Диссертация (1151508), страница 16
Текст из файла (страница 16)
Токсическое действиеразличных конгенеров ПХДД и ПХДФ, а также любых диоксиноподобныхсоединений приводят к токсичности 2,3,7,8-ТХДД, выражаемой в единицахполуэффективной концентрации ЭК 50 .Экотоксикологическую характеристику таких соединений выражают вединицах так называемого «диоксинового эквивалента» ДЭ (ТЕQ).Сравнительныйанализроссийскихтребований с европейскими требованиямисанитарно-гигиеническихпо максимально допустимымуровням диоксинов в различных продуктах животного происхожденияпоказывает, что они идентичны и составляют (пк/г): молоко- 3,0; говядина3,0; свинина- 1,0; птица- 2,0; субпродукты- 6,0.Контроль за диоксиноподобными соединениями осуществляли натерритории Московской области по следующим направлениям:1. Фермах по выращиванию животных и бойнях;2.
Комбикормовых заводах (как сырье, так и готовые корма);3. Боенских предприятиях;4. Перерабатывающих предприятиях (особенно с наличием в продукте жира);5. Контроль кормов.Для определения диоксинов в пищевых продуктах и кормахмыиспользовали два метода: CALUX в качестве скринингового метода иподтверждающий метод газовой хроматографии с масс-спектрометром104высокогоразрешения(HRMS-GC)длядифференциацииразличныхконгенеров, в том числе 17 токсичных 2,3,7,8 ПХДД и ПХДФ идиоксиноподобных полихлорированных дибензофуранов.
Оба метода былиосвоены в институте RIKILT (Голландия), для внедрения в практику методаCALUXприобретено оборудование и методика исследований, а такжелицензия на право применения в РФ (лицензия № СLA – 12.19).Пороговое значение определения диоксинов методом CALUX составляет0,56 нанограмм WHO-PCDD/F-PCB-TEQ/ кг продукта.Преимущества метода CALUX состоит в быстроте проведения анализа(15 образцов в час), низком расходе растворителя (70-130 мл),высокомизвлечении диоксинов (благодаря концентрационному градиенту). Однако,при получении положительного результата по скрининговому методу,окончательный результат по пробе устанавливают после ее исследованияметодом HRMS-GC.Пробы для исследования отбиралисьот мяса всех видов животных,субпродуктов, жиров, молока,рыбы и нерыбных объектов промысла икормов.Нами совместно со специалистами Государственной ветеринарнойслужбы Московской области организован контроль пищевых продуктов икормов на наличие диоксинов и ПХБ с 2011г.,вежегодных планахмониторинга безопасности продуктов животного происхождения и кормовпредусмотрены исследования на диоксины.
Расчеты плана мониторингапроводили с помощью разработанной и утвержденной Методики ФГБУЦНМВЛ.Объемы мониторинговых исследований на наличие диоксинов продуктовживотного происхождения на территории Московской области за период2010-2013гг. составляли: в 2011г. 169 проб, в 2012г.- 139 и в 2013г.- 785 проб.В 2012г. из 139 проб выявлено 2 (1,4%) положительные пробы наналичие диоксинов и диоксиноподобных полихлорированных бифенилов (1105проба-вмясесвинейотечественногопроизводствавыявленывконцентрации 3,85 нг ТЭК ВОЗ/кг жира при нормативе 1,25 нг ТЭК ВОЗ/кгжира; 2 проба в мясе птицы из Германии - в концентрации 3,85 нг ТЭКВОЗ/кг жира при нормативе 1,25 нг ТЭК ВОЗ/кг жира).
В 2013 г. на наличиедиоксинов было исследовано 276 проб различных видов продукции и кормов,в 4(0,5%) случаях были выявлены диоксины, в том числе в говядине изЛитвы (4,39 нг ТЭК ВОЗ/кг жира при нормативе 3,0 нг ТЭК ВОЗ/кг жира),свинине из Украины (1,66 нг ТЭК ВОЗ/кг жира при нормативе 1,25 нг ТЭКВОЗ/кг жира), свинине из Нидерландов (1,63 нг ТЭК ВОЗ/кг жира принормативе 1,25 нг ТЭК ВОЗ/кг жира), свинине из Испании (1,58 нг ТЭКВОЗ/кг жира при нормативе 1,25 нг ТЭК ВОЗ/кг жира). В 2013г.
вотечественных пищевых продуктах и кормах диоксинов и диоксиноподобных полихлорированных бифенилов не выявлено ( ТЭК ВОЗ –Всемирная организация здравоохранения).В 2012г. нами выявлены диоксины в одной пробе отечественного мясасвиней в концентрации, превышающей максимально допустимый уровень.В 2013г. диоксины в пищевых продуктах отечественного производстване выявлены. Однако в импортном мясе свиней и птицы выявляютсядиоксины, что указывает на необходимость для исключения рисков ввоза вРоссию недоброкачественного мяса, скорректировать план мониторингаконтроля остатков и увеличить число исследований импортной продукции,особенно жиросодержащей на наличие диоксинов и ПХБ.2.12. Валидация методаопределения остаточныхколичествтетрациклина в продуктах животного происхождения2.12.1.
Валидация метода определения остаточных количествтетрациклинавпродуктахживотногопроисхожденияиммуноферментного анализа с использованиемТетрациклин производства R-Biopharmметодомнабора Ridascreen®-1061. Оценка специфичности.Использование высоко аффинных антител в наборе обуславливаетспецифичность анализа.Для исследования специфичности метода были проведены экспериментыпо исследованию холостых проб продуктов и проб с внесенным заведомоизвестным количеством тетрациклина (спайков).
Матрицей при валидацииметода определения тетрациклина служили образцы молока.№п\пИсследование заведомо отрицательных проб молокаНомерпробы112233445566778899101011111212131314141515СодержаниететрациклинаОтрицательно(< 1,5 мкг/кг)Отрицательно(< 1,5 мкг/кг)Отрицательно(< 1,5 мкг/кг)Отрицательно(< 1,5 мкг/кг)Отрицательно(< 1,5 мкг/кг)Отрицательно(< 1,5 мкг/кг)Отрицательно(< 1,5 мкг/кг)Отрицательно(< 1,5 мкг/кг)Отрицательно(< 1,5 мкг/кг)Отрицательно(< 1,5 мкг/кг)Отрицательно(< 1,5 мкг/кг)Отрицательно(< 1,5 мкг/кг)Отрицательно(< 1,5 мкг/кг)Отрицательно(< 1,5 мкг/кг)Отрицательно(< 1,5 мкг/кг)Оптическаяплотность(сравнение повоздуху)В/Во %116109116114112110111112110109112111114111112Концентрация(мкг/кг)Не обнаружено(< 2,0 мкг/кг)Не обнаружено(< 2,0 мкг/кг)Не обнаружено(< 2,0 мкг/кг)Не обнаружено(< 2,0 мкг/кг)Не обнаружено(< 2,0 мкг/кг)Не обнаружено(< 2,0 мкг/кг)Не обнаружено(< 2,0 мкг/кг)Не обнаружено(< 2,0 мкг/кг)Не обнаружено(< 2,0 мкг/кг)Не обнаружено(< 2,0 мкг/кг)Не обнаружено(< 2,0 мкг/кг)Не обнаружено(< 2,0 мкг/кг)Не обнаружено(< 2,0 мкг/кг)Не обнаружено(< 2,0 мкг/кг)оНе обнаружено(< 2,0 мкг/кг)Таблица 52Извлекаемость(% открытия)-107161617171818191920202121Отрицательно(< 1,5 мкг/кг)Отрицательно(< 1,5 мкг/кг)Отрицательно(< 1,5 мкг/кг)Отрицательно(< 1,5 мкг/кг)Отрицательно(< 1,5 мкг/кг)Отрицательно(< 1,5 мкг/кг)Не обнаружено(< 2,0 мкг/кг)Не обнаружено(< 2,0 мкг/кг)Не обнаружено(< 2,0 мкг/кг)Не обнаружено(< 2,0 мкг/кг)Не обнаружено(< 2,0 мкг/кг)Не обнаружено(< 2,0 мкг/кг)110110-Таблица 53Исследование проб молока с внесенным заранее известным количествомтетрациклина.
Использовался Рабочий стандартный образец тетрациклинагидрохлорида РСО 9344-139-00494189-2005 , производства ВГНКИ№п\пНомери Содержаниенаименован тетрациклинаие пробы12345Спайк 1Оптическая плотность Концентрация(сравнение по воздуху) (мкг/кг)В/Во %1,5мкг/л1,5мкг/л1,5мкг/л1,5мкг/л1,5мкг/л5858555757Извлекаемость(% открытия)1,21,21,31,21,381809083842. Оценка правильности метода проводилась путем исследованияпроб с внесением заведомо известного количества тетрациклина в чистыепробы, не содержащие тетрациклин (Таблица 53). Оценивалась точностьметода на двух концентрациях тетрациклина, одновременно оцениваласьизвлекаемость тетрациклина с внесением его в различных концентрациях.Использовался Рабочий стандартный образец тетрациклина гидрохлоридаРСО 9344-139-00494189-2005 , производства ВГНКИ.№п\пНомернаименованиепробы1Спайк1Таблица 54Оценка правильности методаи Содержаниететрациклина1,5мкг/лОптическаяКонцентрацияплотность (сравнение (мкг/кг)по воздуху)В/В%551,3Извлекаемость(% открытия)9010823Извлекаемость%Отн.стандартноеотклонение %Спайк212345Извлекаемость%Отн.стандартноеотклонение %1,5мкг/л1,5мкг/л57571,21,38384867,610,0мкг/л10,0мкг/л10,0мкг/л10,0мкг/л10,0мкг/л59594954597,57,511,59,17,575751159175861,3Извлекаемость тетрациклина по всему диапазону измерений составляет, всреднем 86% (75- 115 %).3.
Точность метода.Повторяемость - разница между результатами параллельных определений(при n=5, составляет, в среднем, по диапазону концентраций 1,5-10 мкг/лпорядка, 1,3-7,6%Межоперационная точность, воспроизводимость приведена в таблице 55.Таблица 55Результаты изучения межоперационной точности, воспроизводимости№п\пНомер пробыи наименование1Холостая пробаБазарбаев С.Б.2Сатюкова Л.П.3Бойко М.Н.4СтандартноеотклонениеОтн.стандартноеотклонение%Спайк 1Базарбаев С.Б.СодержаниететрациклинаОтрицательно(< 1,5 мкг/кг)Отрицательно(< 1,5 мкг/кг)Отрицательно(< 1,5 мкг/кг)Оптическаяплотность(сравнениепо воздуху)В/В%111112110Концентрация(мкг/л)Извлекаемость(% открытия)Не обнаружено(< 2,0 мкг/кг)Не обнаружено(< 2,0 мкг/кг)Не обнаружено(< 2,0 мкг/кг)--1,5мкг/л551,39010956789Сатюкова Л.П.Бойко М.Н.СтандартноеотклонениеОтн.стандартноеотклонение%Спайк2Базарбаев С.Б.Сатюкова Л.П.Бойко М.Н.СтандартноеотклонениеОтн.стандартноеотклонение%1,5мкг/л1,5мкг/л57571,21,3+ 0,183847,910,0мкг/л10,0мкг/л10,0мкг/л594954+ 0,19,18,99,19189911,1Таблица 56Валидация метода определения остаточных количеств тетрациклина в молокеметодомиммуноферментногоанализасиспользованиемнабораRidascreen®-Тетрациклин, производства R-Biopharm1.Матрица:20 проба сухого молока2.20 проба молока с внесеннымтетрациклином1,5 мкг/кг3.Результат :<1,2 мкг/кгИзвлекаемость:1,2-1,3 мкг/кг(81-90%)20 проба молока с внесенным тетрациклином10 мкг/кгИзвлекаемость: 7,5-11,5мкг/кг(75-115%)4.Стандартное отклонение при n=5Станд.Отклонение: 1,3 – 7,6%5.Стандартное отклонение точности6.Воспроизводимость при n=595,5%7.Стандарт.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
