Главная » Просмотр файлов » Диссертация

Диссертация (1174340), страница 6

Файл №1174340 Диссертация (Совершенствование системы пренатального скрининга анеуплоидий плода на основе анализа внеклеточной ДНК крови матери) 6 страницаДиссертация (1174340) страница 62020-05-24СтудИзба
Просмтор этого файла доступен только зарегистрированным пользователям. Но у нас супер быстрая регистрация: достаточно только электронной почты!

Текст из файла (страница 6)

Согласно приказу № 457 от 2000 г в срок 16-20недель беременности должен осуществляться забор проб крови у всехбеременных женщин для проведения исследования у них уровней не менеедвух сывороточных маркеров: альфафетопротеина (АФП) и хорионическогогонадотропина человеческого (ХГЧ), в то же время, согласно приказу № 572н28от 2012 г данное исследование не проводится, а при сроке беременности11-14 недель проводится комплексная пренатальная (дородовая) диагностиканарушений развития ребенка, включающая УЗИ врачами-специалистами иопределениематеринскихсывороточныхмаркеров(связанногосбеременностью плазменного протеина А и свободной бета-субъединицыхорионического гонадотропина) с последующим программным комплекснымрасчетом индивидуального риска рождения ребенка с хромосомнойпатологией.3.

Отличаются показания для направления беременной женщины наконсультацию с целью решения вопроса о проведения инвазивнойпренатальной диагностики. Согласно приказу № 457 от 2000 г показаниямидля ее проведения являются: возраст матери 35 лет и старше; рождение всемьеребенкасхромосомнойпатологией;носительствосемейнойхромосомной аномалии; наличие у плода ВПР; наличие эхографическихпризнаков хромосомной патологии; отклонение уровней сывороточныхматеринских маркеров АФП, ХГЧ и других.

Согласно приказу № 572н от2012 г. показаниями для проведения инвазивной пренатальной диагностикеявляются установлении у беременной женщины высокого риска похромосомным нарушениям у плода (индивидуальный риск 1/100 и выше) в Iтриместре беременности и (или) выявлении врожденных аномалий (пороковразвития) у плода в I, II и III триместрах беременности.4. Оба приказа при пренатально диагностированных врожденныханомалиях (пороках развития) у плода предусматривают проведениеконсилиума врачей, однако состав консилиума в разных приказахотличается: согласно приказу № 457 от 2000 г.

при выявлении ВПР,хромосомной или другой наследственной болезни у плода тактика ведениябеременности определяется консультативно, о чем делается запись вмедицинской документации беременной женщины. Консилиум долженвключать врача-генетика, врача ультразвуковой диагностики, врача акушерагинеколога, по показаниям-врача-неонатолога и других специалистов, а29согласно приказу № 572н от 2012 г в случае установления в медикогенетической консультации (центре) пренатального диагноза врожденныханомалий (пороков развития) у плода определение дальнейшей тактикиведения беременности осуществляется перинатальным консилиумом врачей.в который должны входить врач-акушер-гинеколог, врач-неонатолог и врачдетский хирург.Помимо указанных противоречий, ситуация усугубляется тем, чтоприказ № 572н от 2012 г. определяет порог высокого риска по хромосомнымнарушениямуплода(и,соответственно,критерийобязательногонаправления пациенток на инвазивную диагностику) как 1/100 и выше, азарегистрированная МЗ РФ и разрешенная к применению программа PRISCAпо умолчанию использует порог 1/250.1.6 Неинвазивное выявление анеуплоидий по клеткам плодаВ 70-90-е годы появились противоречивые сообщения о возможностинеинвазивнойгенетическойдиагностикипоклеткамплода,предположительно поступающим в материнский кровоток, а также вразличные отделы цервикального канала.

Одни исследователи сообщали овозможности подобной диагностики [30,31,32,33,36,42]. В то же времядругие не могли воспроизвести их результаты [34,37,43,44,45]. Однако,несмотря на невоспроизводимость получаемых результатов, абсолютнаябезопасность неинвазивного подхода для матери и плода позволяларассматривать его в качестве перспективного [29]. В связи с крайне низкимколичеством циркулирующих в материнском кровотоке клеток плодовогопроисхождения, исследователями предлагались различные способы ихпредварительного обогащения.

Наиболее перспективными представлялисьсортировка с помощью магнитного поля - магнитно-активированнаяклеточная сортировка (MACS) и флуоресцентно-активированная клеточнаясортировка(FACS)сприменениеммоноклональныхантителк30экспрессируемым на клеточной поверхности рецепторам [38,39,40]. Дляположительной флуоресцентно-активированной клеточной сортировки (т.е.обогащения исследуемого образца клетками плода) применялись, например,положительнаяселекцияспомощьюмоноклональныхантителкгликофорину A (GPA), трансферрину (CD71) с применением ДНКспецифичного красителя Hoechst 33342, который может проникать в живыеклетки.

Для обогащения клетками плода применялась и отрицательнаямагнито-активированная клеточная сортировка, которая производилась,например, с помощью панлейкоцитарных моноклональных антител антиCD45. Обогащение плодными клетками также производили и другимиметодами, в т.ч., с помощью двухэтапного градиентного осаждения клетокпри центрифугировании в растворе фиколл-верографина. Для обогащениякультурылимфоцитовпериферическойкровибеременныхженщинлимфоцитами плода применялись специальные методы культивирования,например,“воздушное”technique) [41].Приэтомкультивированиедлядетекции("air-culture"плодныхcytogeneticклетокобычноиспользовался метод FISH с хромосомо-специфичными ДНК-зондами, чащевсего на 13, 18, 21, Х и Y хромосомы. Применение этих методов позволилодоказать наличие клеток плода в материнском кровотоке и определить ихколичество (1 ядерная клетка плода на 105-108 ядерных материнских клеток),а также продемонстрировать потенциальную возможность примененияметодоввклиническойпрактикедляпроведениянеинвазивногопренатального скрининга анеуплоидий.

При этом наиболее значимыерезультатыбылиполученыприиспользованиифлуоресцентно-активированной клеточной сортировки на проточном цитофлюориметре.Несмотря на потенциальные возможности, широкое применениеметодов выявления анеуплоидий по ядросодержащим клеткам плода в кровиматери в клинической практике не произошло.

В основном это было связанос крайне низким содержанием плодных клеток в исследуемых образцах, атакже с нахождением выявляемых клеток на разных стадиях апоптоза, что31делает их непригодными для исследования. Исследователи указывали также,что часть клеток плода может циркулировать в материнском кровотоке ипосле беременности и это может влиять на результаты, получаемые приповторной беременности [35].В настоящее время отдельные попытки использовать для неинвазивнойпренатальной диагностики ядросодержащие клетки плода не прекращаются.Современныеавторыпредлагаютиспользованиеядросодержащихэритроцитов плода [46], клеток трофобласта [47], а также одновременноеиспользование и ядросодержащих эритроцитов, и клеток трофобласта [48].Описываемаяэффективностьсовременныхметодовобогащениясприменением моноклональных антител позволяет выделить из 4 мл кровиматери 14-22 ядросодержащих эритроцита и 1-44 клетки трофобласта, общаяэффективность составляет 2,38 - 7,25 клеток из 1 мл крови матери.

Дляисследования полученного материала авторами предлагается применениеполногеномной амплификации, которая позволяет из единичных клетокплода получить 50 мкл ДНК в концетрации 290-844 нг/мкл. ПолученнуюДНК авторы предлагают анализировать с помощью STR, с применениеммолекулярногогибридизациикариотипирования(aCGH),либосметодомпомощьюсравнительнойгеномнойвысокопроизводительногосеквенирования [48].1.7 Выявление анеуплоидий по внеклеточной ДНК в крови матери1.7.1 История открытия внеклеточной ДНКВ 1995 году группа российских авторов (Казаков В.И. с соавт.) обратилавнимание на внеклеточную ДНК, циркулирующую в крови беременныхженщин, однако их публикация осталась незамеченной [49].

В 1997 годугруппой авторов под руководством Dennis Lo было предложено исследоватьне клетки плода, а циркулирующую в кровотоке матери свободную,32внеклеточную ДНК плода для проведения неинвазивной пренатальнойдиагностики [50]. При этом относительная концентрация внеклеточной ДНКплода по отношению к внеклеточной ДНК матери в плазме материнскойкрови оказалась существенно выше, чем относительная концентрациягеномной ДНК плода в клеточной фракции [51].

В среднем концентрациявнеклеточной ДНК плода составляет 10-12% от общей ДНК в плазме кровиматери. Было установлено, что свободная ДНК представляет собой короткиедвухцепочечные сильно фрагментировые участки ДНК, их длина составляетменее 200 п.н. [52].Немаловажным оказалось и то, что фрагментыфетальной ДНК равномерно представляют геном плода, а выводятся изорганизма матери непосредственно после родов [53].

Характеристики

Список файлов диссертации

Совершенствование системы пренатального скрининга анеуплоидий плода на основе анализа внеклеточной ДНК крови матери
Свежие статьи
Популярно сейчас
Зачем заказывать выполнение своего задания, если оно уже было выполнено много много раз? Его можно просто купить или даже скачать бесплатно на СтудИзбе. Найдите нужный учебный материал у нас!
Ответы на популярные вопросы
Да! Наши авторы собирают и выкладывают те работы, которые сдаются в Вашем учебном заведении ежегодно и уже проверены преподавателями.
Да! У нас любой человек может выложить любую учебную работу и зарабатывать на её продажах! Но каждый учебный материал публикуется только после тщательной проверки администрацией.
Вернём деньги! А если быть более точными, то автору даётся немного времени на исправление, а если не исправит или выйдет время, то вернём деньги в полном объёме!
Да! На равне с готовыми студенческими работами у нас продаются услуги. Цены на услуги видны сразу, то есть Вам нужно только указать параметры и сразу можно оплачивать.
Отзывы студентов
Ставлю 10/10
Все нравится, очень удобный сайт, помогает в учебе. Кроме этого, можно заработать самому, выставляя готовые учебные материалы на продажу здесь. Рейтинги и отзывы на преподавателей очень помогают сориентироваться в начале нового семестра. Спасибо за такую функцию. Ставлю максимальную оценку.
Лучшая платформа для успешной сдачи сессии
Познакомился со СтудИзбой благодаря своему другу, очень нравится интерфейс, количество доступных файлов, цена, в общем, все прекрасно. Даже сам продаю какие-то свои работы.
Студизба ван лав ❤
Очень офигенный сайт для студентов. Много полезных учебных материалов. Пользуюсь студизбой с октября 2021 года. Серьёзных нареканий нет. Хотелось бы, что бы ввели подписочную модель и сделали материалы дешевле 300 рублей в рамках подписки бесплатными.
Отличный сайт
Лично меня всё устраивает - и покупка, и продажа; и цены, и возможность предпросмотра куска файла, и обилие бесплатных файлов (в подборках по авторам, читай, ВУЗам и факультетам). Есть определённые баги, но всё решаемо, да и администраторы реагируют в течение суток.
Маленький отзыв о большом помощнике!
Студизба спасает в те моменты, когда сроки горят, а работ накопилось достаточно. Довольно удобный сайт с простой навигацией и огромным количеством материалов.
Студ. Изба как крупнейший сборник работ для студентов
Тут дофига бывает всего полезного. Печально, что бывают предметы по которым даже одного бесплатного решения нет, но это скорее вопрос к студентам. В остальном всё здорово.
Спасательный островок
Если уже не успеваешь разобраться или застрял на каком-то задание поможет тебе быстро и недорого решить твою проблему.
Всё и так отлично
Всё очень удобно. Особенно круто, что есть система бонусов и можно выводить остатки денег. Очень много качественных бесплатных файлов.
Отзыв о системе "Студизба"
Отличная платформа для распространения работ, востребованных студентами. Хорошо налаженная и качественная работа сайта, огромная база заданий и аудитория.
Отличный помощник
Отличный сайт с кучей полезных файлов, позволяющий найти много методичек / учебников / отзывов о вузах и преподователях.
Отлично помогает студентам в любой момент для решения трудных и незамедлительных задач
Хотелось бы больше конкретной информации о преподавателях. А так в принципе хороший сайт, всегда им пользуюсь и ни разу не было желания прекратить. Хороший сайт для помощи студентам, удобный и приятный интерфейс. Из недостатков можно выделить только отсутствия небольшого количества файлов.
Спасибо за шикарный сайт
Великолепный сайт на котором студент за не большие деньги может найти помощь с дз, проектами курсовыми, лабораторными, а также узнать отзывы на преподавателей и бесплатно скачать пособия.
Популярные преподаватели
Добавляйте материалы
и зарабатывайте!
Продажи идут автоматически
6376
Авторов
на СтудИзбе
309
Средний доход
с одного платного файла
Обучение Подробнее