Диссертация (1174340)
Текст из файла
Федеральное государственное бюджетное учреждение«Национальный медицинский исследовательский центр акушерства,гинекологии и перинатологии имени академика В.И. Кулакова»Министерства здравоохранения Российской ФедерацииНа правах рукописиБарков Илья ЮрьевичСОВЕРШЕНСТВОВАНИЕ СИСТЕМЫ ПРЕНАТАЛЬНОГОСКРИНИНГА АНЕУПЛОИДИЙ ПЛОДА НА ОСНОВЕ АНАЛИЗАВНЕКЛЕТОЧНОЙ ДНК КРОВИ МАТЕРИСпециальность 03.02.07 – ГенетикаДиссертация на соискание ученой степеникандидата медицинских наукНаучные руководители:д.м.н. Н.А. Каретниковад.б.н., профессор РАН Д.Ю.
ТрофимовМосква - 20182ОглавлениеВведение .................................................................................................................. 5Актуальность темы исследования ...................................................................... 5Цель и задачи исследования ............................................................................... 7Задачи исследования ............................................................................................ 7Научная новизна...................................................................................................
8Практическая значимость.................................................................................... 9Положения, выносимые на защиту .................................................................. 10Апробация результатов ..................................................................................... 11Внедрение результатов исследования в практику ..........................................
12Публикации......................................................................................................... 12Личный вклад автора ......................................................................................... 12Объем и структура работы ................................................................................ 13Глава 1. Обзор литературы ...............................................................................
141.1 Хромосомные анеуплоидии ........................................................................ 141.2 Цитогенетические методы исследования .................................................. 151.2.1 Кариотипирование ...................................................................................................... 151.2.2 Исследование полового хроматина ........................................................................... 161.2.3 Флюоресцентная гибридизация in situ (FISH) ..........................................................
171.3 Молекулярно-генетические методы исследования .................................. 181.3.1 Полимеразная цепная реакция и QF-PCR ................................................................. 181.3.2 Хромосомный микроматричный анализ ................................................................... 191.4 Инвазивные методы получения материала плода .................................... 201.4.1 Амниоцентез ................................................................................................................ 201.4.2 Кордоцентез ................................................................................................................ 211.4.3 Биопсия хориона .......................................................................................................... 211.5 Скрининговые обследования беременных ................................................ 221.5.1 Скрининг второго триместра ...................................................................................
221.5.2 Скрининг первого триместра .................................................................................... 251.6 Неинвазивное выявление анеуплоидий по клеткам плода ...................... 291.7 Выявление анеуплоидий по внеклеточной ДНК в крови матери ........... 311.7.1 История открытия внеклеточной ДНК .................................................................. 3131.7.2 Происхождение и характеристики материнской внеклеточной ДНК ................. 321.7.3 Происхождение и характеристики плодовой внеклеточной ДНК ........................
351.7.4 Определение доли плодовой ДНК ............................................................................... 381.7.5 Исследование внеклеточной ДНК с применением цифровой ПЦР ......................... 391.7.6 Полногеномное высокопроизводительное секвенирование ..................................... 401.7.7 Алгоритмы анализа данных .......................................................................................
441.7.8 Таргетное секвенирование ......................................................................................... 471.7.9 Биологические ограничения ДНК-скрининга ............................................................ 491.7.10 Выявление риска анеуплоидий по половым хромосомам ....................................... 521.7.11 Выявление риска редких анеуплоидий ..................................................................... 531.7.12 Применение ДНК-скрининга при многоплодной беременности ........................... 54Глава 2. Материалы и методы исследования ...............................................
562.1 Материалы .................................................................................................... 562.2 Характеристики пациентов и получение материала ................................ 592.2.1 Ретроспективные группы .......................................................................................... 592.2.2 Проспективная группа ................................................................................................ 592.2.3 Забор крови и отделение плазмы ...............................................................................
602.2.4 Проведение амниоцентеза, биопсии ворсин хориона, кордоцентеза .................... 622.2.5 Получение образцов плаценты................................................................................... 622.3 Специальные методы исследования .......................................................... 632.3.1 Проведение стандартного цитогенетического исследования .............................. 632.3.2 Проведение молекулярно-цитогенетического исследования (FISH) .....................
642.3.3 Проведение молекулярного кариотипирования ........................................................ 642.3.4 Проведение QF-PCR .................................................................................................... 652.3.5 Выделение внеклеточной ДНК и проведение ПЦР................................................... 652.3.6 Приготовление библиотек для секвенирования .......................................................
672.3.7 Обработка данных ...................................................................................................... 722.3.8 Статистическая обработка материала ................................................................. 74Глава 3. Результаты и обсуждение .................................................................. 753.1 Скрининг наличия анеуплоидий ................................................................ 753.1.1 Результаты валидации ............................................................................................... 753.1.2 Определение происхождения анеуплоидий при ДНК-скрининге............................. 803.1.3 Определение доли плодовой ДНК ...............................................................................
833.1.4 Зависимость доли плодовой ДНК от массы тела и от ИМТ ................................ 853.1.5 Зависимость доли плодовой ДНК от срока беременности .................................... 8643.1.6 Транспортировка материала для исследования ...................................................... 873.1.7 Пренатальная диагностика с применением микроматричного анализа ..............
893.1.8 Пренатальная диагностика с применением метода QF-PCR ............................... 903.1.9 Анализ причин ложноположительных и ложноотрицательных результатов ... 913.1.10 Выявление анеуплоидий при многоплодной беременности ................................... 923.1.11 Выявление редких и частичных анеуплоидий .........................................................
943.1.12 Сравнение с опытом применения ДНК-скрининга в мировой практике ............. 943.2 Описание отдельных клинических случаев .............................................. 973.2.1 Трисомия по 21-й хромосоме при низком риске по результатамкомбинированного скрининга I триместра ...................................................................... 973.2.2 Мозаицизм у ребенка / плода – причина ложноотрицательного результататрисомии по 21-й хромосоме ..............................................................................................
983.2.3 Мозаицизм плаценты - причина выявленного риска трисомии хромосомы 7 .... 1023.2.4 Выявление частичной анеуплоидии по 4 и 12 хромосомам ................................... 1073.2.5 Выявление трисомии 10 у пациента с лимфангиомой щеки................................. 1093.2.6 Выявление трисомии 21 у одного плода из тройни ............................................... 110Заключение ......................................................................................................... 113Выводы ................................................................................................................
Характеристики
Тип файла PDF
PDF-формат наиболее широко используется для просмотра любого типа файлов на любом устройстве. В него можно сохранить документ, таблицы, презентацию, текст, чертежи, вычисления, графики и всё остальное, что можно показать на экране любого устройства. Именно его лучше всего использовать для печати.
Например, если Вам нужно распечатать чертёж из автокада, Вы сохраните чертёж на флешку, но будет ли автокад в пункте печати? А если будет, то нужная версия с нужными библиотеками? Именно для этого и нужен формат PDF - в нём точно будет показано верно вне зависимости от того, в какой программе создали PDF-файл и есть ли нужная программа для его просмотра.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
