Диссертация (1154740), страница 16
Текст из файла (страница 16)
Гиперемия стенки отмечалась только вблизи краев имплантата, тонусстенки был не повышен, спаечный процесс был нерезко выражен.99В опытах по замещению части стенки мочевого пузыря коллагеновоймембраной также выявили определенные преимущества мембран из свиногоколлагена, проявляющиеся в менее выраженном спаечном процессе, меньшейстепени гиперемии, менее выраженном отеке слизистой оболочки в зоне контактас мембраной, а также значительно менее выраженной воспалительной реакции взоне имплантата по данным гистологического исследования.В то же время в обеих сериях опытов (вшивание мембран из бычьего или изсвиного коллагена) во всех случаях выявлена хорошая интеграция мембран вткань мочевого пузыря с постепенным замещение имплантата соединительнойтканью. Ни в одном случае не отмечали развития недостаточности швов иразвития мочевых свищей или мочевых затеков. У всех животных мочевой пузырьсохранял свою герметичность как на ранних, так и на поздних сроках наблюдения.В то же время за период наблюдения в обеих сериях не происходило полнойэпителизации внутренней поверхности имплантатов.
Даже через 21 деньсохранялись деэпителизированные зоны имплантированной мембраны, покрытыебелково-солевым налетом. Лишь у 1 кролика визуально зона, не покрытаяслизистой оболочкой, отсутствовала, но при гистологическом исследовании всежевыявлялисьрегенерациидеэпителизированныестенкимочевогопузыряучастки.приТоесть,использованииинтенсивностьобоихвидовколлагеновых мембран была примерно одинаковой.При исследовании показателей функции мочевого пузыря в различныесроки после вшивания коллагеновых мембран выявили, что если в ранние сроки(7 суток после операции) происходило сопоставимое уменьшение максимальнойемкости мочевого пузыря (на 29,2% и 22,9% в опытах с бычьим и свинымколлагеном, различия статистически недостоверны), то через 14 и 21 деньвосстановление емкости мочевого пузыря происходило более выражено в опытахсо свиной коллагеновой мембраной.
Через 21 день она почти нормализовалась,составив 93,8% от нормы, тогда как при использовании бычьей мембраны онавозросла только до 81,3% (p<0,05).Анализ этих результатов показал, что оба исследованных препарата100коллагенаобладаютприемлемымибиологическимисвойствами,обеспечивающими возможность их использования для пластики мочевых путей,поскольку они способствуют восстановлению анатомической целостности игерметичности реконструированного органа.
Однако мембраны из свиногоколлагенаобладаютопределеннымипреимуществамиввидебольшейбиоинертности и лучшей способности восстанавливать функцию поврежденногомочевого пузыря.В связи с этим в дальнейших экспериментах мы использовали препаратыколлагена 1-го типа из тканей свиньи.В нашем исследовании мы предприняли попытки использования трубчатогоколлагенового протеза для пластики мочеиспускательного канала и мембранныйпрепарат для пластики мочевого пузыря кроликов.Технически во всех опытах удалось, хотя и с определенными техническимисложностями, заместить дефект уретры, образовавшийся после ее пересечения,коллагеновой трубкой и дренировать уретру катетером, который фиксировали кголовке и к коже полового члена.
Однако всем животным после выхода из наркозаудавалось удалить катетер на 1-е или 2-е сутки после операции, в результате чегоне достигалась герметизация уретры и развивались мочевые затеки, вызвавшие водних случаях воспаление и нагноение окружающих тканей, а в других —стенозирование дистального анастомоза и образование мочевого свища.Использование «воротника» для затруднения доступа животного к уретре недало желаемого эффекта, так как он при больших размерах препятствовал доступуживотного к воде и корму, а при меньших размерах не мешал самостоятельномуудалению катетера.В результате нам не удалось достигнуть положительного «клинического»результата, однако, макро- и микроскопическое исследование имплантата вопытах, где он не подвергся гнойной деструкции, показало его интегрирование вткани уретры с формированием эпителиальной выстилки внутренней поверхностии васкуляризированного подслизистого слоя.
Протез сохранял проходимость. Тоесть, неудача в этой серии не была связана с биологическими свойствами101коллагенового протеза, а была обусловлена технической невозможностьюобеспечить адекватное дренирование уретры в течение времени, достаточного длягерметизациианастомозов.Дляегообеспечениянеобходимаразработкаспециальных приемов и регулярное наблюдение за животными с целью контроляих поведения.Цельюдальнейшихисследованийбылосравнительноеизучениеэффективности заместительной пластики мочевого пузыря после его резекции сиспользованием мембраны из свиного коллагена 1-го типа, не содержащей илисодержащей кондиционированную среду культивирования мезенхимальныхстволовых клеток тканей человека. Модель пластики резецированного мочевогопузыря является значительно более простой и, по данным литературы, наиболеечасто используется для изучения свойств материалов, предлагаемых для пластикимочевых путей, в связи с чем мы ее и выбрали.
Выбор компонента для стимуляциирегенерации новообразованной стенки мочевого пузыря был обоснован тем, чтосогласно множеству публикаций, стволовые клетки различного происхожденияпри культивировании секретируют в окружающую среду комплекс биологическиактивныхвеществ(цитокины,факторыроста),оказывающиймощныйцитопролиферативный эффект.
Мезенхимные клетки жировой ткани быливыбраныв связи с возможностью получения исходногоматериала отурологических больных при оперативном вмешательстве. Их активность вотношении стимуляции клеточной пролиферации доказана в многочисленныхисследованиях на различных биологических моделях.Оценку результатов заместительной цистопластики проводили через1 месяц после операции.Анализ результатов показал, что использование обоих вариантов мембрансопровождается их хорошей интеграцией в ткани мочевого пузыря, как и впредыдущих сериях опытов. Особенностью опытов с мембранами со средойкультивирования стволовых клеток была усиленная васкуляризация поверхностиоргана с наличием расширенных магистральных сосудов, чего не наблюдали вдругой серии экспериментов.
При этом через 1 месяц после имплантации102стандартной коллагеновой мембраны наблюдалась почти полная эпителизациявнутренней поверхности имплантата с остатками нерассосавшейся мембраны подэпителиальной выстилкой, а в опытах с мембраной, содержащей средукультивирования стволовых клеток, внутренняя поверхность мочевого пузыря взонеимплантациивыгляделапрактическинормальной.Признаковвоспалительной реакции не выявляли в обеих сериях опытов.Если макроскопически между исследуемыми группами различия былинезначительными, то при гистологическом исследовании выявилось явноепреимущество использования мембран с продуктами секреции стволовых клеток.В этих опытах отмечена наименьшая протяженность внутренней выстилки,лишенной уротелия, и протяженность оставшегося коллагенового материала.
Норазительные отличия отмечены в отношении регенерации гладкомышечныхклеток к новообразованной стенке мочевого пузыря. Их количество в зонеимплантата почти в 50 раз превышало их число в опытах со стандартноймембраной. При этом на гистологических препаратах отмечено активноеврастание гладкомышечных клеток в деградирующую коллагеновую основу.
Тоесть, включение среды культивирования стволовых клеток в состав имплантатарезко активирует миграцию и регенерацию гладкомышечных клеток в имплантате.Нарядусэтимзначительноускоряетсяваскуляризацияимплантата.Вгистологических препаратах из этой серии опытов выявляется практически в 2раза больше новообразованных сосудов («сосудистых почек»), чем в опытах сцистопластикой стандартной коллагеновой мембраной.При сравнении этих параметров с опытами, в которых производили толькорезекцию мочевого пузыря с ушиванием его стенки без цистопластики, ониоказались также достоверно лучше.
Эти опыты служили сравнительнымстандартом протекания регенерационных процессов в стенке мочевого пузыряпослееехирургическойтравмы,которыеобусловленыисключительновнутренними биологическими процессами. Улучшение параметров регенерациипри имплантации мембраны с культуральной средой подтверждает выраженноестимулирующее влияние компонентов этой среды.103Болееполноценнаяобеспечиватьболееполноценности.регенерациявыраженноеИсследованиестенкимочевоговосстановлениевосстановленияеепузырядолжнафункциональнойпараметроворганнойгемодинамики и функциональных показателей подтвердило это положение.Использованная нами методика изучения состояния микроциркуляции наоснове спектрального анализа микроколебаний импеданса стенки мочевогопузыря позволяет оценивать ее в определенной области, а именно междудиагностическими электродами.
При их подшивании по обеим сторонам отобласти имплантации коллагеновой мембраны можно определять интенсивностьмикроциркуляциивзонеимплантата,аследовательно,регистрироватьвыраженность реваскуляризации вшитой мембраны. Колебания импеданса начастоте сердцебиений отражают пульсовые колебания в микрососудах стенкимочевого пузыря, и их суммация в виде отдельного пика, называемогокардиальнымпикомС1,позволяетколичественнооцениватьсостояниемикроциркуляции. Поскольку импеданс представляет собой электрическоесопротивление биологических тканей, то значения пика С1 выражается вмиллиомах (мОм).Определение значений пика С1 через 7 дней после цистопластики выявилочрезвычайно низкие его значения, что вполне согласуется с тем, чтоимплантированная коллагеновая мембрана, исходно лишенная кровеносныхсосудов, к этому сроку не могла прорасти в значительном количествекровеносными капиллярами из окружающих тканей.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
