Диссертация (1141345), страница 2
Текст из файла (страница 2)
На основании анализалитературныхгепариновданных(НМГ)определениерекомендуетсяактивностипроводитьнизкомолекулярныхкоагулометрическимилихромогенным методом (Harenberg J.,2011; Берковский с соавт, 2011). Следуетотметить,чтокоагулометрическиеметодикитребуютиспользованиеспециализированного оборудования (коагулометры), которые обычно непредставлены в аналитических лабораториях. В Фармакопее США (USP 38NF 33) и Европейской Фармакопее (Ph.Eur. 8.4) приведены общие подходы копределению антифакторной активности НМГ в препаратах, но не вбиологических жидкостях.
В публикациях по определению анти-Ха и антиIIа активности НМГ, в том числе эноксапарина натрия, не приведенывалидационные характеристики методик (Gosselin R.C., 2004: Al SaLlamiH.S., 2010), что не позволяет удостовериться в надежности их применениядля поставленных аналитических задач. Кроме того, при изучениипубликаций по определению анти-Ха и анти-IIа активности НМГ в плазмекрови было отмечено, что все они относились к плазме крови человека(пациенты либо добровольцы), но не плазме крови лабораторных животных,анализируемой на этапе разработки препарата. Согласно рекомендациямАгентства по лекарственным средствам и пищевым продуктам США (2014),Европейского Медицинского Агентства (2011), а также «Руководству поэкспертизе ЛС» (2013) для новых биологических матриц необходимоповторно устанавливать валидационные характеристики биоаналитическихметодик.
В работе Sanderink с соавт. (2002 г.) было отмечено, что определениеанти-IIа активности эноксапарина натрия в плазме крови затруднено в связи сего низкими уровнями, что определяет необходимость разработки болеечувствительных методик ее определения.Все вышесказанное определяет необходимость дальнейшей разработкитемы исследования: разработка методик анализа для стандартизации7лекарственных препаратов низкомолекулярных гепаринов – эноксапариновнатрия.Цель исследования. Целью данной работы является разработкаметодикианализадлястандартизациилекарственныхпрепаратовнизкомолекулярных гепаринов – эноксапаринов натрия.Задачи исследования.1. Изучить и обобщить материалы научных публикаций и методическихруководств по вопросам стандартизации и оценки взаимозаменяемостипрепаратов-биоаналогов, в частности препаратов эноксапарина натрия,научно обосновать выбор объектов диссертационного исследованиясреди стратегически значимых биоаналогичных лекарственных средств.2.
Разработать и валидировать методики определения анти-Ха и анти-IIаактивностей эноксапарина натрия в условиях in vitro (в готовыхлекарственных формах) и in vivo (в плазме крови кроликов).3. Провести апробацию разработанной методики определения анти-Ха ианти-IIа активностей эноксапарина натрия в условиях in vitro в готовыхлекарственных формах.4. Осуществить апробацию разработанной методики определения анти-Ха ианти-IIа активностей эноксапарина натрия в условиях in vivo в плазме кровилабораторных животных.5. На основании проведенных исследований сделать заключение овозможности применения разработанных методик определения анти-Ха ианти-IIа активностей при стандартизации препаратов эноксапаринанатрия.Научная новизна исследования.
В работе были разработаны методикиопределения анти-Ха и анти-IIа активностей эноксапарина натрия в условияхin vitro и in vivo спектрофотометрическим методом. Впервые показанавозможность применения разработанных методик как на планшетном, так икюветном спектрофотометре, а также для различных видов биоматериала(плазма крови человека и кроликов). Проведена валидация разработанных8методик согласно требованиям ОФС.1.1.0012.15 «Валидация аналитическихметодик», ГФ XIII изд; показано, что аналитическая область разработанныхметодик соответствует поставленным аналитическим задачам.
Проведеносравнительное исследование анти-IIа и анти-Xa активности препаратовбиоаналогов НМГ в условиях in vitro и in vivo, сделан вывод овзаимозаменяемости препаратов эноксапарина натрия: оригинального иразрабатываемого, основанный на результатах проведенного исследования.Теоретическая и практическая значимость исследования. В работепредставленыколичественногоподходыкразработкеопределениябиоаналитическихлекарственныхсредствметодикбиологическойприроды. Разработаны и валидированы методики определения анти-Ха ианти-IIа активности эноксапарина натрия в условиях in vitro и in vivo,пригодные для различных биологических с использованием физикохимических методов анализа (УФ-спектрофотометрия, планшетная УФспектрофотометрия).Методикибылиапробированынаобразцахлекарственных средств эноксапарина натрия и плазмы крови кроликов.Показано, что методики пригодны для решения поставленных задач, в томчисле стандартизации лекарственных средств эноксапарина натрия.Основные положения, выносимые на защиту.Методики определения анти-Ха и анти-IIа активностей эноксапаринанатрия в условиях in vitro в готовых лекарственных формах.Методики определения анти-Ха и анти-IIа активностей эноксапаринанатрия в условиях in vivo в плазме крови кроликов в модификациях дляпланшетного и кюветного УФ-спектрофотометра.Заключение о взаимозаменяемости и эквивалентности оригинального ибиоаналогичногоисследуемоголекарственногосредстваэноксапаринанатрия.Методология и методы исследования.
Методология исследованияпостроена на анализе и обобщении литературных данных, оценке степени9разработанности и актуальности темы, существующих подходов к изучениюфармакокинетики лекарственных средств. Методологическая основа работы привыборе методов анализа заключалась в изучении биологической природыпрепарата, его физико-химических свойств, особенностях определения вусловиях in vitro и in vivo, подборе оптимальных условий количественногоопределения активности НМГ, пробоподготовки и фармакокинетическихрасчетов. В процессе выполнения работы был использован метод планшетнойУФ-спектрофотометрии, кюветной УФ-спектрофотометрии.Достоверность научных положений и выводов.
Диссертационнаяработа выполнена на современном научно-методическом уровне. В нейиспользованы методики исследования, адекватные целям и задачам.Использованное в работе оборудование имело действующие свидетельства оповерке и зарегистрировано в Реестре средств измерений, что позволяетсчитать результаты исследования достоверными. Данные, полученныеавтором, достоверны, обработаны с применением методов современнойстатистики («Руководство по экспертизе лекарственных средств», том 1, том4). Научные положения, выводы и рекомендации, сформулированные вдиссертационной работе, обоснованы, достоверны и логично вытекают изполученныхавторомданных.Первичнаядокументациямногократнопроверена и полностью соответствует материалам, содержащимся в даннойработе (акт №124/Р от 01.12.14 выдан комиссией ГБОУ ВПО Первый МГМУим.
И.М. Сеченова Минздрава России).Апробациядиссертационнойрезультатовработыисследования.доложенынаОсновныеВсероссийскойрезультатыконференции"Татьянин день", Москва, 2012г.; научно-практической конференции смеждународным участием «Разработка и регистрация лекарственных средств:прикладные аспекты», Москва, 2013 г.; V научно-практической конференции«Актуальные проблемы оценки безопасности лекарственных средств»,Москва, 2014 г; VII Научно-практическая конференция «Актуальныепроблемы оценки безопасности лекарственных средств», Москва, 2016.10Апробация работы проведена на конференции ученых НИИ фармации ГБОУВПО Первый МГМУ им.
И.М Сеченова Минздрава России (12.02.16).Личный вклад автора. Автору принадлежит основная роль впроведенииэкспериментальныхисследований,анализеиобобщенииполученных результатов. Автором лично проведена разработка, валидацияметодики определения активности эноксапарина натрия (в оригинальном ивоспроизведенном ЛС), проведено сравнительное исследование препаратовэноксапарина натрия: оригинального и разрабатываемого в условиях in vitro иin vivo, а также статистическая обработка результатов анализа. Вклад автораявляется определяющим на всех этапах исследования: от постановки задач,их экспериментально-теоретической реализации до обсуждения результатов внаучных публикациях, докладах и внедрения в практику.ВнедрениерезультатовРазработанныеисследования.спектрофотометрические методики количественного определения анти-Ха ианти-IIа активности эноксапарина натрия были включены в международнуюбазу аналитических решений Agilent Technologies, а также в работулаборатории фармакокинетики и лекарственных форм ФГБУН НЦБМТФМБА России и лабораторию биофармацевтических исследований ООО«Центр Фармацевтической Аналитики».
Данные методики могут бытьиспользованы для оценки взаимозаменяемости препаратов-биоаналоговнизкомолекулярных гепариновпрепаратов.Результатынастадиисравнительногоразработкииисследованиярегистрациипрепаратов-биоаналогов входят в состав регистрационного досье отечественного ЛСэноксапарина натрия, разрабатываемого в рамках государственного проекта(акты внедрения ФГБУН НЦБМТ ФМБА от 19.01.16, ЦФА от 19.01.16,Agilent Application Note № 5991-2509RURU).Соответствиедиссертациипаспортунаучнойспециальности.Научные положения диссертации соответствуют специальности 14.04.02«Фармацевтическаяхимия,фармакогнозия».Результатыпроведенногоисследования соответствуют области исследования специальности, конкретно11пунктам 3 – «Разработка новых, совершенствование, унификация ивалидация существующих методов контроля качества лекарственных средствна этапах их разработки, производства и потребления» и 4 - «Разработкаметодов анализа лекарственных веществ и их метаболитов в биологическихобъектах для фармакокинетических исследований» паспорта специальности«Фармацевтическая химия, фармакогнозия».Связьзадачисследованияспроблемнымпланомфармацевтических наук.
Диссертационная работа выполнена в рамкахкомплексной темы НИИ Фармации Первого МГМУ имени И.М. Сеченова«Развитие научных и научно-методических основ, базовых и инновационныхподходов при разработке, внедрении и применении лекарственных средств».Номер государственной регистрации 01.2.012.61653.Объем и структура диссертации. Диссертационная работа изложенана 131 страницах компьютерного текста, состоит из введения, обзоралитературы (1 глава), описания материалов и методов (глава 2), методикиразработки и валидации определения активностей эноксапарина натрия вусловиях in vitro и in vivo (глава 3), результатов сравнительных исследованийпрепаратов-биоаналогов НМГ эноксапарина натрия в условиях in vitro и invivo(глава4 и глава5),общих выводов и спискалитературы.Библиографический список содержит 112 источников, из них 79 наиностранном языке.Публикации.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
