Диссертация (1154740), страница 6
Текст из файла (страница 6)
В опытах на собакахпоказано, что его использование для цистопластики обеспечивает надежнуюгерметичность новообразованного мочевого пузыря без случаев развития мочевыхсвищей и образования камней мочевого пузыря в течение 6 месяцев наблюдения[202]. При его предварительной имплантации в брюшную полость этадецеллюлялизированаятканьинфильтрируетсяклеткамимезенхимногопроисхождения, способствуя укреплению сформированной структуры. Послезамещения этим имплантатом дефекта стенки резецированного мочевого пузыряотмечали постепенную эпителизацию его внутренней поверхности с врастаниемотдельных гладкомышечных клеток [89]. В исследовании Gu G. et al. (2012)использован другой метод — измельченный бесклеточный матрикс мочевогопузыря смешивали с выделенными из большого сальника мезотелиальнымиклеткамииинкубироваливтечение7 дней,послечегополученнуюбиоконструцию использовали для реконструкции мочевых путей [203].Однако для полного замещения мочевого пузыря препарат бесклеточногоматрикса мочевого пузыря оказался непригодным.
Лишь при его предварительномкультивировании с нанесенными уротелиальными клетками удалось достичьположительного результата, тогда как без формирования уротелиальной выстилкивсе кролики погибли в пределах 2 недель от осложнений, связанных сосморщиванием имплантата и стриктурами уретеро- и уретро-резервуарногоанастомозов [199].При сравнении свойств децеллюляризированного матрикса мочевого пузыряи тонкой кишки Davis N.
et al. выявили явные преимущества скаффолда из32мочевого пузыря по показателям эффективности прикрепления культивированныхуротелиальных клеток человека, их жизнеспособности и пролиферативнойактивности [125]. Тем не менее, матрикс из тонкой кишки рядом авторов такжепризнается весьма перспективным. Он также обеспечивает хорошую адгезиюклеток, их жизнеспособность и пролиферацию, что обуславливает хорошиерезультаты цистопластики у крыс и собак [134, 148].Положительныйэффектотмеченприиспользованиидецеллюляризированного лоскута толстой кишки. При нанесении на него спомощью аэрозоля фибринового клея с уротелиальными и гладкомышечнымиклетками и замещении им области резекции мочевого пузыря свиней происходиловосстановление функционального объема резецированного мочевого пузыря сполной эпителизацией внутренней поверхности имплантата к 6 месяцам послеоперации[72].ВопытахнакрысахKajbafzadehA.etal.такжепродемонстрировали, что замещение удаленной части мочевого пузыря лоскутомдецеллюляризированнойтолстойкишкиспособствуетсохранениюегонормальной емкости при полной эпителизации внутренней поверхностиимплантата уротелием и врастании гладкомышечных клеток в новообразованнуюстенку мочевого пузыря к 3 месяцам после операции [145].В литературе также имеются единичные сообщения об использованиидругих вариантов бесклеточного матрикса для пластики мочевого пузыря.В опытах на кроликах было продемонстрировано, что после имплантациидецеллюляризированного аппендикса в мочевой пузырь кроликов через 3-6месяцев происходит полная эпителизация внутренней поверхности имплантата.При этом отсутствовали осложнения, характерные для традиционной кишечнойцистопластики [82].
Другие авторы также предлагают использовать аппендикс,лишенный клеток, в качестве матрицы для формирования биоинженерногомочевого пузыря. Из него можно формировать сферическую структуру,имитирующуюмочевойпузырь.Плотнаявнутренняяповерхностьэтогоимплантата способствует его постепенной эпителизации, а пористая наружнаяповерхность — врастанию микрососудов и гладкомышечных клеток [173].33В экспериментальных исследованиях доказана возможность использованиябесклеточного матрикса на основе сосудистой стенки для пластики уретры, в томчисле и с клеточным покрытием из эпителия слизистой оболочки щеки [13].ВопытахнакроликахKajbafzadehA.etпоказали,al.чтодецеллюляризированный перикард может служить подходящей основной длябиоинженерныхконструкций,обеспечивающейхорошуюрегенерациюнанесенных на нее аутологичных гладкомышечных клеток с восстановлениеммышечного слоя новообразованной стенки [147].Имеются данные о возможности использования лишенной клеток путемкриоконсервации амниотической оболочки человека для формирования основыбиоинженерных конструкций, предназначенных для пластики мочевых путей[161].
Культивирование на ее поверхности уротелиальных клеток сопровождаетсяформированиемполноценнойвыстилкиклетками,молекулярноиультраструктурно сходными с нативным уротелием [149].Наряду с положительными результатами ряд авторов отмечает, чтоиспользование децеллюляризированных тканевых матриксов (тонкой кишки,мочевого пузыря) нередко сопровождается фиброзированием трансплантата, чточаще выявляется при экспериментах на крупных лабораторных животных [134] иэти матриксы не могут обеспечивать адекватную регенерацию мышечныхэлементоввзамещаемоморгане[76].Улучшениюрезультатовможетспособствовать их покрытие аутологичной тканью, что было показано вэкспериментах по пластике уретры у кроликов [207].Поскольку бесклеточные тканевые матриксы состоят преимущественно изколлагеновой основы, изучают возможность использования препаратов чистогоколлагена в качестве материала для пластики мочевого пузыря.При замещающей цистопластике у крыс после гемирезекции мочевогопузыря с использованием коллагенового матрикса через 1 месяц после операциипри гистологическом исследовании обнаружили хорошую регенерацию уротелия,имеющего близкую к норме морфологию, однако количество врастающихгладкомышечных клеток и новообразованных капилляров к этому сроку оказалось34невелико [127].При замещении коллагеновой мембраной части мочевого пузыря кроликовпосле его резекции Lepper F.
et al. отмечали возрастание функционального объемаоргана через 12 недель после операции по сравнению с контрольной группой(резекция мочевого пузыря без его пластики). При этом отмечали выраженнуювоспалительную реакцию в прилежащих к имплантату тканях, наиболеевыраженную через 4 недели и постепенно уменьшающуюся к 12 неделе послеоперации. К этому сроку происходила полная эпителизация внутреннейповерхности имплантата [90].Vardar E. et al. разработали 3-слойную подложку из 2 наружных слоевколлагена и внутреннего слоя фибрина в качестве основы для биоинженернойконструкции стенки мочевого пузыря. Включение фибрина обеспечиваетсвязывание как клеток, так и сигнальных молекул, что создает хорошие условиядля регенерации мочевого пузыря после расширяющей цистопластики [141].В опытах на овцах Roelofs L.
et al. изучали возможность цистопластикиэкстрофированного мочевого пузыря препаратом бычьего коллагена 1-го типа. Дляэтого на 79-й день беременности у плодов хирургически формировали экстрофиюмочевого пузыря. Через 1 неделю после рождения ягнят производилицистопластику коллагеновой структурой. В контрольной серии аналогичнуюцистопластику проводили у здоровых ягнят. Уродинамическое исследование,проведенное через 1 и 6 месяцев, не выявило существенных различий междусравниваемыми группами за исключением несколько сниженной комплаентностимочевого пузыря в опытах с моделированием экстрофии. Гистологическоеисследование выявило частичную эпителизацию имплантата и начало врастаниягладкомышечных клеток через 1 месяц после операции с полной регенерациейуротелия и продолжающимся формированием мышечного слоя в обеих группах к6 месяцам [194].Биодеградируемыйколлагеновыйматриксснанесенныминаегоповерхность аутологичными кератиноцитами используют для пластики уретры удетей с гипоспадией [41].35Благоприятные свойства коллагеновых подложек могут быть объяснены тем,что «посеянные» на них стволовые клетки при культивировании в большейстепени сохраняют низкодифференцированные свойства, чем при использованиисинтетических подложек, что обеспечивает более выраженные их пластические ирегенерационные свойства после имплантации в организм [142].В то же время опубликованы негативные результаты использованияпрепаратов коллагена.
Ayyildiz A. et al. в опытах на кроликах оценивал свойствакоммерческого препарата свиного бесклеточного коллагенового матрикса Pelvicolпри пластике мочевого пузыря после его резекции. В первую неделю послеоперации они выявили резко выраженную воспалительную реакцию, котораяпостепенно исчезала к 3 месяцам и частичную эпителизацию имплантата. Через 3месяца отмечали образование микрокальцификатов на внутренней поверхности илишь очаговую регенерацию гладкомышечных клеток [211]. По даннымKajbafzadeh A. et al. (2014) использование 3-мерного коллагенового матрикса дляцистопластики у крыс сопровождается разной степенью склерозированияимплантата с отсутствием функционального эффекта.
Лишь в случаях, когда наколлагеновую мембрану наносили клеточное покрытие в виде уротелиальныхи/или гладкомышечных клеток, достигался положительный результат пластикимочевого пузыря и уретры [94, 102, 106, 141].Предложен метод формирования трехмерной биоинженерной конструкциидля замещения мочевого пузыря на основе коллагенового геля. На гелевой основезакрепляли мезенхимальные клетки, после чего ее обрабатывали мочой в течение20 минут и наносили уротелиальные клетки. После 15 дней культивирования спериодическимвоздействиеммочойполучалипрепарат,готовыйдлярасширяющей пластики мочевого пузыря. Обработка мочой, по мнению авторов,необходима для предотвращения избыточной пролиферации уротелия в процессекультивирования, что было подтверждено гистологическим исследованием иопределением экспрессии Ki4 [101].В работе Шехтер А.Б.
и соавт. провели сравнительное исследование 9различных биологических коллаген-содержащих основ для формирования36биоинженерных конструкций: пористые материалы, реконструированные израствора коллагена, композит коллагеновой губки и викриловой сетки,децеллюляризированная и лиофилизированная дерма коров, лошадей и рыб,подслизистая основа стенки тонкой кишки (SIS), децеллюляризированные твердаямозговая оболочка коровы и бедренная артерия человека при их имплантации вподкожную клетчатку крыс. При гистологическом исследовании не обнаружилипризнаков отторжения у всех видов коллагеновых препаратов.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
