Диссертация (1154740), страница 10
Текст из файла (страница 10)
В связис этим активно ведутся экспериментальные исследования альтернативныхметодов пластики мочевых путей, в том числе с использованием методов тканевойинженерии. Наиболее используемой основой для создания биоинженерныхконструкций являются препараты на основе коллагена (бесклеточные тканевыематриксы или коллагеновые гели и мембраны). Однако они не лишенынедостатков, поскольку не обладают достаточной прочностью, могут вызыватьвыраженную воспалительную реакцию, подвергаться сморщиванию и необеспечивают адекватную регенерацию мышечной оболочки. Использованиесинтетических или комбинированных материалов лишь частично улучшаетситуацию.Болееперспективным являетсяиспользованиебиоинженерныхконструкций с клеточным покрытием или с включенными в их составсигнальнымимолекулами,регенерацию.Однакостимулирующимипроведенныеклеточнуюисследованиямиграциюявляютсяидостаточноразнородными и иногда противоречивыми.
В связи с этим ряд авторов считают,50что для формирования более определенных научных суждений о перспективностиэтого направления требуются дополнительные экспериментальные доказательства[133,179].Ужеимеютсяпредварительныерезультатыклиническогоиспользования биоинженерных конструкций для лечения детей с нейрогенныммочевым пузырем и начаты более широкие клинические исследования,поддержанные правительством США (Food and Drug Administration), по оценкеэтого метода лечения нейрогенных расстройств мочеиспускания у детей ивзрослых, что свидетельствует об определенных достижениях в этой области[167].Учитываявышеизложенныефакты,былопредпринятоданноеисследование, направленное на изучение возможности заместительной пластикимочевых путей с использованием препаратов коллагена 1-го типа и клеточныхтехнологий.51ГЛАВА 2.
РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙНа первом этапе исследования проведена оценка биосовместимостипрепаратов коллагена 1-го типа, выделенного из тканей различных животных, —крупного рогатого скота (бычий коллаген) или свиней (свиной коллаген). Дляпервоначальнойоценки,насколькоколлагеновыйимплантатвызываетвоспалительную реакцию на инородное тело и чужеродный (ксеногенный) белок,мыиспользовалиупрощеннуюмодель,заключающуюсявподшиванииколлагеновой мембраны к наружной поверхности мочевого пузыря. В ходеисследования рассчитывали получить информацию о реакции как окружающихтканей, так и стенки самого мочевого пузыря при минимальном риске развитияосложнений.2.1 Сравнительная оценка биоинертности мембраниз бычьего и свиного коллагена 1-го типаВсе животные нормально перенесли операцию. Ни в одном случае не былосущественных осложнений.
У 2 кроликов развилось нагноение кожного шва безнегативных последствий.2.1.1 Реакция тканей на имплантат из бычьего коллагенаЧерез 3 суток после подшивания мембраны из бычьего коллагена кнаружной стенке мочевого пузыря при вскрытии брюшной полости кроликаобнаружены спайки между мочевым пузырем и стенкой брюшной полости.Мочевой пузырь визуально с признаками умеренно выраженной воспалительнойреакции. Его стенка гиперемирована даже на расстоянии от подшитой мембраны.Сам мочевой пузырь находится в повышенном тонусе, содержит небольшоеколичество мочи. Подшитая мембрана выглядит набухшей, но плотно связана состенкой мочевого пузыря (Рисунок 7А).При гистологическом исследовании препаратов мочевого пузыря кролика52после подшивания мембраны из бычьего коллагена обнаружено, что в тканимочевого пузыря прилежащей к имплантату, уже на 3 сутки развиваетсявыраженноевоспаление,проявляющеесявмассивнойлейкоцитарнойинфильтрации мышечной оболочки (Рисунок 7Б).
Адвентициальная выстилка подколлагеновой мембраной сохранена, местами значительно утолщена.АБРисунок 7 — Состояние мочевого пузыря через 3 суток после подшивания бычьейколлагеновой мембраны. А – внешний вид. Б – гистологическая картина,окраска гематоксилином и эозином, ув. 100х53Через 7 суток макроскопические воспалительные изменения нарастали.Спаечный процесс между мочевым пузырем и стенкой брюшной полости былболее выражен, что затрудняло его выделение и выведение в операционную ранудля осмотра.
У одного кролика даже развился поверхностный некроз в областиподшитой мембраны (Рисунок 8А, стрелка).АБРисунок 8 — Состояние мочевого пузыря через 7 суток после подшивания бычьейколлагеновой мембраны. А – внешний вид. Б – гистологическая картина, окраскагематоксилином и эозином, ув. 100х. Инфильтрация прилежащей соединительнойткани клетками воспаления, частичное врастание ткани в имплантат54Подшитая коллагеновая мембрана находилась под некротическим налетом.Весь мочевой пузырь был гиперемирован, находился в спастическом состоянии,не содержал мочи. Микроскопическая картина также отражала выраженноевоспаление в прилежащих к мембране тканях (Рисунок 8Б). Адвентициальнаяоболочка значительно утолщена.
В мышечной оболочке очаговые инфильтраты.Отмечается частичная дезинтеграция имплантата с очаговым врастанием в неготкани мочевого пузыря.К 14-м суток выраженность воспалительных изменений уменьшалась,однако сохранялась гиперемия в участках, прилежащих к подшитой мембране и вболее отдаленной зоне (Рисунок 9А, белые стрелки). Подшитая мембрана (чернаястрелка) выглядела набухшей и уменьшенной в диаметре (частичная резорбция).АБРисунок 9 — Состояние мочевого пузыря через 14 суток после подшиваниябычьей коллагеновой мембраны.А – внешний вид. Б – гистологическая картина,окраска гематоксилином-эозином, ув.
100х55Микроскопически, наряду с уменьшением размеров имплантата, наблюдалиуменьшение зоны воспаления и выраженности лейкоцитарной инфильтрации.Коллагеновый имплантат окружен соединительнотканной капсулой (Рисунок 9Б).Таким образом, по результатам этих экспериментов можно сделать вывод,что мембрана из бычьего коллагена вызывает выраженную воспалительнуюреакцию в ранние сроки после подшивания к стенке мочевого пузыря. Этареакция может быть сильно выражена вплоть до развития некроза поверхностныхслоев (в одном опыте), что не может не отражаться на функциональном состояниимочевого пузыря. Он выглядит спастическим, не содержит мочи, что являетсяпризнаком повышенной его возбудимости (состояние гиперактивности мочевогопузыря).
Однако в более отдаленные сроки по мере резорбции коллагенавоспалительная реакция стихает, и мочевой пузырь визуально приближается кнормальному состоянию.2.1.2 Реакция тканей на имплантат из свиного коллагенаЧерез3сутокмалоизмененным.послеЧеткоимплантацииопределяласьмочевойподшитаяпузырьвыгляделколлагеноваямембрана(Рисунок 10А, стрелка). Визуально воспалительных изменений вокруг подшитоймембраны не выявили. Однако при гистологическом исследовании препаратовстенки мочевого пузыря кролика отмечены признаки нерезко выраженнойвоспалительнойинфильтрацииреакции,мышечнойпроявляющейсяоболочки.Привэтомочаговойвлейкоцитарнойотдельныхучасткахадвентициальная оболочка истончена (Рисунок 10Б).Через 7 суток мочевой пузырь внешне также был малоизмененным, безвыраженной воспалительной реакции вокруг подшитой мембраны.
Самамембрана выглядела набухшей и плотно прилегала к поверхности мочевогопузыря (Рисунок 11А).При микроскопическом исследовании была отмечена в области прилеганиямембраны выраженная воспалительная инфильтрация, уменьшающаяся за еепределами. При этом выявили врастание ткани мочевого пузыря в частично56дезинтегрированную мембрану (Рисунок 11Б).АБРисунок 10 — Состояние мочевого пузыря через 3 дня после подшивания свинойколлагеновой мембраны. А – внешний вид. Б – гистологическая картина,окраска гематоксилином и эозином, ув. 100хАБРисунок 11 — Состояние мочевого пузыря через 7 суток после подшиваниясвиной коллагеновой мембраны. А – внешний вид.
Б – гистологическая картина,окраска гематоксилином и эозином, ув. 100хВ одном эксперименте на этом сроке выявили значительную резорбциюмембраны при ее полном срастании с поверхностью мочевого пузыря(Рисунок 12).57Рисунок 12 — Внешний вид мочевого пузыря через 7 суток после подшиваниясвиной коллагеновой мембраны. Резорбция мембраныПри 14-дневном сроке мочевой пузырь имел вид нормального органа.Подшитая коллагеновая мембрана оказалась прикрытой жировой клетчаткой,однако никаких признаков воспалительной реакции вокруг подшитой мембраныне было отмечено (Рисунок 13А). После удаления клетчатки под ней выявилипостепенно резорбирующуюся, частично дезинтегрированную мембрану, плотносращенную с наружной стенкой мочевого пузыря без визуальных признаковвоспаления в прилегающих тканях (Рисунок 13Б).
В то же время пригистологическом исследовании по-прежнему наблюдали умеренно выраженнуюзону воспаления вокруг коллагеновой мембраны. Адвентиций местами утолщен,но в целом имеет нормальную толщину. Выросты соединительной ткани,исходящие из адвентиция мочевого пузыря, местами врастают в коллагеновыйимплантат.Отмечаетсяполнокровиесосудовстенкимочевогопузыря(Рисунок 13В).По результатам экспериментов этой серии можно сделать вывод, чтотестируемая мембрана из свиного коллагена является биологически инертнымматериалом,хорошоинтегрирующимсокружающимивызывающим умеренную воспалительную реакцию.тканями,однако58АБВРисунок 13 — Состояние мочевого пузыря через 14 суток после подшиваниясвиной коллагеновой мембраны. А - внешний вид (стрелкой указана областьподшитой мембраны, прикрытой лоскутом клетчатки).
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
