Диссертация (1141302), страница 11
Текст из файла (страница 11)
Определение содержания примесей в таблеткахСодержание технологических примесей и продуктов деградации ФС влекарственномпрепаратеопределяютприпроведениииспытания«Посторонние примеси». Для оценки количественного содержания примесейФС в таблетках использовали ВЭЖХ, которую проводили согласно ОФС1.2.1.2.0005.15«Высокоэффективнаяжидкостнаяхроматография»сиспользованием оборудования и режимов элюирования, согласно описаннымв п.
2.2.1.2. Растворы для проведения анализа готовили непосредственноперед использованием.4Автор выражает благодарность заведующему лабораторией нанобиотехнологий МФТИ к.ф.-м.н.М.П. Никитину, а также студенту-дипломнику данной лаборатории С.Р. Буюкли.65Для оценки пригодности условий хроматографического разделенияамбенаипримеси4-формилбензойнойкислотывтаблеткахспролонгированным высвобождением амбена приготавливали модельныерастворы с концентрацией 0,1 мг/мл амбена и,002 мг/мл 4-формилбензойнойкислоты. Около 0,01 г (точная навеска) 4-формилбензойной кислотыпомещали в мерную колбу объемом 50 мл, прибавляли 0,1 М растворахлористоводородной кислоты.
Раствор помещали на ультразвуковую баню дополного растворения 4-формилбензойной кислоты, после чего фильтроваличерез фильтр с диаметром пор 0,45 мкм (раствор 1). Навеску порошкаизмельченных таблеток, содержащую около 0,01 г амбена, помещали вмернуюколбувместимостью100 мл,прибавляли0,1 Мрастворхлористоводородной кислоты, добавляли 1 мл раствора 1, доводили объемраствора до метки (раствор 2). Полученный раствор 2 хроматографировали.Отработку методики проводили на модельных растворах таблеток сконцентрацией 0,1 мг/мл амбена. Детектирование осуществляли при 254 нм,так как использование данной длины волны позволяет параллельнопроводить определение ФС и ее основной примеси.Для определения пригодности хроматографической системы дляразделения пророксана и 3-фенилпирролидина точную навеску порошкаизмельченных таблеток, содержащую 0,01 г пророксана, помещали в мернуюколбу вместимостью 50 мл, прибавляли 25 мл растворителя и озвучивали наультразвуковой бане в течение 10 мин.
в защищенном от света месте. Вкачестве растворителя использовали раствор 0,1 М хлористоводороднойкислоты, ацетонитрил или их смесь в соотношении 1:1 (по объему).Полученный раствор фильтровали через мембранный фильтр с размером пор0,45 мкм, первые порции фильтрата отбрасывали (раствор 1). 0,005 г 3фенилпирролидина гидрохлорида, 97% (ABCR GmbH&Co KG) растворяли в25 мл ацетонитрила или смеси 0,1 М раствор хлористоводородной кислоты:ацетонитрил 1:1 (раствор 2).
Во флаконы для автоинжектора помещали660,5 мл раствора 1 и 0,5 мл раствора 2, полученный раствор перемешивали.Детектирование осуществляли при 190 нм. Отработку методики проводилина модельных растворах пророксана с концентрацией ФС 0,1 мг/мл.2.4.8. Определение сроков годности разработанных твердыхлекарственных формУстановление срока годности лекарственных препаратов являетсянеотъемлемойчастьюфармацевтическойразработки,посколькуэффективность ЛП определяется, в том числе сохранением свойствлекарственной формы с течением времени.
Определение сроков годности ЛПамбена и пророксана с пролонгированным высвобождением проводилисогласно ГФ XIII т. 1 ОФС 1.1.0009.15 «Сроки годности лекарственныхсредств». Изучение стабильности ЛП основано на изучении их основныхпоказателей качества при хранении от 2 до 5 лет при комнатной температуреи влажности.Данная ОФС также предусматривает возможность использованияметода «ускоренного хранения», согласно которому испытуемый ЛПвыдерживают при температурах и влажности, превышающих таковые приего хранении в процессе обращения. При повышенных температурахускоряются протекающие в лекарственных средствах физико-химическиепроцессы, приводящие со временем к нежелательным изменениям качества.Следовательно, при повышенной температуре промежуток времени, втечение которого контролируемые показатели качества лекарственногосредства сохраняются в допустимых пределах (экспериментальный срокгодности, Сэ), искусственно сокращается в сравнении со сроком годности притемпературе хранения (С), что позволяет значительно сократить время,необходимое для установления срока годности.
Согласно ОФС и инструкциидля твердых ЛФ рекомендуемая предельная температура экспериментальногохранения составляет 60°С. При температуре хранения tхр С связан с Сэ при67нагревании до температуры экспериментального хранения tэ следующейзависимостью:С=К×Сэ,(3)где коэффициент соответствия К=Аtэ – tхр/10, А – температурный коэффициентскорости химической реакции, принят равным 2,5.Однако, предварительные эксперименты, проведенные по методу«ускоренного хранения» при температуре 60°С не позволили получитьдостоверных данных о стабильности ЛП амбена.
При этой температуренаблюдалосьнарушениекишечнорастворимойструктурыоболочкитаблетки,вследствиеатакжефазовогоцелостностипереходаматрицеобразователя Kollidon SR, что оказывало влияние на внешний видтаблеток и высвобождение из них амбена. Понижение температурыэкспериментального хранения до 40°С, рекомендованной нормативнымидокументами, также не позволило сделать однозначного вывода остабильностиЛПамбена,таккакданнаятемпературапревышаеттемпературу фазового перехода Kollidon SR.В связи с этим стабильность изготовленных таблеток амбена ипророксана также изучали в естественных условиях при комнатнойтемпературе 23±2°С.
Для этого образцы таблеток упаковывали в стеклянныефлаконы темного стекла с пластмассовой навинчивающейся крышкой, затемпомещали в шкаф с не пропускающими свет дверцами. В случае пророксанатаблетки хранили в банках с навинчиваемыми крышками, снабженнымивлагопоглотителем (гранулами силикагеля в пакетиках). Анализ отобранныхтаблетокпроводилипопоказателям-внешнийвид,подлинность,количественное содержание ФС, посторонние примеси, растворение, а такжевремя плавания и всплытия (в случае таблеток пророксана) - в деньизготовления и в процессе хранения через каждые 3 месяца хранения вестественных условиях в течение 1 года и через каждые 6 месяцев в течение2 года хранения.682.5.Статистические методы анализаСтатистическую обработку и анализ экспериментальных данныхпроводили в соотвествии с требованиями ОФС 1.1.0013.15 ГФ XIII т.
1 сиспользованием программы Microsoft Office Excel. Все экспериментальныеданные представляют собой среднее по результатам трех параллельныхизмерений или приводятся в виде среднее стандартное отклонение. Дляоценкиразличийсреднихизначимостикоэффициентакорреляциииспользовали критерии на основе t-статистики Стьюдента. Данные нарисунках представлены в виде средних значений и стандартных отклоненийпо трем измерениям, если не оговорено другое количество измерений.69РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕГлава 3. Изучение физико-химических свойств фармацевтическихсубстанций амбена и пророксана3.1.
Изучение растворимости фармацевтической субстанции амбена приразличных рНИзучение растворимости ФС является важным этапом решениятехнологических задач, так как позволяет осуществить предварительныйвыбор ЛФ и ее биофармацевтических характеристик, а особенностирастворения ФС определяют скорость, полноту их высвобождения ивсасывания. Имеющиеся данные о растворимости изучаемых ФС неучитывают зависимость растворимости от рН, которая является особенноактуальной при разработке пероральных ЛП. В связи с этим нами проведеныисследования по определению растворимости ФС в условиях изменяющегосярН в буферных средах с рН, имитирующим соответствующие отделы ЖКТ.В результате экспериментов установлено, что в области насыщенныхконцентраций (теоретические концентрации ФС 6,6·10-4 М и 2,2·10-4 М)зависимость растворимости амбена носит несистематичный характер в силуего выраженного влияния на pH буферных растворов (рисунок 11).
Втаблице 4 в качестве показателей растворимости приведены концентрацииамбена и значения pH после инкубации. Согласно полученным даннымзначения pH насыщенных растворов амбена в средах с исходным pHменьше 5 оказываются сильно завышенными, а при исходных pH больше 6 –значения pH насыщенных растворов заметно ниже. В условиях низких рНэто может быть связано с недостаточной буферной емкостью солянокислогобуфера и образованием раствора, в котором рН определяется диссоциациейамбена. Следовательно, имеет место заметное повышение pH, приводящее кснижению прироста растворимости в растворах с исходно низким pH как вслучае с солянокислым буфером с pH=2,0, так и глициновым буфером сpH=2,2.
В связи с вышеперечисленным анализ зависимости растворимости70амбена от pH проводили на основе значений pH, измеренных послеустановления равновесия в растворе.Таблица 4 – Растворимость ФС амбена в физиологическом диапазоне рНСредарастворениясолянокислыйбуферглициновосолянокислыйбуферрНрН послеинкубации1,22,03,754,71Насыщеннаяконцентрация(Ct), М0,202±0,0080,117±0,0012,24,010,165±0,0023,04,05,06,0фосфатный6,8буфер8,0Примечание. В таблицефталатныйбуфер4,330,165±0,0054,640,122±0,0025,100,110±0,0015,960,102±0,0016,670,103±0,0017,480,111±0,001представлены данные поРастворимость ФС поГФ XIII изд., т.1умеренно растворимаумеренно растворимаумеренно растворимаумеренно растворимаумеренно растворимаумеренно растворимаумеренно растворимаумеренно растворимаумеренно растворимарастворимости амбена впробах с теоретической концентрацией раствора 6,6·10-4 М.0,2506,6·10-1М6,6·10-1М2,2·10-1М2,2·10-1М0,2006,6·10-2М6,6·10-2М6,6·10-3М6,6·10-3МCt, M0,1500,1000,0500,000рН=1,2 рН=2,2 рН=3,0 рН=4,0 рН=5,0 рН=6,0 рН=6,8 рН=8,0Рисунок 11– Зависимость концентрации амбена (Ct) в растворе отиспользуемого буфера.
В пояснении обозначений указанытеоретические концентрации при полном растворении ФС.По химической структуре амбен представляет собой амфолит из-заналичия в составе его молекулы карбоксильной группы, являющейсядонором протонов, и аминогруппы – акцептора протонов. В твердом71состоянииподобныесоединениясуществуютввидекристаллов,образованных цвиттер-ионами HA, переходящими в раствор в соответствии суравнением [63, 65]:KSHAтвёрдый HAКроме(4)незаряженногоцвиттер-ионамолекулаамфолитаможетнаходиться в растворе в полностью протонированной H2A+ и апротонной Aформах в соответствии с уравнениями:K A1H 2 A H 2O HA H 3O ,(5)K A2HA H 2O A - H3O (6)Равновесия (5) и (6) можно описать с помощью констант:[]∙[3 + ]КА1 = [2КА2 =+ ]∙[ ]2,(7)[A− ]∙[H3 O+ ][HA]∙[H2 O],(8)Исходя из стехиометрических уравнений (7) - (8) с учетом того, чтосуммарная концентрация амбена в растворе Ct=[HA]+[H2A+]+[A-], в условияхравновесия [63, 64, 168]: HK CSt C0 1 A2H K A1, (9)где C0=KS и называется собственной или внутренней растворимостьюамфолита.Откудавизоэлектрическойточке(pI),соответствующейминимуму для Ct, имеет место уравнение[H ] ( K A2 K A1 ) 0.5 ,(10)72что соответствует pI ПолученныеpK A2 pK A1.2экспериментальныеданныепонасыщеннымконцентрациям амбена и pH после инкубации в пробах c теоретическимиконцентрациями ФС 2,2·10-4 М и 6,6·10-4 М хорошо согласуются суравнением (9).
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
