Диссертация (1174340), страница 3
Текст из файла (страница 3)
Предложены способы, позволяющие различать мозаицизмплодового и материнского происхождения и тем самым минимизироватьколичество ложноположительных результатов ДНК-скрининга.Положения, выносимые на защиту1. ДНК-скрининг может быть рекомендован беременным с низкимриском по результатам комбинированного скрининга I и II триместров.ДНК-скрининг может рассматриваться в качестве уточняющего рискскрининговогоисследованияперединвазивнойдиагностикойдлябеременных с высоким риском по результатам комбинированного скрининга,что особенно актуально для пациентов с отягощенным акушерскиманамнезом.2. ДНК-скрининг является значительно более чувствительным испецифичным способом выявления анеуплодий у плода по сравнению состандартными скринингами I и II триместров, однако его эффективность неможет достигать 100% из-за биологических ограничений.
В случаевыявления высокого риска анеуплоидий по результатам ДНК-скрининга ипри отсутствии врожденных аномалиий (пороков развития) по результатамУЗИ, показана инвазивная пренатальная диагностика, которую желательнопроводить с применением методов цитогенетического или молекулярногокариотипированияамниотическойжидкости,такжедопустимоиспользование QF-PCR или FISH.3.
Полногеномное высокопроизводительное секвенирование позволяетполучать информацию не только об анеуплоидиях по 13, 18, 21 и половымхромосомам плода, но также о клинически значимых полных и частичныханеуплоидиях по другим хромосомам плода, плаценты и самой матери, в томчисле связанных с осложнениями течения беременности.114.
При разработке нормативных документов, регламентирующихпроведение ДНК-скрининга, следует учитывать отсутствие значимойкорреляции доли плодовой ДНК со сроком беременности в рекомендованныйдля проведения НИПС период с 11 по 18 неделю беременности, при этомвысокий ИМТ не является ограничением для исследования. Доля плодовойДНК является крайне важным критерием валидности ДНК-скрининга и еёопределение должно быть регламентировано в обязательном порядке.Апробация результатовРезультаты работы были представлены и обсуждены на 8 российских и 3международных конференциях: IX Всероссийском научном форуме "Мать идитя" (Москва, 2-5 октября 2007); XXV Юбилейной конференции РАРЧ"Репродуктивные технологии сегодня и завтра" (Сочи, 9-12 сентября 2015г.);международном форуме “Controversies in preconception, preimplantation andprenatal genetic diagnosis” (Барселона, Испания, 22-24 сентября 2016); XVIIВсероссийском научно-образовательном форуме "Мать и дитя - 2016"(Москва, 27-30 сентября 2016); международной конференции “PrenatalMolecular Diagnostics Europe” (Лиссабон, Португалия, 10-14 апреля 2017);конференции “NGS в медицинской генетике” (Суздаль, 26-28 апреля 2017);2-ой Всероссийской научно-практической конференции "Новые технологиидиагностики наследственных болезней" (Москва, 27-28 октября 2017);II съезде Ассоциации специалистов медицины плода (Санкт-Петербург, 15-17ноября 2017); конференции “NGS в медицинской генетике” (Суздаль, 25-27апреля 2018); международной конференции “22nd International Conference onPrenatal Diagnosis and Therapy” (Антверпен, Бельгия, 8-11 июля 2018);“Всероссийской цитогенетической конференции” (Москва, 29-31 августа2018).Апробация диссертации состоялась на заседании апробационнойкомиссии ФГБУ “НМИЦ АГП им.
В.И.Кулакова” Минздрава России24 сентября 2018 года, протокол №10.12Внедрение результатов исследования в практикуРезультаты исследования одобрены Ученым Советом ФГБУ “НМИЦАГП им. В.И. Кулакова” Минздрава России и применяются в практическойработе Института репродуктивной генетики, в работе 2-го акушерскогоотделения патологии беременности, а также используются в учебномпроцессенакафедреакушерстваигинекологиидепартаментапрофессионального образования ФГБУ “НМИЦ АГП им.
В.И. Кулакова”Минздрава России и в научно-производственной деятельности ООО “НПОДНК-Технология”.применениюОпубликованыДНК-скрининга,методическиеутвержденныерекомендацииРоссийскимпообществомакушеров-гинекологов:DOI: https://dx.doi.org/10.18565/aig.2016.6.recomendationsПолучен патент "Способ определения источника анеуплоидных клетокпо крови беременной женщины" (RU2016152686A).ПубликацииПо материалам диссертации опубликовано 19 работ, из них 8 статей врецензурируемых научных журналах, входящих в список ВАК, 10 тезисовдокладов в сборниках трудов конференций, получен 1 патент.Личный вклад автораАвтором проведена систематизация литературных данных по темедиссертации, самостоятельно разработаны дизайн и программа исследования,диссертантпринималучастиедиагностике, ретроспективном ивобследовании,консультировании,проспективном анализе результатовисследования пациентов, включенных в работу. Автором осуществлялись:получение,подготовка,преаналитическомэтапе,хранениеучастиебиологическоговматериаланамолекулярно-генетическихисследованиях.
Анализ, статистическая обработка полученных данных13проведены автором самостоятельно в соответствии с правилами иобеспечивают достоверность результатов и сформулированных выводов.Описаниеипубликациярезультатовклиническихилабораторныхисследований выполнены автором лично.Объем и структура работыДиссертация изложена на 150 страницах печатного текста и состоит извведения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования,главы результатов собственных исследований и их обсуждения, заключения,выводов,спискаиспользованнойлитературы,9 приложений.Работаиллюстрирована 8 таблицами и 32 рисунками.
Указатель литературысодержит 155 библиографических источников, в том числе 7 отечественныхи 148 иностранных публикаций.14Глава 1. Обзор литературы1.1 Хромосомные анеуплоидииХромосомные анеуплоидии (ХА) - генетические нарушения, прикоторых число хромосом в клетках не кратно основному набору. Историяоткрытия ХА начинается с 19 века, когда J.
Arnold наблюдал митотическиехромосомы в клетках опухолей, а W. Flemming, исследуя митозы в клеткахроговицы, обнаружил в метафазах 22-28 хроматиновых тел [5, 6]. В 1912 г.H. Winiwarter обнаружил 47 хромосом в метафазах сперматогоний и 23аутосомные пары плюс непарную X-хромосому в сперматоцитах [7]. Онпредположил, что женский пол у человека определяется системой половыххромосом ХХ, а мужской - Х0.
В 1923 г. T. Painter по хромосомам всперматогониях и сперматоцитам установил, что диплоидное числохромосом для обоих полов 48, а система половых хромосом представленахромосомами ХХ для женщин и XY для мужчин [8]. Долгое время вопрос очисле хромосом считался решенным (2n = 48). Большой неожиданностьюстало опубликованное в начале 1956 г.
сообщение шведских цитологовJ.H. Tjio и A. Levan, согласно которому число хромосом в культурефибробластов лёгкого от трех эмбрионов человека равно 46 [9]. Учитываявозможность утери 2-х хромосом у эмбрионов, они воздержались отокончательногоответаирекомендовалидальнейшеетщательноеисследование. Их сообщения были подтверждены в том же году C.E.
Ford иJ.L. Hamerton, которые окончательно установили наличие гаплоидногонабора из 23 хромосом в сперматозоидах человека и кратного емудиплоидного набора из 46 хромосом в сперматогониях (2n = 46) [10]. В1959 г. была выявлена первая хромосомная болезнь, вызванная анеуплоидией- было обнаружено, что причиной синдрома Дауна является нарушениекратности гаплоидного набора, а именно избыточная 21-ая хромосома(2n + 1 = 47) [11].
Такое состояние обычно обозначается как трисомия по1521-й хромосоме. К настоящему времени установлено, что на ранних этапахэмбрионального развития ХА могут наблюдаться фактически по всемхромосомам. При этом рождение живых детей с полной формой большинстваанеуплоидийпрактическинепроисходитиз-заэлиминациинежизнеспособных эмбрионов на ранних сроках беременности [12]. Особуюклиническую значимость имеют анеуплоидии по 13, 18 и 21 хромосомам, атакже по половым хромосомам. Они могут наблюдаться у новорожденныхдетей с синдромами Дауна, Эдвардса и Патаy, отсутствие второй Ххромосомы у женщин, т.е.
моносомия по хромосоме Х, приводит кпроявлениям синдрома Тернера, лишняя хромосома Х у мужчин являетсяпричиной синдрома Клайнфельтера (указанные синдромы с вовлечениемполовыххромосомбесплодием) [13,14].сопровождаютсяАнеуплоидиямипомужскимиразличнымженскимхромосомамобусловлены около половины потерь беременности до 12 недель. Какправило, они возникают de novo. Вероятность возникновения ХА у плодавозрастает с возрастом женщины [17].1.2 Цитогенетические методы исследования1.2.1 КариотипированиеДальнейший прогресс в исследовании ХА происходил благодаряудачному объединению целого ряда методов - применению световой (в т.ч.люминесцентной) микроскопии,клеточных культур, гипотоническогораствора,разбросукоторыйспособствуетхромосомнапрепаратах,использованию колхицина, который вызывает аккумуляцию митозов иварьирующую степень сжатия хромосом, применение фитогемагглютинина,который стимулирует переход лейкоцитов в митотическое состояние,применение трипсина для дифференциальной окраски хромосом [15].Разработанныйкначалу1970-хгодовметодкариотипированияс16незначительными модификациями широко применяется и до настоящеговремени, являясь стандартом при исследовании хромосом.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
