Диссертация (1151541), страница 14
Текст из файла (страница 14)
–лахноспиры, превышали показатели во 2-ой подопытной группе на – 100%, вконтроле на – 50%; руминококки – на 58% во 2-ой группе и на – 36,8% в контроле, группа клостридий в 3-ей группе была выше на – 13,1%, чем во второй,и на – 35,6%, чем в контроле: бактероидов во второй группе оказалось большена 13,22%, чем у птицы в 3-ей группе, но на – 25,6%, меньше чем в контроле;показатель эубактерий в контроле составлял – 0,2±0,1, во 2-ой подопытнойгруппе – 0,3±0,1 ,а в 3-ей – 0,4±0,2.Анализируя полученные данные с результатами из опыта по изучениюмикрофлоры ЖКТ цыплят-бройлеров, при использовании в рационе кормов,75содержащих кукурузу и пшеницу, в нем мы получили абсолютно другие результаты.
Там показатели у птицы получавшей специальную добавку с пробиотиком, были ниже, чем в контроле: так целюлозолитики на – 5,3%, в т.ч. –лахноспиры – на 44,4%, руминококки – на 29,9% выше, чем у контроля, но на19,6% ниже, чем у птицы из 2-ой группы; клостридии на – 16,8%, бактероидына – 24,11%, эубактерии на – 50%, чем в контроле соответственно. На основании этого можно предположить, что для переваривания комбикорма с включением 45% ячменя по массе комбикорма с ферментативный пробиотикомЦеллобактерин-Т, нужно больше целюлозолитических микроорганизмов, чемпри кормлении рационом с пшеницей и кукурузой, так как для перевариванияячменя необходимо больше ферментативных веществ.В обеих подопытных группах была обнаружена условно-патогеннаямикрофлора: кол-во энтеробактерий в них было одинаковым по 0,2±0,2.
Вконтроле данный показатель был равен нулю. В условиях кислой средыбактероиды проявляют антагонистическую активность по отношению к сальмонеллам, эшерихиям, другим микроорганизмам и, по-видимому, играют существенную роль в резистентности организма к инфекциям. Хотя они и относятся на сегодняшний день к условно-патогенным микроорганизмам, однакорезультаты исследований ряда авторов за последние несколько лет свидетельствуют об их участии в этиологии многих патологических процессов: энтеритов, некротических гепатитов, перитонитов у птицы, особенно мясных пород.Актиномицеты также относятся к нежелательным микроорганизмам кишечника птицы, т.к. являются частыми возбудителями актиномикозов.
У цыплят из контроля количество актиномицетов было ниже, чем в подопытныхгруппах, получавших с кормом ячмень 45% и пробиотик по сравнению с контрольной группой и составляло - 0,4±0,3. Так, количество данных бактерий во2-ой подопытной группе было выше на 75%, а в 3-ей подопытной группе цыплят, получавших ферментативный пробиотик, – на 350% по отношению к контрольной группе.76Кроме резидентной микрофлоры, в желудочно-кишечном тракте спорадически встречаются и другие микроорганизмы, именуемые транзиторными,которые чаще всего высеваются при заболеваниях желудочно-кишечноготракта животных, хотя и среди них встречаются сапрофитные виды микробов.В первую очередь, это клебсиеллы, псевдомонасы, стафилококки, спирохеты,цитробактеры, плесневые грибы и другие микроорганизмы. В ходе проведенияданного эксперимента транзиторной микрофлоры не зарегистрировали, зато уптицы из контроля были обнаружены виррукомикробиа – 9,3 ± 13,1, в подопытных группах этих микроорганизмов не наблюдалось.NGS-секвенирование позволяет узнать состав и структуру бактерий, вт.ч.
не культивируемых на искуственных питательных веществах. Так, во второй подопытной группе их было на – 31,1% больше, чем в третьей группе, ина 56,9%, чем у контрольной группы.Результаты определения структуры бактериального сообщества с помощью NGS секвенирования в опыте с включением ячменя 45% по массе комбикорма представлены на диаграмме 8.Замена кукурузы на ячмень не привела к существенным изменениям качественного состава автохтонной и аллохтонной бактериофлоры слепых отростков ЖКТ исследуемых групп цыплят.
По данным NGS секвенирования,автохтонная микрофлора содержала 8 семейств: бацилллы, лакто- и бифидобактерии, лахноспиры, руминококки, клостридии, бактероиды и эубактерии(рис. 7). С помощью T-RELP-анализа во всех вариантах опыта зафиксированоприсутствие вейлионелл - от 6,43% в контроле до 9,21% в опыте с включениемв рацион цыплят ячменя и пробиотика (группа 3) (рис. 7). По результатамNGS-секвенирования в составе аллохтонной микрофлоры обнаружены энтеробактерии (по 0,2% в группах 2 и 3).77Рис. 7.
Распределение доли микрофлоры в ЖКТ цыплят по данным NGS секвенирования при включении в рацион комбикорма с 60% кукурузы (группа 1к), комбикорма с 45% ячменя (группа 2 о) и комбикорма с включением 45%ячменя и ферментативного пробиотика Целлобактерин-Т (группа 3 о).Доля актиномицетов изменялась от 0,4% (группа 1) до 1,8% (группа 3).Те же семейства условно-патогенных бактерий выявлены при TRELP-анализе,однако их доля в составе бактериофлоры слепого отростка цыплят превышалав 2-3 раза аналогичные показатели, полученные с помощью NGSсеквенирования.Тем не менее нам кажется, что благодаря более совершенной базы микроорганизмов, T-RFLP-анализ обладает большей точностью и чувствительностью, по сравнению с NGS-секвенированием.Таблица 15. – Микробиота кишечника бройлеров, определенная методом TRFLP-анализ (опыт 2)Показатель1БациллыЛактобациллыБифидобактерииВейлионеллы1- контрольная2Полезная микрофлора4,01 ± 3,113,2 ± 11,906,43 ± 1,45Группа2-опытная33-опыная43,36 ± 0,8327,5 ± 8,1907,66 ± 0,9310,9 ± 3,3317,8 ± 0,6909,21 ± 1,28781Целлюлозолитики, в т.ч.лахноспирыруминококкиклостридиибактероидыэубактерии2332,9 ± 5,2840,9 ± 1,748,75 ± 6,051,2 ± 0,663,06 ± 3,353,14 ± 1,078,21 ± 6,129,88 ± 3,717,77 ± 5,5716,5 ± 2,074,52 ± 5,328,12 ± 1,17Условно-патогенные бактерииЭнтеробактерии5,95 ± 7,570,89 ± 0,49Актиномицеты1,14 ± 1,612,24 ± 0,58Патогенные бактерииФузобактерии1,85 ± 2,621,44 ± 0,25Листерии0,13 ± 0,180,14 ± 0,19Стафилококки0,56 ± 0,240,39 ± 0,13Кампилобактер0,69 ± 1,040,75 ± 0,3Патогенные клостидии0,91 ± 1,281,23 ± 1,73Пастереллы2,25 ± 1,911,55 ± 0,9Пептококки0,62 ± 0,71,98 ± 0,74Транзитные бактерииПсевдомонады4,62 ± 3,654,29 ± 1,24Некультивируемые видыНекультивируемые25,3 ± 19,87,76 ± 3,75443,6 ± 0,423,59 ± 0,51,98 ± 0,8114,9 ± 0,26,67 ± 0,4713,2 ± 0,111,01 ± 0,122,16 ± 0,111,02 ± 0,0700,21 ± 0,010,64 ± 0,340,73 ± 1,030,43 ± 0,411,34 ± 0,184,97 ± 0,579,24 ± 0,04Как и при NGS-секвенировании, при изучении микробиоты методом TRFLP-анализа, в содержимом слепых отростков у цыплят бройлеров 3-ейгруппы установлен достаточно высокий уровень бацилл - на 224% больше, чему птицы из второй группы и на 171% больше, чем в контрольной группе.
Темне менее данный метод определил наличие бацилл в пробе, а при NGS-секвенировании данный показатель во второй группе оказался нулевым. Зато приисследовании T-RFLP-анализом ни в одной из проб не были обнаружены бифидобактерии, были определены вейлионеллы - 6,43±1,45 (контроль), во 2-ойгруппе – 7,66 ± 0,93 и 3-ей группе – 9,21 ± 1,28.
Во 2-ой группе, как и в предыдущем тесте, имел место сдвиг микробиоты в сторону лактобацилл, это можетбыть связано с компенсаторным механизмом для приспособления организмаптицы к перевариванию менее питательного с энергетической точки зренияячменя, но более сложного в плане ферментации зерна, у птицы, которые не79получали ферментативного пробиотика Целлобактерин-Т. Показатель во второй группе составил – 27,5 ± 8,19, у контроля этот показатель был меньше на108,3%, а у птицы 3-ей группы на 54,5%.В группе цыплят- бройлеров с введением в рацион пробиотика большаячасть микробного фона слепых отростков была представлена целлюлозолитическими разновидностями – 43,6±0,42, в том числе: лахноспиры – 3,59 ± 0,5;руминококки – 1,98 ± 0,81; клостридии – 14,9 ± 0,2, бактероиды – 6,67 ± 0,47;эубактерии – 13,2 ± 0,11.
У второй подопытной группы и в контроле по отношению к 3-ей группе эти микроорганизмы, имели следующее отношение:лахноспиры – 199,1% и 143,7%; руминококки – 58,6% и 54,5% соответственно.Клостридий у птицы 3-ей группы было больше на 81,4%, чем в контроле, и на50,8%, чем во 2-ой группе, бактероидов во 2-ой группе было больше на147,3%, чем в 3-ей группе и на 112%, чем у птиц контрольной группы; эубактерий в третьей группе было больше на 62,5%, чем во 2-ой, и на 192%, чем уптицы в контрольной группе.Условно-патогенные бактерии представлены энтеробактериями и актимицетами во всех исследуемых образцах. Энтеробактерии в контрольнойгруппе оказалось на 489% больше, чем в 3-ей группе, и на 568%, чем во 2-ойподопытной группе. Актиномицетов оказалось больше во второй группе бройлеров, не получавших ферментативного пробиотика Целлобактерин-Т, на –3,7%, чем у птицы, которая получала препарат, в контрольной же группе данный показатель был ниже на – 96,5%.
Кампилобактеров во 2-ой группе былобольше на 8,7%, чем в контроле, и на 17,1%, чем в 3-ей группе.В отличие от предыдущих образцов, в данных пробах микробиоты оказалось широкое разнообразие патогенных микроорганизмов: во всех трехгруппах были обнаружены – фузобактерии, стафилококки, патогенные клостидии, пастереллы, пептококки, кампилобактеры.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
