph.Eur.Ph.Eur., BP, USPPh.Eur., ГОСТ 5860-75Ph.Eur., BP, USPГОСТ 3118-77Ph.
Eur., BP, USP, FCC,E500Ph.Eur., BP, USPНатрий лимоннокислый5,5-водныйНатрия хлоридPh.Eur., BP, USP1-гептилсульфонат натрия-Ортофосфорная кислотаACS, ISO, Ph. Eur.АцетонитрилВода очищеннаяСпирт этиловый 95%ACSР а с т во р и те лиТУ 2634-002-5426086;паспорт № 1279/24.12.13;ОФС.1.3.0001.15ФС.2.2.020.15ТУ 91-03-0566401-93;паспорт № 0602/1/14;ГОСТ Р 51723-2001,ФС.2.1.0036.1549Квалификация,производительх.ч., Sigma Aldrich,Германияа.с.s., Sigma Aldrich,СШАч.д.а.,Sigma Aldrich,Японияч.д.а., Sigma Aldrich,Германияч.д.а., Sigma Aldrich,Австрияо.с.ч., ООО«КемикалЛайн», РФх.ч., Sigma Aldrich,Германиях.ч., Sigma Aldrich,Чехияч.д.а., Sigma Aldrich,Бельгияч.д.а., Sigma Aldrich,Германияо.с.ч., для ВЭЖХ,Alfa Aesar, СШАо.с.ч., для ВЭЖХ,Sigma Aldrich,ГерманияКриохром, РФ;Biosolve, ФранцияВ условияхлабораториио.с.ч., для ВЭЖХ,ООО«КемикалЛайн»2.2.
Методы12.2.1. Изучение физико-химических и технологических свойствфармацевтических субстанций2.2.1.1. Исследование зависимости растворимости фармацевтическихсубстанций от рНОпределение зависимости растворимости ФС от рН проводили пометоду «встряхивания во флаконе» (shake-flask) согласно двух схемам.Первая схема включала оценку растворимости ФС согласно ГФ XIII т. 1ОФС 1.2.1.0005.15 «Растворимость» и USP 38/NF 33 [13, 144] в буферныхрастворах с различными рН.
Для ФС амбена исследование проводили в0,05 М буферных растворах, моделирующих среду различных отделовжелудочно-кишечного тракта (ЖКТ): солянокислом (рН 1,2; 2,0), глициновосолянокислом (рН 2,2), фталатном (рН 3,0; 4,0; 5,0), фосфатном (рН 6,0; 6,8;8,0). Растворимость ФС пророксана гидрохлорида изучали в 0,05 Мбуферных растворах: солянокислом (рН 1,2; 2,0), цитратном (рН 3,0; 4,0; 5,0)и фосфатном (рН 6,0; 6,8; 8,0). Растворимость пророксана в диапазоне рН от3,0 до 5,0 определяли в цитратном буфере, так как при использованиифталатных буферных растворов с указанными рН наблюдается изменениеструктуры кристаллов осадка ФС, отличающихся от исходных частицпророксана, что указывает на взаимодействие между ФС и фталат-ионами иобуславливает необходимость замены среды растворения.К навескам ФС добавляли необходимое количество буферногораствора из расчета 1 г; 0,100 г; 0,033 г; 0,010 г и 0,001 г субстанции на 1 млрастворителя.
Пробы инкубировали при 37°С и постоянном перемешиваниившейкере-инкубаторе180 об/минвтечениеIKA KS 3000 ic control24 часов.По(Германия)окончаниисинкубациичастотойполнотурастворения ФС оценивали визуально, а также проводили количественноеопределение ФС в образцах: отбирали пробы в герметично закрывающиеся1Экспериментальная часть данной работы выполнена на базе лаборатории дизайна лекарственныхформ МФТИ.50прогретые до 37°C центрифужные пробирки, которые центрифугировали втечение 5 минут при 200 g на центрифуге LMC-3000 (Biosan, Латвия).Дополнительно проводили определение количества ФС в пробах. Для этогоотбирали по 0,05 мл пробы супернатанта во флаконы для автоинжектора,которые до анализа находились при 37°C, в оставшейся части образцаизмеряли рН с помощью рН-метра S220 SevenCompact от Mettler Toledo,снабженным хлоридсеребряным электродом InLab Routine (Швейцария).Перед помещением во флаконы пробы с теоретической концентрациейпророксана 10 мг/мл и больше разводили используемым при исследованиирастворимости буферным раствором до расчетной концентрации 1 мг/мл.Количественное определение ФС в пробах проводили с помощьювысокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ).Выявленныеврезультатеэксперимента,проведенногоповышеописанной схеме, особенности растворимости ФС пророксана от рНпотребовали проведения дополнительного исследования растворимостиданной ФС в условиях, обеспечивающих отсутствие влияния составабуферных растворов, используемых для достижения определенных рН [116,121, 162].К 1,8 мл среды добавляли по 126 мг (3,3710-4 моль) пророксана.Указанное количество существенно превышает необходимое для получениянасыщенных растворов.
Образцы инкубировали при 37°C и встряхивании cчастотой 180 об/мин на встряхивателе в течение 24 часов. После чего пробыпомещали в прогретые до 37°C центрифужные стаканы и центрифугировали5 минутпри200 g.Дляколичественногоанализапоокончаниицентрифугирования в термостатируемых условиях из пробирок отбирали по0,05 мл супернатанта во флаконы для автоинжектора, содержащие 0,95 млбуфера рН 1,2.
В оставшейся части образца в пробирках измеряли рН.В ходе исследования для ФС пророксана также изучено влияниелимонной и хлористоводородной кислот на растворимость. К 1,8 мл среды51растворения с разным содержанием кислот добавляли по 126 мг (3,3710-4 моль)пророксана.
Далее эксперимент проводили в соотвествии с определениемрастворимости ФС по второй схеме. По 0,05 мл супернатанта отбирали вофлаконы, содержащие 0,95 мл 0,1 М раствора хлористоводородной кислоты,для количественного определения ФС. В оставшейся части образца впробирках измеряли рН.2.2.1.2 Количественное определение концентрации фармацевтическихсубстанций в растворе с помощью высокоэффективнойжидкостной хроматографии2Анализ проводили согласно ОФС 1.2.1.2.0005.15 «Высокоэффективнаяжидкостнаяхроматография».Вработеиспользовалижидкостнойхроматограф Shimadzu LC30 (Япония) с фиксированным объемом петли20 мкл, снабженный контроллером CBM-20A, насосами высокого давленияLC-300AD, автосамплером SIL-30AС, спектрофотометрическим детектором спеременной длиной волны UV-VIS SPD-M20A.
Разделение компонентовпробы осуществляли на колонке X-Bridge C 18, 150x4,6 мм (3,5 мкм)производства Waters (Milford, Massachusetts, США) с использованиемпредколонки Phenomenex C18 (ODS, Octadecyl) AJO-4287 (4 x 3 мм; 10 pk)производства Phenomenex (Torrance, California, USA). При анализе ФС и ЛПприбегали к методу ион-парной хроматографии с элюированием вградиентом режиме. Регистрацию и первичную обработку данных проводилис помощью программного обеспечения LabSolutions.При анализе образцов ФС амбена и пророксана, подготовленных какописано в п. 2.2.1.1., применялся градиентный режим элюированияподвижнойфазой,получаемойсмешиванием0,005 Мраствора1-гептилсульфоната натрия, подкисленного ортофосфорной кислотой дорН 3,0 (компонент А), и ацетонитрила (компонент Б).
Состав подвижнойфазы: 0 - 2 мин - 5 %Б, 7,5 мин - 40 %Б, 9,0 – 14 мин - 95 %Б, 14,5 мин - 5 %Б.2Автор выражает благодарность за помощь в проведении исследования к.х.н., с.н.с. лабораториидоклинических исследований МФТИ О.В. Долотовой.52При хроматографическом анализе проб, содержащих ФС амбена,элюирование проводили при скорости потока подвижной фазы 1,5 мл/мин итемпературе колонки 27 °С.
Объем пробы составил 20 мкл. Времяхроматографирования составило 15 мин. Детектирование осуществлялось вдиапазоне длин волн 190-800 нм на длине волны 254 нм. Время удерживанияамбена составляло около 5,9 мин. Для калибровки использовали растворыамбена с концентрацией 0,1 мг/мл.При анализе образцов ФС пророксана элюирование проводили прискорости потока подвижной фазы 1,8 мл/мин и температуре 29°С. Объемывводимых проб составили 2-20 мкл. Время хроматографирования такжесоставляло 15 минут. УФ-детектирование осуществлялось в диапазоне длинволн 190-800 нм с выбранными длинами волн 190 нм и 277 нм.
Времяудерживания пророксана составляло около 8,8 мин. Для калибровкииспользовали растворы 1 мг/мл пророксана и 1 мг/мл 3-фенилпирролидина.2.2.1.3.Изучение фракционного состава и морфологии порошковфармацевтических субстанций2.2.1.3.1. Метод оптической микроскопииДля оценки фракционного состава и изучения морфологическихособенностей(размер,форма,рельефповерхности)порошковФСиспользовали метод прямой оптической микроскопии в проходящем свете.На чистое, предварительно обезжиренное предметное стекло помещали1 мг субстанции, а затем иммерсионную жидкость (диметикон илиминеральное масло).
Порошок суспендировали с помощью шпателя доравномерного распределения твердых частиц в объеме иммерсионнойжидкости, после чего микропрепарат накрывали покровным стеклом, избегаяпопадания пузырьков воздуха. В случае приготовления микропрепаратапорошкапророксанасупензиюФСвиммерсионнойжидкостидополнительно обрабатывали на ультразвуковой бане. Образцы исследовалис использованием микроскопа Axio Observer.Z1 Carl Zeiss (Германия) и53объектива A-Plan 10x/0.25 Ph 1, снабженного программным обеспечениемZEN-ZEISS, с помощью которого проводили измерение размеров частицпорошков изучаемых ФС.2.2.1.3.2.
Метод сканирующей электронной микроскопииИсследования проводились на базе центра коллективного пользованияМосковского физико-технического института (университета)3. Электронныемикрофотографии частиц порошков амбена и пророксана получены спомощьюсканирующегоэлектронногомикроскопаJSM-7001FJEOL(Япония), снабженного катодом Шоттки. Порошок ФС наносили натокопроводящий углеродный скотч и сканировали при усреднении 50, токепучка 20 пА, низком ускоряющем напряжении (1-2 кВ) для предотвращениязаряжения и деформации образца.2.2.2.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
