Диссертация (1154740), страница 13
Текст из файла (страница 13)
Люминальная поверхность почтиполностью эпителизирована, но эпителий выглядит атрофичным, а в отдельныхучастках отсутствует. В ткани, заместившей коллагеновую мембрану, выявляютсялишь единичные гладкомышечные клетки, то есть на месте мембранысформировался преимущественно соединительно-тканный каркас (Рисунок 34Б).Прилежащие к зоне имплантации мембраны ткани выглядят неизмененными,воспалительной инфильтрации не обнаружено.АБРисунок 34 — Гистологическая картина через 1 месяц после заместительнойцистопластики с использованием нативной мембраны из свиного коллагена.А – общий вид, окраска гематоксилином и эозином, х100Б – единичные гладкомышечные клетки, окруженные соединительной тканью,заместившей коллагеновую мембрану, х400Вопытахсимплантациейколлагеновоймембраны,содержащейкондиционированную среду культивирования мезенхимальных стволовых клетокжировой ткани человека, при ревизии мочевого пузыря через 1 месяц послеоперации выявили выраженную гиперемию всего мочевого пузыря не только вобласти операции, но и на отдалении от нее.
Кровеносные сосуды на наружнойповерхности выглядят расширенными. Область имплантации мембраны такжехорошо васкуляризирована, прикрыта новообразованной тканью, сквозь которуюпросвечивают остатки коллагеновой мембраны (Рисунок 35). Мочевой пузырь79содержал мочу, стенка его была расслаблена, тонус повышен не был.Рисунок 35 — Внешний вид мочевого пузыря через 1 месяц после цистопластикис использованием коллагеновой мембраны, содержащей кондиционированнуюкультуральную среду мезенхимальных стволовых клеток жировой ткани человекаПослеудаленияивскрытиямочевогопузырявыявилиполнуюэпителизацию внутренней поверхности.
Новообразованная слизистая оболочкавыглядела нормальной, сохраняла типичную складчатость. Отека слизистой и еегиперемии не выявляли (Рисунок 36).Рисунок 36 — Внутренняя поверхность мочевого пузыря через 1 месяц послецистопластики с использованием коллагеновой мембраны,содержащей кондиционированную культуральную среду мезенхимальныхстволовых клеток жировой ткани человека80Гистологическое исследование препарата из области имплантированнойколлагеновой мембраны выявило ее почти полное замещение тканью мочевогопузыря. Люминальная поверхность имплантата выслана слизистой оболочкой,состоящей из полноценной уротелиальной выстилки (многорядным эпителием) иподслизистогослоя,содержащегополнокровныесосуды(Рисунок37А).Новообразованная стенка мочевого пузыря содержит комплексы гладкомышечныхклеток в значительном количестве, между которыми имеются тонкие прослойкисоединительной ткани (Рисунок 37Б). Коллагеновый матрикс почти полностьюрезорбирован.
Гладкомышечные клетки активно врастают в оставшийся коллаген.АБРисунок 37 — Гистологическая картина мочевого пузыря через 1 месяц послецистопластики с использованием коллагеновой мембраны, содержащейкондиционированную культуральную среду мезенхимальных стволовых клетокжировой ткани человека. А – формирование полноценной слизистой оболочки.Окраска гематоксилином и эозином, х100; Б – регенерация гладкомышечныхклеток в новообразованной стенке мочевого пузыря, х200Таким образом, при использовании мембран, обогащенных культуральнойсредой,происходитновообразованнойболеестенкибыстраямочевогоиболеепузыря,полноценнаярегенерациязамещающейпостепеннорезорбирующийся имплантат.
При этом формируется практически полноценнаяновообразованная стенка мочевого пузыря, содержащая все слои — полнуюэпителиальнуювыстилку,васкуляризированныйвыраженную гладкомышечную оболочку.подслизистыйслойи81Полученные данные свидетельствуют, что при использовании мембраны сосредой культивирования стволовых клеток происходит более полноценнаярегенерация новообразованной стенки мочевого пузыря по сравнению смембранами без этого компонента. Это проявляется в ускорении эпителизациивнутренней поверхности, формировании полноценного подслизистого слоя, болееактивном врастании в новообразованную ткань кровеносных сосудов и, что оченьважно, в регенерации гладкомышечных клеток. Все это должно способствоватьболеекачественномувосстановлениюфункциональнойполноценностиреконструированного мочевого пузыря.Для подтверждения этого положения были проведены функциональныеисследования.В качестве контроля к этим исследованиям была выполнена серия опытов срезекцией мочевого пузыря без заместительной цистопластики с простымушиванием образовавшегося дефекта стенки органа.Через 1 месяц после этой операции при осмотре оперированного мочевогопузыря выявили умеренную гиперемию его стенки и небольшую деформацию(Рисунок 38).
Тонус стенки мочевого пузыря был невысоким.Рисунок 38 — Внешний вид мочевого пузыря через 1 месяц после его резекции(стрелками указана зона резекции)После вскрытия резецированного мочевого пузыря выявили нормальнуюслизистую без признаков отека и гиперемии (Рисунок 39).82Рисунок 39 — Внутренняя поверхность мочевого пузыря через 1 месяц после егорезекции и ушивания дефекта стенки(стрелкой указана зона ушивания дефекта стенки)То есть, макроскопически мочевой пузырь в этой серии экспериментоввыглядел так же, как и в других сериях.Гистологически при этом сроке наблюдения выявляли типичные признакипослеоперационного заживления стенки органа с образованием рубца из рыхлойсоединительной ткани с регенерацией вокруг него пучков гладкомышечныхклеток (Рисунок 40).Рисунок 40 — Гистологическая картина зоны резекции мочевого пузыря через 1месяц после операции.
Окраска гематоксилином и эозином, х40083Мы провели также количественную оценку морфометрических параметров,характеризующих интенсивность регенерации стенки мочевого пузыря через1 месяц после операции для большей объективизации анализа результатовизучаемых вариантов цистопластики (Таблица 2).Таблица 2 — Морфометрические параметры регенерации стенки мочевого пузырячерез 1 месяц после его резекции в различных серияхСерия опытовОтносительная Относительная длинаОтносительнаязанятаядеэпителизированной длина участковплощадь ГМКбазальной мембраны нерассосавшегосяклеток средив слизистой оболочке коллагена (мкм)рыхлоймочевого пузырясоединительной(мкм).2ткани (мкм )Резекция без21,24± 6,17цистопластикиЦистопластика5,24± 0,17мембраной безКСЦистопластика 246,25±12,11***мембраной сКС281,82±13,26-Количествососудистыхпочек наединицеотносительнойплощади стенкимочевогопузыря.10,13±0,16316,07±31.14106,24±12,528,02±0,03164,05±22,18**27,08± 9,27***15,27±0,17***Результаты этого анализа показали, что по сравнению с опытами сушиванием дефекта стенки мочевого пузыря без цистопластики использованиенативной коллагеновой мембраны сопровождается большей протяженностьюдеэпителизированного участка базальной мембраны новообразованной слизистой,болеемассивнымиучасткаминерезорбированногоколлагена,меньшейплотностью новообразованных сосудов, а также значительно менее выраженнойрегенерацией гладкомышечных клеток в зоне операции.
В то же время в опытах сзамещением резецированной стенки мембраной со средой культивированиястволовых клеток отмечается почти полная резорбция имплантированноймембраны, наименьшие значения деэпителизированной внутренней поверхностистенки,наиболеевыраженныйангиогенезиактивнаярегенерациягладкомышечных клеток, значительно превышающая по интенсивности этотпоказатель в других сериях.84Иллюстрация активного ангиогенеза в новообразованной стенке мочевогопузыря после ее замещения коллагеновой мембраной, содержащей средукультивирования стволовых клеток, представлена на Рисунке 41.Рисунок 41 — Множественные новообразованные сосуды в регенерирующейстенке мочевого пузыря после цистопластики коллагеновой мембраной,содержащей среду культивирования стволовых клеток.Окраска гематоксилином и эозином, х200Представленные данные убедительно доказывают положительный эффектвключенияв состав коллагеновой мембраны стимуляторов регенерации,выделяемых стволовыми клетками в среду их культивирования.Важным этапом в нашем исследовании было изучение вопроса, улучшает лиметодиказаместительнойцистопластикиколлагеновымимембранамифункциональное состояние резецированного мочевого пузыря, помимо ускорениярегенерации его стенки, а если улучшает, то насколько.В норме (интактный мочевой пузырь) максимальная емкость мочевогопузыря, определенная при постепенном его наполнении через цистостомическийкатетер до подтекания вводимого физиологического раствора по уретре,составляла 38±1 мл.
В контрольной серии опытов (резекция мочевого пузыря безцистопластики) сразу после резекции мочевого пузыря и его ушивания безцистопластики максимальная емкость органа уменьшалась до 23±1 мл. Через851 месяц после резекции она существенно не изменилась, составив 25±1 мл. Вопытах с замещением дефекта стенки мочевого пузыря после его резекции сиспользованием нативной коллагеновой мембраны через 1 месяц после операциимаксимальная емкость мочевого пузыря составила 26±1 мл, а при использованииколлагеновой мембраны, содержащей кондиционированную культуральную средустволовых клеток, она достоверно возросла — до 35±2 мл (p<0,01),приблизившись к нормальным значениям. Сравнительная характеристика этогопоказателя представлена на Рисунке 41.45*4035302520151050НормаРезекцияРезекция+мембрана Резекция+мембрана сКСРисунок 41 — Сравнение изменения максимальной емкости мочевого пузыря (мл)через 1 месяц после его резекции без и с заместительной цистопластикойразличными коллагеновыми мембранами.* - различия достоверны по сравнению срезекцией мочевого пузыря без цистопластикиДругим важным показателем функционального состояния мочевого пузыряявляется способность его стенки сохранять низкий тонус при постепенномнаполнении мочой без резкого роста внутрипузырного давления (комплаентностьмочевого пузыря).
Показателем этой функции является зависимость ростадавления от введенного объема жидкости (показатель «объем/давление»).Проведенное исследование показало, что в серии опытов, где дефект мочевогопузыря замещали коллагеновой мембраной, содержащей среду культивирования86стволовых клеток, комплаентность реконструированного мочевого пузыря неотличалась от нормы. В серии опытов с использованием коллагеновой мембраныбез культуральной среды отмечали резкое повышение внутрипузырного давлениядаже при небольшом объеме введенной жидкости. Такая же, даже болеевыраженная динамика получена и в опытах с резекцией мочевого пузыря безцистопластики (Рисунок 42).Рисунок 42 — Зависимость «объем/давление» при инфузионной цистометриив разных сериях опытовТо есть в этих опытах комплаентность реконструированного мочевогопузыря оказалась значительно сниженной, что может быть связано с замещениемчасти стенки органа функционально неактивной соединительной тканью,обладающей относительно высокой жесткостью, тогда как при использовании дляцистопластики мембраны со средой культивирования стволовых клеток вновообразованнойстенкерегенерировалифункциональноактивныегладкомышечные клетки.
Наихудшие результаты, полученные в опытах срезекцией мочевого пузыря без цистопластики, могут быть связаны суменьшением его функциональной емкости и рубцеванием стенки в зонеушивания дефекта.В восстановлении функциональной полноценности новообразованнойстенкимочевогопузыряважнуюрольиграетее васкуляризация. Для87характеристики этого показателя в сериях опытов мы использовали методгармонического анализа микроколебаний биоимпеданса стенки мочевого пузыря сколичественным определением амплитуды характерных пиков, один из которых,регистрируемый на частоте сердцебиений и называемый кардиальным пиком С1,отражает состояние микроциркуляции в исследуемой зоне.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
