Диссертация (1151508), страница 13
Текст из файла (страница 13)
При этом в питательную средувыделяется свободный 4-метилумбеллиферон, обладающий флуоресцентнойспособностью. Количество продуктов реакции прямо пропорциональночисленностипопуляцииисследуемыхмикроорганизмов.Наличиефлуоресцентного сигнала считывается и фиксируется в автоматическомрежиме ридером [МР №02.031-08].Всего нами было исследовано в сравнительном аспекте 160 проб мясаразличных видов животных.
Результаты приведены в таблице 44.Результаты исследований проб мяса различных животныхВид продуктаМясо КРСМясо свинейКоличествоисследованныхпроб2020Таблица 44Результат исследованияОбнаружено стафилококковЭкспрессКлассическийметодметод2323Обнаружено E. coliЭкспресс- Классическийметодметод343484Мясо овецСубпродукты свинейСубпродукты птицШпик свиной20202020Итого12015015011261112611616Результаты, полученные в ходе исследований при использовании экспрессанализатора TEMPO, в 100% случаев совпадали с классическим методомисследования.НодляподтвержденияналичияEscherichiacoliиStaphylococcus aureus классическим методом было затрачено 5 дней, припомощи экспресс-анализатора с учетов пробоподготовки - около 24 часов.При использовании экспресс-анализатора TEMPO:- экономия затрат – одной карты достаточно для одного анализа.
Нетнеобходимости использовать большое количество чашек (пробирок) дляоценки каждого критерия (экономия места в термостатах). Не требуетсявремя на приготовление сред и разведений.- значительное сокращение времени анализа.Экспресс-методсиспользованиеммультипараметрическогоавтоматического иммуноферментного анализатора Vidas/miniVidasФото 5 - Автоматический иммуноферментного анализатора Vidas/miniVidas85В основе качественного автоматизированного определения сальмонелл илистерии моноцитогенес в продуктах питания лежит технология энзимсвязанного иммуноферментного анализа.
Анализ на приборе полностьюавтоматизирован и завершается приблизительно через 45 минут.В ходе опытов установлено:- результаты исследований, проведенные экспресс-методами полностьюсовпадают с результатами классических микробиологических исследований;- высокая чувствительность методов экспресс-методов;- возможность автоматизации проводимых исследований, сохранениеполученных результатов в электронном виде;- значительное сокращение времени при проведении исследований навыявлениеиидентификациюмикроорганизмов.Намипроведенысравнительные исследования 180 проб мяса и 20 проб молока.Проведеннымисравнительнымииспытаниямиуказанныхобъектовветеринарного надзора классическим методом и экспресс методами спомощью автоматических анализаторов Tempo, Vidas установлена высокаяих чувствительность, которые коррелируют с классическим методом,возможность проведения анализа за 24-48 ч., автоматизации проводимыхисследований, сохранения полученных результатов в электронном виде.Рекомендуетсяанализаторыветеринарнымосуществлятьлабораториям,мониторинговыеимеющимэкспрессисследованияпищевыхпродуктов на наличие сальмонелл, листерий, стафилококков и БГКП сиспользвонием скрининговых методов исследований, а положительныйрезультат подтверждать классическим методом посевов на питательныесреды.862.9.
Сравнительное изучение традиционных методов обнаруженияБГКП (колиформ) и E.coli в мясе птицы, используемых в РоссийскойФедерации, и современных методов детекции колиформ и E.coli,используемыми в Евросоюзе и СШАОфициально узаконенные в Российской Федерации методы обнаружениябактерий группы кишечной палочки предусматривают использованиетрадиционныхметодовбактериологии.Ихнедостаткомявляетсяпродолжительность исследования, а также значительные материальныезатраты.
В связи с изложенным, в задачи наших исследований входилосравнить используемые в ветлабораторияхметоды с современнымиметодами детекции бактерий группы кишечной палочки (колиформ) и E.coliв мясе птиц и основанными на применении хромогенных питательных сред.Для достижения указанной цели были поставлены следующие задачи:1. Сравнить гостированные методы, позволяющие выявить и определитьколичество бактерий группы кишечной палочки и E.coli в мясе и мясныхпродуктах, официально зарегистрированные в РФ, с методом определенияколиформных бактерий и E.coli с применением хромогенных индикаторныхсред производства компании Merck (Германия).2.
Изучить родовой и видовой состав представителей семействаEnterobacteriaceae,выявляемыхсиспользованиемотечественныхгостированных методов и метода с применением хромогенных индикаторныхсред из охлажденных и замороженных ножек птицы.Схема постановки эксперимента.Исходя из поставленных задач, была разработана схема постановкиэксперимента.87Схема -1 - Постановка экспериментаИзучение гостированных методов выявления иопределения кол-ва бактерий группы кишечных палочек иE.coli, принятых в РФ и методов выявления и определенияколиформ и E.coli с помощью хромогенных питательныхсред.Анализ данныхлитературыМикробиологические исследования изучаемых объектов согласно:ГОСТ 7702.2-93«Мясо птицы,субпродукты и полуфабрикатыптичьи. Методы выявления иопределения количества бактерийгруппы кишечных палочек(колиформных бактерий родовEscherichia, Citrobacter, Enterobacter,Klebsiella, Serratia)»ГОСТ Р 50454-92 (ИСО 3811-79)«Мясо и мясопродукты.Обнаружение и учетпредполагаемых колиформныхбактерий и E.coli (арбитражныйГОСТ Р 52816-2007 «Продуктыпищевые.
Методы выявления иопределения количествабактерий группы кишечныхпалочек (колиформныхб)Методика определенияколиформных бактерий иE.coli с использованиемхромогенных и флюорогенныхиндикаторных средпроизводства Merck(Германия)Определяемые показатели:- Наличие в смывах с продукта БГКП и E.coli. Количество в смывах с продукта БГКП и E.coli.- Определение родового и видового состава колиформ и их процентное соотношение к E.coli вкаждой пробе.Анализ и обсуждение экспериментальных данных.Объект исследований. Объектом исследования являлись ножкиптицы в охлаждённом (10 образцов) и замороженном (10 образцов)состоянии, приобретённые на продуктовом рынке в Юго-Восточномадминистративном округег.
Москва в районе Марьино, в павильоне«Петелинская птицефабрика» и в торговом комплексе Ашан, производительКалужская птицефабрика.88Определение количества бактерий группы кишечной палочкиДля выделения и поддержания культур бактерий готовили ииспользовали питательные среды: питательный бульон, питательный агар,дифференциально-диагностическая среда Эндо, среда Кесслер, селективнаясреда лактозный бульон с желчью и бриллиантовым зеленым, триптоноваявода, физиологический раствор,Chromo cult Coli form Agar.Пробы мяса птицы, отобранные по ГОСТу 26668-85, исследовали наналичие колиформных бактерий и E. coli с использованием хромогенных ифлюорогенных индикаторных сред производства Merck (Германия), М.:«Федеральный центр Госсанэпиднадзора Минздрава России», 2004г., изданиеофициальное.При использовании Chromo cult, Coli form Agar колиформные бактериирассматривалиферментакакмикроорганизмы,В-галактозидазы;E.coli-характеризующиесякакколиформныеналичиембактерии,характеризующиеся наличием фермента В-глюкуронидазы, и ферментатриптофаназы.Схема 2- Определение количества колиформных бактерий и E.coli сиспользованием хромогенных индикаторных средОбразец (или его разведение)0,1см3на поверхность сред1 см3глубинный посевChromo cult Coli form Agar37° С, 21±3 чЦвет колонийРозовые, красные колонииКолиформные бактерииКОЕ/г (см3)Синие, фиолетовые колонииE.coli КОЕ/г (см3)Тест на индол с реактивомКовача на Chromocult ColiformAgar89Для подтверждения E.coli на среде Chromo cult, Coli form Agar наносиликаплю реактива Ковачанепосредственно на характерно окрашенныеколонии (индольный тест).
Изменение цвета реагента до розово-красного втечение нескольких секунд рассматривали как подтверждение наличияE.coli.Для подсчета количества колиформных бактерий пользовалисьсчетчиком колоний, на котором подсчитывали количество характерноокрашенных колоний.Дифференциация грамотрицательных бактерий на хромогенных средахChromo cult ,Coliform Agar представлена в таблице 45.Таблица 45Дифферентация грамотрицательных бактерийМикроорганизмыЦвет колонийТест на индолКолиформные бактерии (за Розовый, красныйисключением E.coli)E.coliТёмно-синий, фиолетовый-Другие грам (-) бактерииграм(+) бактерии-Бесцветный, бирюзовыйНет роста+Результаты исследованийРезультаты исследования образцов мяса птицы согласно методу,описанному в ГОСТ 7702.2-93 «Мясо птицы, субпродукты и полуфабрикатыптичьи. Методывыявления и определения количества бактерий группыкишечных палочек (колиформных бактерий родов Escherichia, Citrobacter,Enterobacter, Klebsiella, Serratia)» (1 схема).Минимальный срок исследования по 1 схеме занимал 72 ч.
Родовой ивидовой состав колиформ, выявленных при 1 схеме исследования приведен втаблице 46.90Таблица 46Количество бактерий группы кишечных палочек и E.coli, обнаруженныхв 1 см3 смыва с продукта согласно ГОСТ 7702.2-93№ пробыКол-во БГКП в 1 см3 смыва с продукта3х1041,6х1042,9х1041,6х1042,2х1041,6х1043,8х1041,2х1042,2х1041,4х1041,1х1040,6х1040,4х1041,6х1041,0х1041,2х1040,8х1040,2х1041,2х1041,4х1041.2.3.4.5.6.7.8.9.10.11.12.13.14.15.16.17.18.19.20.Кол-во E.coli в 1 см3смыва продукта0,2х1040,06х1040,1х1040,06х104Результаты исследования образцов мяса птицы согласно методу,описанному ГОСТ Р 52816-2007 «Продукты пищевые.
Методы выявления иопределения количества бактерий группы кишечных палочек (колиформныхбактерий)» (схема 2).Испытанию подвергли образцы мяса птицы, которые исследовали попервой схеме. Использовали глубинный и поверхностный методы посеваразведений смывов сделанных с 20 образцов исследуемой продукции.91Таблица 47Определениеглубиннымиколичестваколиформныхповерхностнымметодоммикроорганизмовпосевас(БГКП)использованиемагаризованной селективно-диагностической среды Эндо№ пробы1.2.3.4.5.6.7.8.9.10.11.12.13.14.15.16.17.18.19.20.Количество колиформ в 1 см3 Количество колиформ в 1 см3 Кол-во E.coliсмыва с продукта, определенное смыва с продукта, определенное на среде Эндоглубинным методом посева.поверхностным методом посева2,4х1042х1043,4х1041х1042,2х1042,0х1043,0х1041,6х1042,4х1042,2х1041,1х1040,6х1040,9х1041,6х1041,0х1041,8х1041,0х1040,2х1041,3х1041,6х1042х1041,7х1042,8х1040,8х1042,3х1041,8х1042,4х1040,9х1042,1х1042,1х1041,0х1040,5х1040,5х1041,4х1041,0х1041,2х1040,9х1040,1х1041,2х1041,4х1040,04х1040,03х1040,1х1040,09х1040,05х104Результаты исследования образцов мяса птицы согласно методу,описанному ГОСТ Р 50454-92 (ИСО 3811-79)«Мясо и мясопродукты.Обнаружение и учет предполагаемых колиформных бактерий и E.coli(арбитражный метод)», схема 3 (ГОСТ 50454-92).Испытанию подвергли образцы мяса птицы, которые исследовали подвум схемам, описанным выше.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
