Диссертация (1141345), страница 12

Просмтор этого файла доступен только зарегистрированным пользователям. Но у нас супер быстрая регистрация: достаточно только электронной почты!

Текст из файла (страница 12)

Величины анти-IIa активности дляисследуемого и референтного препаратов составили 3038 МЕ/мл и 3015МЕ/мл, соответственно. Соотношение величин активности анти-Ха к анти-IIадля исследуемого и референтного препаратов составило 3,31 и 3,33,соответственно, что укладывается в пределы, обозначенные в USP.Полученные результаты позволяют сделать заключение о том, чтоисследуемый и рефентный препарат являются взаимозаменяемы на этапеколичественнойоценкианти-Хаианти-IIаактивностипрепаратовнизкомолекулярного гепарина эноксапарина натрия с использованиемготовых наборов реагентов «Ренапарин-тест» методом с хромогеннымисубстратами в условиях in vitro.Для полного заключения о взаимозаменяемости и определенияпрепаратов, как биоаналогов, необходимы результаты количественногоопределения препаратов в условиях in vivo, а также данные результатовклинических исследований.89ГЛАВА 5. АПРОБАЦИЯ МЕТОДИКИ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АНТИ-Ха иАНТИ-IIa АКТИВНОСТИ ЭНОКСОПАРИНА НАТРИЯ В УСЛОВИЯХIN VIVO.В данной главе, приведены данные результатов исследования поизучению доклинической сравнительной фармакокинетики препаратовбиоаналогов НМГ эноксапарина натрия и заключение о взаимозаменяемостиизучаемых препаратов на этапе сравнительного исследования в условиях invivo.5.1 Результаты биологического этапа исследованияВ ходе проведения эксперимента по исследованию фармакокинетикиобразцов препаратов «Эноксапарин натрия» и «Клексан®» животные всехэкспериментальных групп – «опыт 1» и «опыт 2» – не проявили никакогозаметного различия в показателях своего здоровья: поведении, внешнеговида, физиологических функций.Показатели массы тела и температуры тела подопытных кроликов такжене выявили значимого различия между группами (таблица 18, 19).Таким образом, исследуемые образцы препаратов «Эноксапарин натрия»и «Клексан®» при подкожном введении в дозе 500 МЕ/мл не обнаружиливидимого влияния на состояние подопытных животных (кроликов) по всемрегистрируемым показателям.Таблица 32.Изменение массы тела кроликов в процессе исследования№кроликаМасса тела, г09.12.201311.12.201313.12.201316.12.201319.12.201313250330033103350341023520360036803690373090336103610370037503800432803320335034203460530903100317032003240630203120318032503300730903170325033003360833003340346035003510Мmin-327033203387,53432,53476,25Mmax(3060,65÷ (3122,08÷ (3178,71÷ (3231,2÷ (3277,93479,35)3517,92)3596,29)3633,8)3674,6)÷Таблица 33.Температура тела кроликов в процессе исследования№кроликаТемпература тела кроликов, °С09.12.201311.12.201313.12.201316.12.201319.12.2013138,639,239,238,638,8238,838,339,138,239,4339,738,638,939,339,6438,438,238,439,038,9539,439,539,038,539,3639,539,438,639,539,5738,638,939,039,539,6839,238,739,238,838,7Мmin-39,0338,8538,9338,93 (38,44 39,23 (38,86Mmax(38,5439,51)÷ (38,3639,34)÷ (38,64÷÷ 39,41)÷ 39,59)39,21)915.2 Результаты аналитического этапаВыполнено 3 аналитических цикла:Цикл № 1.Состав:калибровочные пробы: уровень 0, уровень1, уровень 2;контрольные пробы: уровень 1, уровень 2;исследуемые пробы: 1-T-0, 1-T-0,5, 1-T-1, 1-T-2, 1-T-3,1-T-4, 1-T-6, 1-T-8, 1-T-10, 1-T-24; 1-R-0, 1-R-0,5, 1-R-1, 1-R-2, 1-R-3,1-R-4, 1-R-6, 1-R-8, 1-R-10, 1-R-24; 2-T-0, 2-T-0,5, 2-T-1, 2-T-2, 2-T-3,2-T-4, 2-T-6, 2-T-8, 2-T-10, 2-T-24; 2-R-0, 2-R-0,5, 2-R-1, 2-R-2, 2-R-3,2-R-4, 2-R-6, 2-R-8, 2-R-10, 2-R-24.Дата начала: 23.12.2013, дата завершения: 23.12.2013.Цикл № 2.Состав:калибровочные пробы: уровень 0, уровень 1, уровень 2;контрольные пробы: уровень 1, уровень 2;исследуемые пробы: 3-T-0, 3-T-0,5, 3-T-1, 3-T-2, 3-T-3,3-T-4, 3-T-6, 3-T-8, 3-T-10, 3-T-24; 3-R-0, 3-R-0,5, 3-R-1, 3-R-2, 3-R-3,3-R-4, 3-R-6, 3-R-8, 3-R-10, 3-R-24; 4-T-0, 4-T-0,5, 4-T-1, 4-T-2, 4-T-3,4-T-4, 4-T-6, 4-T-8, 4-T-10, 4-T-24; 4-R-0, 4-R-0,5, 4-R-1, 4-R-2, 4-R-3,4-R-4, 4-R-6, 4-R-8, 4-R-10, 4-R-24; 5-T-0, 5-T-0,5, 5-T-1, 5-T-2, 5-T-3,5-T-4, 5-T-6, 5-T-8, 5-T-10, 5-T-24; 5-R-0, 5-R-0,5, 5-R-1, 5-R-2, 5-R-3,5-R-4, 5-R-6, 5-R-8, 5-R-10, 5-R-24; 6-T-0, 6-T-0,5, 6-T-1, 6-T-2, 6-T-3,6-T-4, 6-T-6, 6-T-8, 6-T-10, 6-T-24; 6-R-0, 6-R-0,5, 6-R-1, 6-R-2, 6-R-3,6-R-4, 6-R-6, 6-R-8, 6-R-10, 6-R-24.Дата начала: 24.12.2013, дата завершения: 24.12.2013.Цикл № 3.Состав:92калибровочные пробы: уровень 0, уровень1, уровень 2;контрольные пробы: уровень 1, уровень 2;исследуемые пробы: 7-T-0, 7-T-0,5, 7-T-1, 7-T-2, 7-T-3,7-T-4, 7-T-6, 7-T-8, 7-T-10, 7-T-24; 7-R-0, 7-R-0,5, 7-R-1, 7-R-2, 7-R-3,7-R-4, 7-R-6, 7-R-8, 7-R-10, 7-R-24; 8-T-0, 8-T-0,5, 8-T-1, 8-T-2, 8-T-3,8-T-4, 8-T-6, 8-T-8, 8-T-10, 8-T-24; 8-R-0, 8-R-0,5, 8-R-1, 8-R-2, 8-R-3,8-R-4, 8-R-6, 8-R-8, 8-R-10, 8-R-24.Дата начала: 25.12.2013, дата завершения: 25.12.2013.Рисунок 4.

Калибровочный график зависимости оптической плотностиэноксапарина от его активности935.3 Фармакокинетический и статистический этап доклиническихфармакокинетическихисследованийпрепарата-биоаналогаэноксопарина натрия (анти-Ха)5.3.1 Анализ фармакокинетических параметровИндивидуальныепрофилиизменениязначенийактивностей(А)эноксапарина натрия в плазме крови во времени (t), заpегистpиpованныепосле введения препаратов Эноксапарин натрия (Т) и Клексан® (R),хаpактеpизовались максимальной концентрацией лекарственного вещества(Cmax, наибольшее из измеренных значений) и временем ее достижения (Tmax),площадью под кривой «концентрация – время» в пределах от нуля домомента отбора последней пробы крови (AUC0-t), рассчитанной методомтрапеций, общей AUC0-∞ и соотношением Cmax к AUC0-t.Дополнительно определяли следующие фармакокинетические параметрыKel– константа элиминации, T1/2 – период полувыведения, MRT – среднеевремя удерживания, AUC0-t / AUC0-..Статистический анализ результатов определения активностей эноксапаринанатрия в плазме крови и параметров фармакокинетики и биодоступностизаключался в расчете среднеарифметических (Mean) и среднегеометрических(GMean) значений, стандартного отклонения (SD), коэффициента вариации(CV, %), медианы (Median) и их интервальной оценки (Доверит, L-90%, U90%).Описательную статистику, расчет фармакокинетических параметров идисперсионныйанализпроводилиприпомощипакетаMSExcelсрасширением для проведения фармакокинетического анализа Boomer(разработано JoelI.Usansky, Ph.D., AtulDesai, M.S.

andDianeTang-Liu, Ph.D.;DepartmentofPharmacokineticsandDrugMetabolismAllergan, Irvine, CA 92606,США).Интервальныезначенияфармакокинетическихпараметроврассчитывали по формулам: L-90 = Mean - ΔX; U-90 = Mean + ΔX; где ΔX –94доверительныйинтервал.Коэффициентывариациирассчитывалипоформуле: CV = (SD * 100)/Mean.Для расчета основных фармакокинетических параметров в используемомпрограммном обеспечении были применены следующие расчетные формулы:гдеAUC0-t- площадь под кривой «концентрация – время» в пределах отнуля до момента отбора последней пробы крови (12 ч)Ci – значение концентрации эноксапарина натрия в момент времени tt – время отбора пробыn – общее количество временных точек отбора пробi – порядковый номер временной точки отбора проб.AUC0-= AUC0-t + Ct/kel ,гдеCt- концентрация в последней временной точке отбора пробT1/2 = ln2/kelИндивидуальные значения активностей (C) эноксапарина натрияв плазмекрови во времени (t), заpегистpиpованные после введения исследуемыхлекарственных средств, приведены в Таблицах 34-35.Индивидуальные и усредненные фармакокинетические параметрыисследуемых лекарственных средств приведены в Таблицах 34-35 и 36-37соответственно.95Параметры биоэквивалентности приведены в Таблице 40.5.3.2 Результаты исследованияХарактер фармакокинетических кривых,полученных послевведенияпрепаратов Эноксапарин натрия (T) и Клексан® (R), в целом сходен, причеминдивидуальная вариабельность значений активностей эноксапарина натрияв обоих случаях примерно одинакова.

Различия в уровнях активностиэноксапарина натрия после введения изученных пpепаpатов, не носятсистематического хаpактеpа.Интервальные значения основных фармакокинетических параметров (Cmax,AUC0-t,Cmax/AUC0-t)дляпрепаратаЭноксапариннатриясоставили,соответственно 0,36 – 0,45 МЕ/мл; 2,01 – 2,63 МЕ*ч/мл; 0,16 – 0,20 ч-1.Интервальные значения основных фармакокинетических параметров (Cmax,AUC0-t, Cmax/AUC0-t) для препарата Клексан® составили, соответственно 0,350,39 МЕ/мл; 2,05-2,68 МЕ*ч/мл; 0,14-0,19 ч-1.Коэффициенты вариации основных фармакокинетических параметров (Cmax,AUC0-t,Cmax/AUC0-t)дляпрепаратаЭноксапариннатриясоставили,соответственно 19,13 %, 22,79 % и 17,11 %.Коэффициенты вариации основных фармакокинетических параметров (Cmax,AUC0-t, Cmax/AUC0-t) для препарата Клексан® составили, соответственно10,01 %, 22,93 % и 23,88 %.Сопоставление значений AUC0-t с общим AUC0-∞(их отношение составлялозначительно больше 80 %) свидетельствовало о том, что длительностьнаблюдения являлась достаточной.Фармакокинетика лекарственных средств считается эквивалентной, еслиграницы оцененного доверительного интервала для AUC0-t находятся впределах 0,8 – 1,25.

Для показателей Cmax и Cmax/AUC0-t, характеризующихсябольшей вариабельностью, эти пределы составляют 0,75 – 1,33.96Интервальные значения отношений относительной степени всасыванияэноксапарина натрия (f’), максимальных значений активностей эноксапаринанатрия (f’’) и Cmax/AUC0-t (T/R) после введения исследуемого препарата ипрепарата сравнения незначительно отличались от единицы (f’ = 0,85 – 1,18;f’’ = 0,99– 1,22; Cmax/AUC0-t (T/R) = 0,99 – 1,31) и укладывались в норму.Коэффициенты внутрииндивидуальной вариабельности (CV, %) параметровбиоэквивалентности составили 28,07 %, 18,45 % и 23,92 %, соответственно.Таким образом, в соответствии с Методическими указаниями «Оценкабиоэквивалентности лекарственных средств», 2008 г., фармакокинетикаисследуемых препаратов эквивалентна.Таблица 34.

Индивидуальные значения активностей эноксапарина натрияпосле введения лекарственного средства Эноксапарин натрия, МЕ/мл№Время, чкролика00,5123468102410,000,440,300,240,250,140,120,110,100,0020,000,360,540,420,220,210,150,120,110,0030,000,220,270,310,220,170,140,110,000,0040,000,300,370,270,190,170,150,150,130,0050,000,110,130,320,240,200,210,110,000,0060,000,140,290,380,280,240,210,130,110,0070,000,340,440,300,320,290,150,120,000,0080,000,460,410,350,370,210,170,140,000,00Mean0,000,300,340,320,260,200,160,120,060,00GMean0,000,270,320,320,260,200,160,12------SD0,000,130,130,060,060,050,030,020,060,00CV0,0043,8036,5118,0122,6222,8519,9412,73107,01---Median0,000,320,330,320,240,210,150,120,050,00Доверит0,000,080,070,030,030,030,020,010,04---L-90 %0,000,220,270,290,230,180,140,110,02---U - 90 %0,000,370,420,360,300,230,180,130,09---0,00-менее предела количественного определения97«---» - расчет величины не может быть произведенТаблица 35.

Характеристики

Список файлов диссертации