Диссертация (1154740), страница 9
Текст из файла (страница 9)
Через 12 недель после операции при гистологическомисследовании выявили полную регенерацию уротелия и хорошо сформированнуюмышечную оболочку новообразованной стенки мочевого пузыря, тогда как безэтого клеточного покрытия регенерация мышечной оболочки была неполноценной[136].Современные технологии позволяют выделять стволовые клетки из мочи,избегая инвазивных вмешательств для их получения. Эти клетки экспрессируютмаркеры мезенхимальных стволовых клеток и перицитов и при воздействиитрансформирующим фактором роста β1 и фактором роста тромбоцитов ВВспособны трансформироваться в зрелые гладкомышечные клетки [107]. Онибыстро растут в культуре, а после переноса в организм обладают выраженнойпролиферативной и паракринной активностью, что позволяет их рассматривать вкачестве перспективного материала [209]. Использование этих клеток дляформированиябиоинженернойконструкциина основекомбинированногоскаффолда из поликапролактона с плюроником F127/3 и бесклеточного матриксаподслизистой оболочки мочевого пузыря, по данным Lee J.
et al., обеспечиваетхорошие результаты расширяющей пластики мочевого пузыря у крыс сдостоверным увеличением цистометрической емкости и комплаентности органа[138].Для стимуляции неоангиогенеза в биоинженерном имплантате прицистопластикепредложеноиспользоватьаутологичныеэндотелиальныепрогениторные клетки, выделенные из жировой ткани [144, 193]. Разработанаметодика их выделения из сосудистой фракции стромы жировой ткани икультивирования. При нанесении на трехмерную подложку (Matrigel илибесклеточный матрикс мочевого пузыря) они способны формировать капилляроподобные структуры.
Эти клетки экспрессируют мРНК и белок фактора ростаэндотелия сосудов в значительно большей степени, чем культивированныегладкомышечные клетки детрузора (144). Генетическая модификация этих клетокс внедрением гена фактора роста эндотелия сосудов приводила к способностиэкспрессировать этот фактор.
При замещении части мочевого пузыря свиней46матриксоммочевогопузырясиммобилизированныминанемген-модифицированными клетками достигнута хорошая васкуляризация имплантата,превышающая таковую в опытах с использованием только бесклеточногоматрикса [193].Leite M. et al. и Pokrywczynska M. et al. продемонстрировали, чтомезенхимальные стволовые клетки могут оказывать положительный эффект нетолько при включении их в состав имплантата (бесклеточный матрикс мочевогопузыря), но и при внутривенном введении [120, 189]. Внутривенное введениекрысам клеток, как и их использование в составе имплантатов, ускоряетрегенерацию не только уротелия и гладкомышечных клеток, но и нервныхструктур в имплантате, замещающем часть мочевого пузыря [187, 189].1.2.2.2 Использование паракринных факторов стимуляции регенерацииПри использовании стволовых клеток в биоинженерных конструкциях дляпластики мочевых путей используется не только их способность к пролиферациии замещению поврежденных клеток органа, но и их паракринная активность —секреция комплекса факторов роста, цитокинов, противоспалительных пептидов идругих факторов, способствующих активации резидентных стволовых клеток истимуляции регенерации дифференцированных функционально активных клеток[69, 120, 186].
При этом последняя функция по мнению ряда авторов может бытьглавной [152].В связи с этим изучается эффективность включения в биоинженерныеконструкции вместо стволовых клеток биологически активных соединений,секретируемых ими.Yang B. et al. сравнивали влияние 8 факторов роста (факторы ростатромбоцитов ВВ и СС, основной фактор роста фибробластов, фактор ростаэндотелия сосудов, фактор роста эпидермиса, инсулиноподобный фактор роста-1,факторростагепатоцитовитрансформирующийфакторростаβ)напролиферацию, миграцию и способность к заживлению тканевых дефектовкультивированных гладкомышечных клеток мочевого пузыря, уротелиальных47клеток и клеток пупочного канатика человека. Наиболее активными оказалисьфакторы роста тромбоцитов ВВ, эпидермиса и эндотелия сосудов, причемкомбинация этих факторов оказывала более выраженный эффект, чем поотдельности.
Авторы рекомендовали использовать эти факторы в составебиоинженерных конструкций для пластики мочевых путей [143]. Данные AntoonR. et al. также свидетельствуют о способности фактора роста тромбоцитов ВВ итрансформирующегофакторароста-β1стимулироватьпролиферативнуюактивность гладкомышечных клеток мочевого пузыря [142].Включение этих факторов с состав биоинженерных конструкций повышаетих функциональные свойства.Использование матрикса из бычьего коллагена 1-го типа с гепарином ииммобилизированным на нем фактором роста эндотелия сосудов, фактором ростафибробластов 2 и эпидермальным фактором роста для коррекции хирургическисмоделированной экстрофии мочевого пузыря у ягнят приводило к формированиюполноценного мочевого пузыря с полной уротелиальной выстилкой внутреннейповерхностиимплантата,формированиемвнеммышечногослояиновообразованной сосудистой сети.
При использовании коллагенового матриксабез комплекса факторов роста эти изменения были менее выражены [96].Иммобилизированный с помощью фибрина инсулиноподобный факторроста-1 на коллагеновой основе в виде сэндвича (гепарин+фактор роста между 2слоями коллагенового геля) индуцировал регенерацию гладкомышечных клетокмочевого пузыря крыс дозо-зависимым образом, что давало существенноепреимущество этого материала перед стандартными бесклеточными матриксами[141]. Аналогичные результаты получены при нанесении этого фактора роста натрехмерный фибриновый матрикс [122].Включениеосновногофактораростафибробластоввсоставкомбинированного скаффолда из поликапролактона и бесклеточного матриксаподслизистого слоя тонкой кишки с нанесенными на него стволовыми клетками,выделенными из мочи, повышает эффективность расширяющей пластикимочевого пузыря, способствуя увеличению его объема, комплаентности и48активности регенерации новообразованной стенки мочевого пузыря, чтообеспечивается постепенным выделением этого фактора из имплантата [88, 138].Использование фактора роста эндотелия сосудов в составе наночастиц изсополимера молочной и гликолиевой кислот, нанесенных на бесклеточныйматриксмочевогопузыря,ускоряетваскуляризациюэтогоимплантата,замещающего часть мочевого пузыря, что сопровождается более активнойрегенерацией клеточных структур и менее выраженным фиброзированиемимплантата (на 27%) по сравнению с опытами без использования фактора роста.Подтверждено, что положительный эффект связан с постепенным выделениемиммобилизированного фактора роста в окружающие ткани [214].
Аналогичныерезультаты получены Xiong Q. et al. в опытах на свиньях. Они подтвердили, чтоулучшение функциональных результатов цистопластики с использованиеманалогичногоимплантатасопряженоспостепеннымвыделениемиммобилизированного фактора роста эндотелия сосудов в течение 3 месяцев, чтосопровождалось более активной васкуляризацией и на 57% менее выраженнымфиброзированием имплантата по сравнению с опытами без использования этогофактора роста [65].Использование комбинации нескольких факторов роста, по данным Jiang X.et al., может быть более эффективной. Авторы оценивали эффективностьиспользования системы из термочувствительного геля с включенными в негофактором роста эндотелия сосудов и основного фактора роста фибробластов,нанесенного на бесклеточный матрикс мочевого пузыря, для цистопластики.
Ониустановили, что имплантат выделяет инкорпорированные факторы роста вокружающие ткани, за счет чего обеспечивается реконструкция новообразованнойстенки мочевого пузыря. Интенсивность эпителизации внутренней поверхности,формирования мышечной оболочки и васкуляризации этого имплантата былавыше, чем в опытах с использованием только бесклеточного матрикса или одногоиз факторов роста, а степень фиброзирования значительно меньше [111].Zhou L. et al.
также использовали комбинацию 2 факторов роста (факторароста тромбоцитов ВВ и фактора роста эндотелия сосудов), инкорпорированных в49бесклеточный матрикс мочевого пузыря, для расширяющей цистопластики укроликов.Исследованиесократимостиполосокновообразованнойстенкимочевого пузыря в стендовой установке выявило лучшие показатели посравнению с опытами, где имплантировали только матрикс без факторов роста, апри гистологическом исследовании выявили полноценную эпителизацию иформирование гладкомышечного слоя в опытной серии, тогда как в контролерегенерация клеток была менее выражена [110].Проведенный анализ литературы последних лет свидетельствует, чтопроблема заместительной пластики мочевых путей по-прежнему остаетсяактуальной.
Традиционно используемая кишечная цистопластика, хотя иобеспечивает хорошие отдаленные функциональные результаты при замещениимочеточника и мочевого пузыря, часто сопровождается осложнениями, особенно враннем и средне-отдаленном послеоперационных периодах. Общепринятыеметодикипластикимочеиспускательногоканалатакженеполностьюудовлетворяют урологов в связи с неполноценной регенерацией стенки уретры ивысокой частотой рецидивов и стриктуры и образования мочевых свищей.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
