Диссертация (1150270), страница 10
Текст из файла (страница 10)
Затем задавали мощность генератора на 100% (200 Вт), времяобработки на 30 минут, и включали генератор.ПХО адгезионного покрытия в плазме ГМДСНа регуляторе игольчатого насоса устанавливали объемную скорость потокааргона на 5 мл/мин, настраивали подачу ГМДС так, чтобы частота впрыскасоставила 1 раз/5 с и продували камеру в течение 5 минут. Далее задавализначение мощности генератора на 20% (40 Вт), время обработки на 20 минут ивключали генератор. Через 10 мин, не выключая генератор, устанавливализначение мощности на 80% (160 Вт).~ 62 ~ПХО покрытия в плазме ацетиленаНа регуляторе игольчатого насоса устанавливали объемную скорость потокааргона на 5 мл/мин, объемную скорость ацетилена 3 мл/мин и продували камеру втечение 5 мин.
Затем устанавливали значение мощности генератора на W4 Вт,время обработки на t4 минут (W4 = 40 Вт и t4 = 10 мин. для образца A, 30 Вт и 10мин для образца В, 20 Вт и 10 мин для образца С, 10 Вт и 10 мин для образца D,40 Вт и 5 мин для образца E, 40 Вт и 2 мин для образца F), и включали генератор.Гидрофилизация покрытия с помощью кратковременной обработки в плазмекислородаПосле нанесения покрытия в плазме ацетилена, камеру продували токомаргона (25 мл/мин) в течение 5 мин для удаления остатков ацетилена. После этоговключали генератор кислорода, устанавливали значение 0.1 л/мин, устанавливалискорость подачи кислорода 10 мл/мин и продували камеру в течение 2 мин, затемустанавливали значение мощности генератора на 100% (200 Вт), время обработкина 0.1 мин и включали генератор.ПослезавершениявсехпроцессоввключаливентиляциюОбработанные пластины помещали в чашки Петри с помощью пинцета.Общая схема плазмохимического синтеза представлена в табл.
2.камеры.~ 63 ~Таблица 2. Условия плазмохимического синтеза двухслойных покрытий на поверхностиалюминияP0, №ПаВеществоРасход, мл/мин Давление в камере.ВремяМощностьПаобработки, t, генератора, %минот 200 ВтВыкл.Вкл.118Ar518195100216O210, 0.2л/мин181935100311ГМДСВпрыскивание 1 р/5 с16161. 101. 202. 102. 80Ar5Ацетилен4417А174 мл/мин17501020B1850101517C1844101017D183310517E183652017F182122017170.110016Ar5O25, 0.1л/минII.3.3.
Исследование инертности покрытий в условиях ПЦР методомспектроскопии электрохимического импедансаОборудование и реактивыПотенциостат–гальваностат Metrohm Autolab (Eco Сhemie, Нидерланды),раствор 0.1М трис-(гидроксиметил)аминометана, разбавленный 1М раствором~ 64 ~HCl (5.5 мл) до pH 8.3; хлорсеребряный электрод сравнения; платиновыйвспомогательный электрод.Проведение измерений:Столбжидкости(раствора0.1Мтрис-(гидроксиметил) аминометана,доведенного 1М HCl до pH 8.3) фиксируют на пластине в области ячеек (рис 26).После этого подключают хлорсеребряный электрод сравнения и вспомогательныйплатиновый электрод к потенциостату–гальваностату, а рабочий электрод калюминиевой пластине так, чтобы его контакт с жидкостью отсутствовал.Устанавливают с помощью программного обеспечения прибора диапазон частот –0–100 кГц и потенциала E = –1.1 В и проводят измерения.Рис. 26. Схема проведения спектроскопии электрохимического импеданса на микрочипе.II.3.4. Измерение угла смачивания поверхности микрочипов водой методомрастекающейся каплиКраевойуголсмачиванияθилиcosθявляетсяхарактеристикойгидрофильности (гидрофобности) поверхности и определяется как угол междукасательной АВ, проведенной к поверхности смачивающей жидкости, и~ 65 ~смачиваемой поверхностью твердого тела АА, при этом всегда отсчитывается откасательной в сторону жидкой фазы (рис.
27).Рис. 27. Схема измерения краевого угла смачивания поверхности жидкостью [52].С помощью дозатора на поверхность микрочипа наносили каплю воды ификсировали ее поведение с помощью фотокамеры.II.3.5. Исследование морфологической структуры и оценка элементногосостава пленок методами сканирующей электронной микроскопии ирентгеновского энергодисперсионного микроанализаОборудование:сканирующийэлектронныймикроскопZeissMerlin(Германия) с полевым эмиссионным катодом, колонной электронной оптикиGEMINI-II и безмаслянной вакуумной системой, а также системой регистрациидифракции обратнорассеянных электронов (EBSD) (U = 10кВ, IИсследованиявыполненывМеждисциплинарномпучкаРесурсном= 500 пА).Центрепонаправлению «Нанотехнологии».Получить достаточно ровный поперечный срез алюминиевой пластины непредставлялось возможным из-за деформаций металла, возникающих прираспиливании пластины алмазным диском, поэтому для оценки структуры итолщиныпленокрассматривалисколмикрочипа,изготовленногоизмонокристаллического кремния с нанесенным слоем оксида кремния длямоделирования свойств поверхности, приближенных к свойствам алюминия~ 66 ~(наличие похожих функциональных групп и аморфность поверхности).
Дляполучения пленок на поверхности микрочипа-свидетеля, в рабочую камеру,помимо алюминиевых образцов, загружали дополнительные пластины кремния.Получены СЭМ-изображения нескольких участков среза, толщина пленокусреднена по результатам нескольких измерений. Элементный анализ провели в 4различных точках подложек алюминиевых микрочипов, после чего показателиусреднили.Для оценки толщины покрытия одновременно с получением пленок наалюминии получены аналогичные пленки на поверхности кремниевых пластиндля ОТПЦР-микрочипов, с помощью которых стало возможным получить ровныйскол профиля пластины, не повредив покрытие.II.3.6.
Исследование структуры пленок методом спектроскопиикомбинационного рассеяния (Raman)Оборудование и реактивы: экспресс-рамановский спектрометр SENTERRA(Bruker): спектральный диапазон регистрации спектров КР: 80–4500см–1,спектральное разрешение: 3 см–1, длина волны возбуждающего лазера: 532 нм(максимальная мощность 20 мВт).Ввидувысокогоотраженияалюминиевыхмикрочиповвданныхисследованиях также применяли кремниевый свидетель с нанесенным слоемоксида кремния. Спектры снимали при большом накоплении, так как толщинаполученных пленок небольшая.II.4.
Методы пробоподготовки биологического материалаДля пробоподготовки пассажей вирусов, которые представляли отобранныйкуриный альбумин из зараженного патологическим материалом эмбриона,~ 67 ~использовали два коммерческих набора и также подход, основанный наприменении магнитных частиц.II.4.1. Выделение РНК из биологического материала с помощьюкоммерческого комплекта реагентов "АмплиПрайм РИБО-преп"Реактивы: пассажи вируса инфекционного бронхита или болезни Ньюкасла,комплектреагентовдляэкстракцииРНКизклиническогоматериала«АмплиПрайм РИБО-преп» (ИнтерЛабСервис): раствор для лизиса, раствор дляпреципитации, раствор для отмывки 3, раствор для отмывки 4, РНК-буфер.Оборудование: ламинарный шкаф (ЗАО «Ламинарные системы», Россия),термостат для микропробирок от 25 до 100 °С (ДНК-технология), центрифуга длямикропробирок с функцией встряхивателя Vortex (Microspin-2400, BIOSAN),центрифуга для микропробирок до 16000 об/мин (Eppendorf), вакуумныйотсасыватель медицинский с колбой–ловушкой для удаления надосадочнойжидкости (Утес), дозаторы переменного объема (0.1–3.0; 0.5–10; 10–100 мкл) инаконечники к ним, микропробирки на 1.5 мл (эппендорфы), штативы длямикропробирок.Методика экстракции РНК из исследуемых образцовВ начале работы раствор для стадии разрушения клеток (лизиса) прогреваютпри температуре 65 °С до полного растворения кристаллов, образующихсявследствие хранения.
Далее 300 мкл раствора для лизиса и 100 мкл пробыпомещают в микропробирки на 1.5 мл. Содержимое пробирок тщательноперемешивают на вортексе, центрифугируют в течение 5 с на микроцентрифугедля удаления капель с внутренней поверхности крышки и прогревают 5 мин при65 °С в термостате. После лизиса в микропробирки добавляют 400 мкл растворадля преципитации и перемешивают на настольной центрифуге (вортекс). Далеецентрифугируют пробирки на ультрамикроцентрифуге в течение 5 мин при 13000об/мин. После этого надосадочную жидкость аккуратно отбирают, не задевая~ 68 ~осадок, используя вакуумный отсасыватель.
К осадку добавляют 500 мклраствора для отмывки 3, плотно закрывают крышки, осторожно промываютосадок, переворачивая пробирки три–пять раз, снова центрифугируют при 13000об./мин в течение 1–2 мин. Используя вакуумный отсасыватель осторожно, незахватываяосадок,отбираютнадосадочнуюжидкость.Послеотмывкимикропробирки помещают в термостат при температуре 65 °С на 5 мин дляпросушивания осадка (при этом крышка пробирки открыта). В просушенныйосадок добавляют 90 мкл РНК-буфера, перемешивают на вортексе и помещают втермостат при температуре 65 °С на 5 мин, периодически встряхивая на вортексе.В конце пробирки снова центрифугируют при 13000 об/мин в течение 1 мин намикроцентрифуге.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
