Диссертация (1141409), страница 10
Текст из файла (страница 10)
Экстракцию веществ полисахариднойприроды осуществляли еще дважды. Полученные таким образом извлеченияобъединяли и проводили центрифугирование на центрифуге лабораторной счастотой вращения 5000 оборотов/мин в течение 10-15 минут, после чегожидкость с осадка аккуратно декантировали в колбу мерную объемом 500 млсквозь марлевый пятислойный фильтр, предварительно промытый водойдистиллированной.25мл,полученноговышеизложеннымспособомизвлечения, заливали в центрифужную пробирку, приливали 75 мл спиртаэтилового 95% и помещали на водяную баню на 10 минут. Пробирку сизвлечением охлаждали и подвергали центрифугированию в течениеполучаса.
Жидкость над осадком отфильтровывали под вакуумом призначении остаточного давления 16 кПа сквозь стеклянный фильтр ПОР 16диаметром 40 мм. Полученный в результате проведенных операций осадокколичественно помещали на фильтр и промывали сначала 95% этиловымспиртом, затем ацетоном и, в конце, этилацетатом. Фильтр с промытым отбалластных веществ осадком просушивали последовательно на воздухе и всушильном шкафу при температуре 100-105 С, взвешивали и рассчитывалисодержание полисахаридов в сырье.Для выделения суммы водорастворимых пектинов 5,0 г (точная навеска)измельченных плодов или листьев яблони лесной помещали в мерную колбуемкостью500мл,заливалинагретойдотемпературы40-50С°дистиллированной водой и выдерживали в данном температурном интервалев течение 30 минут на водяной бане, после чего осуществляли фильтрациючерез слой сложенной вчетверо марли.
Остаток на фильтре вновь заливалигорячейводой,осуществлялифильтрацию,послечегообъединялиполученные фильтраты. Данные фильтраты, согласно литературным данным,обогащены водорастворимыми пектинами. К полученному извлечению,содержащему водорастворимые пектины, приливали равный объем 0,4%раствора натрия гидроксида и выдерживали 12 часов при комнатной64температуре. Затем извлечение подкисляли 1% раствором уксусной кислоты,после чего приливали 50 мл 10% раствора кальция хлорида, добавлениекоторого вызывает осаждение водорастворимых пектинов. Полученныйтаким образом осадок фильтровали через предварительно взвешенныйфильтр, промывали водой дистиллированной до отрицательной реакции нахлорид-ионысрастворомотфильтровывалиисеребранитрата.гравиметрическиПолученныйопределялиосадоксодержаниеводорастворимых пектинов в исследуемом сырье.Остатокпослевыделенияводорастворимойфракциипектиновколичественно переносили в коническую колбу емкостью 500 мл, приливали150 мл 1М раствора хлористоводородной кислоты, после чего выдерживалина кипящей водяной бане в чечение 30 минут.
Содержимое колбы охлаждалии осуществляли фильтрацию через бумажный фильтр, полученный остатокдробно промывали водой, объединяя полученные смывы в ту же колбу.Фильтр с остатком помещали в экстракционную колбу, в которуюпредварительно внесли 40 мл 1% раствора аммония нитрата, вновь помещалина кипящую водяную баню, после чего фильтровали в ту же колбу. Вобъединенномизвлеченииколичественнооценивалисодержаниенерастворимых в воде пектиновых веществ, после соответствующейпробоподготовки.2.2.8. Определение товароведческих показателей исследуемого сырьяОпределениетовароведческих показателей сырья осуществляли,руководствуясь требованиями ГФ ХI, ХIII, XIV: ОФС 1.5.3.0007.15«Определениевлажностилекарственныхрастительныхнерастворимаяв«Определениесодержаниялекарственногопрепаратов»;хлористоводороднойрастительногоОФС1.5.3.0005.15кислоте»;экстрактивныхсырьявеществОФСви«Зола,1.5.3.0006.15лекарственномрастительном сырье и лекарственных растительных препаратах»;ОФС1.5.3.0004.15 «Определение подлинности, измельченности и содержания65примесейвлекарственномрастительномсырьеилекарственныхрастительных препаратах».
Отбор проб исследуемого сырья для проведениятовароведческого анализа осуществляли в соответствии с рекомендациямиОФС 1.1.0005.15 «Отбор проб лекарственного растительного сырья илекарственных растительных препаратов».2.2.9. Определение антимикробной активности исследуемого сырьяОпределение антимикробной активности извлечений из листьев иплодов яблони лесной осуществляли, руководствуясь методическимиуказаниями методом диффузии в агар на плотной питательной среде.Вработе использовались штаммы тест-микроорганизмов обычно применяемыеприизученииантимикробногодействияЛРС(справочникпомикробиологическим и вирусологическим методам исследования подред.Биргера М.О.
– М.: Медицина 1982, С 172-177).2.3. Валидация методов, обработка полученных результатовВалидацию методов определения групп БАВ проводили согласно ГФXIII изд., в. 1, с.222. «Валидация аналитических методик» (ОФС.1.1.0012.15).Статистическуюобработкурезультатовисследованийпроводиливсоответствии с требованиями ГФ XIII изд., в.
1, с.235. «Статистическаяобработка результатов химического эксперимента» (ОФС.1.1.0013.15) [51],для обработки данных использовался пакет ПО Microsoft Office Excel 2010.Метрологические характеристики методик анализа представлены далее.Метрологические характеристики методики определения БАВ в двух видахяблони (n =5, Px = 0,95, t(p,f)=2,776)n – число повторных испытаний;Х – среднее значение из числа повторностей, Х = – доверительная вероятность;t (P, f) – критерий Стьюдента; 2 – дисперсия;∑ × ;66 – стандартное отклонение; = √2∑ × ( − )−1; – стандартное отклонение среднего результата, =∆ – доверительный интервал, ∆ = (,)×√ – относительная ошибка определения, =√;;∆× 100%2.4.
Разработка методического подхода к анализу плодов, листьев яблонилесной на основе системного анализа нормативной документации инаучной литературыОбобщая проработанные литературные данные и принципы созданиянормативнойдокументациинапищевое(ГОСТ)илекарственноерастительное сырье (ОФС), нами предложены подходы к исследованиюнового перспективного сырья – плоды и листья яблони лесной, содержащиесложный комплекс биологически активных веществ и обладающих широкимспектром фармакологической активности, представленные на рис. 667Рис.6. Схема проведения исследований листьев и плодов яблони лесной68ГЛАВА3.РЕЗУЛЬТАТЫАНАЛИЗАМОРФОЛОГИЧЕСКИХАНАТОМО-ДИАГНОСТИЧЕСКИХЛЕКАРСТВЕННОГОИПРИЗНАКОВРАСТИТЕЛЬНОГОСЫРЬЯЛИСТЬЕВ,ПЛОДОВ ЯБЛОНИ ЛЕСНОЙ И ЯБЛОНИ ДОМАШНЕЙУчитывая отсутствие нормативной документации, характеризующейкачество плодов и листьев яблони лесной нами проводилось изучениеморфолого-анатомических признаков сырья с учетом их вариабельности,обусловленной возможным влиянием метода консервации в соответствии стребованиямиОФС«Плоды»«Листья»иобщепринятойметодикисортоизучения плодовых, ягодных и орехоплоднгых культур (Мичуринск:ВНИИС им.И.М.Мичурина,1999)3.1.
Изучение внешних признаков сырья яблони лесной и домашнейСцельюопределениявнешнихпризнаковплодыилистьяисследовались в свежесобранном виде, высушенными и замороженными.Высушенныелистьяяблонилеснойпредварительноподвергалиразмягчению, опуская на несколько минут в теплую воду, после чегорасправляли на стеклянной пластинке и приступали к изучению внешнихпризнаков. Поскольку плоды яблони относятся к группе сочных плодов и впроцессе сушки склонны изменять форму, данное сырье, согласнотребованиям ГФ XIII ОФС.1.5.1.0007.15 Плоды, исследуют сначала в сухомвиде, а затем в после размачивания в теплой воде или нагревании в течении 5минут на кипящей водяной бане.
Анализ замороженных плодов и листьевпроводили после предварительно проведенного размораживания сырья вхолодильнике в температурном режиме 5-7ºС в течение 120 минут, послечего плоды и листья яблони лесной изучалось невооруженным глазом при69дневном освещении, с использованием лупы (10х) или стероомикроскопа.Результаты анализа представлены в таблица 4-8.Таблица 4. Морфометрические показатели свежих листьев яблониВид сырьяДлинаШиринаСредняялиста,листа,массасмсмсвежеголистаЯблоняАнтоновка обыкновенная6,2-7,44,3-5,00,64домашняя –Ренет семиренко6,6-7,84,4 – 5,10,68Malus domesticaПепин шафранный6,1-7,04,8-5,20,58Яблоня лесная - Malus sylvestris Mill5,5-6,44,2-4,80,57Borkh.Таблица 5.
Морфометрические показатели свежих плодов яблониВид сырьяДлина Ширина Средняя Индексплода,плода,массаформысмсмсвежегоплодаплода, гЯблоняАнтоновка обыкновенная6,57,9169-1780,82домашняя –Ренет семиренко6,86,7170-1961,02Malus domesticaПепин шафранный7.58,0146-1640,942.1-3.32,5-3,042-640,84-BorkhЯблоня лесная - Malus sylvestris Mill1,10Таблица 6.
Морфометрические показатели высушенных листьев яблониВид сырьяДлинаШиринаСредняялиста,листа,масса листасмсмЯблоняАнтоновка обыкновенная6,0-7,24,0-4,80,58домашняя –Ренет семиренко6,3-7,14,2 – 5,00,55Malus domesticaПепин шафранный5,8-7,04,1-5,00,48Borkh.70Яблоня лесная - Malus sylvestris Mill5,2-6,04,0-4,6.0,23Таблица 7. Сравнение внешних признаков листьев яблони лесной и домашнейПризнакЯблоня леснаяЯблоня домашняяЛистьяСтроение и размерыЛистья простые,Листья простые,черешковые, длина от 3,7черешковые, разнойдо 5,4 см, ширина от 2,0 довеличины в зависимсти от3,5сорта длиной до 12,шириной до 9 смФормаЭллиптическая, округлаяРазличной формы вили яйцевиднаязависимости от сорта, чащевсего яйцевидныеРасположениеОчередноеОчередноеВерхушка, основание иВерхушка с короткимРазличной формывлагалище листаостриемКрай листаКрай листа неравномерно-Край городчато-пильчатыймелкозубчатыйЖилкование листаЖилкованиеЖилкованиеперистонервное.перистонервноеСрединная жилка,вдавленная с верхнейповерхности листа, сильновыпуклая, беловатая свнутренней поверхности.ОпушениеМногочисленные мелкиеРазличная степень иволоски с нижнейхарактер распространенияповерхностиопушенности взависимости от сортаНаличие воскового налетаОтсутствуетОтсутствуетЦвет, запах, вкусЦвет листьев сверху темно-От светло- до темно-зеленый, снизу- серовато-зеленого в зависимости от71зеленый светлый.
Запахсортаслабый травянистый, Вкусгорьковато-вяжущий.Таблица 8. Сравнение внешних признаков плодов яблони лесной и домашнейПризнакЯблоня леснаяЯблоня домашняяПлодыТип плодаЯблоко (Pomum)ЯблокоТип околоплодникаСочныйСочныйНаличиеПрисутствует плодоножкаПрисутствуют плодоножкиплодоножкиразмером от 13,5 до 19,0 ммразличной длины, взависимости от сортаФорма иШаровидной или, реже,Форма плода различная, вособенностияйцевидной формызависимости от сорта (округлая,строенияцилиндрическая, яйцевидная,околоплодникаширококоническая,колокольчатая, плоскоокруглая,широкоцилиндрическая,округлоконическая, коническая,плоская)ХарактерПоверхность гладкая,Поверхность гладкая.поверхностиблестящаяблестящаяДлина: От 2,3 - до 3 смРазличные в соответствии споперечное сечение от 2,2 доклассификацией (очень мелкие,3,1мелкие, ниже среднего,околоплодникаРазмерысредние, выше среднего,крупные, очень крупные)Количество семян,4-10 семян заостренно-их форма, размеры,яйцевидной формы с гладкойхарактерблестящей поверхностьюповерхностибуроватого цветаЗапахСпецифический, яблочныйДо 10, в зависимости от сортаЯблочный, свежий72ЦветВкусСветло-зеленый, допускаюсяОт зеленого до ярко-красного впокраснениязависимости от сортаКислый, сильно вяжущийОт кисло-сладкого до сладкогов зависимости от сортаВ результате проведенных исследований для плодов и листьев яблонилеснойбылиустановленынаиболеесущественныепризнаки,характеризующие внешний вид сырья.
Установлено, что для плодов внешнийвид сырья, свежего, высушенного или замороженного отличается сильнее,чем для листьев, внешние признаки которых после предварительнойпробоподготовки приктически не отличаются. Для плодов следует отмечатьформу околоплодника, характер поверхности, размеры, цвет, вкус, запазх,отличающиеся в зависимости от способа консервации.Измельченное сырье представляет собой отдельные кусочки листьев,плодов разной формы, проходящих сквозь сито с диаметром отверстий 7 мм.Порошок листьев представляет собой кусочки листовых пластинок ичерешков различной формы, проходящие сквозь сито с отверстиямиразмером 2 мм. Порошок плодов представляет собой смесь частицоколоплодника и косточек плодов, проходящих сквозь сито с отверстиямиразмером 2 мм3.2. Изучение микроскопических признаков сырья яблони лесной идомашнейАнализнаучнойлитературыневыявилданныхпоанатомо-диагностической характеристике плодов листьев яблони лесной, которыемогли бы быть использованы при составлении раздела «Микроскопия».Имеются лишь общие сведения, характеризующие анатомическое строениеплодов отдельных сортов яблони домашней, а также исследованы анатомодиагностические признаки цельных плодов Malus pallasiana Juz.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
