Диссертация (1140633), страница 7
Текст из файла (страница 7)
Вотделение поступали дети, родившиеся в ФГБУ « НЦ АГиП им. Кулакова»Минздрава России (далее – НЦ АГиП) у матерей, прошедших перинатальныйконсилиум в составе хирурга и анестезиолога–реаниматолога ОХРИТН,специалистаультразвуковойдиагностики,генетикаипредставителяадминистрации НЦ АГиП. Все этапы обследования, наблюдения, лечения ивыхаживания поступивших новорожденных детей проходили в условияхОХРИТН вплоть до выписки ребенка домой или перевода его в профильныйстационар. Дети были оперированы по поводу различных пороков развития:врожденнаядиафрагмальнаякишечника,атрезиягрыжа,пищевода,гастрошизис,тератомаомфалоцеле,атрезиякрестцово–копчиковойобласти,лимфангиома шеи и другой патологии (Таблица 2.1).Таблица 2.1 Распределение новорожденных детей по нозологическим группампороков развитияГруппа 1 (n=77)Нозологические группыГруппа 2 (n=33)Абс.Доля, %Абс.Доля, %Пороки развития органовпищеварения19251134Врожденнаядиафрагмальная грыжа202626Врожденные аномалиикожно–мышечнойсистемы2330927Объемные образования79824Другие аномалииразвития8103938Новорожденным детям, вошедшим на основании критериев включения вгруппу исследования (n=77), в первые две недели жизни в ОХРИТН проводилисьхирургические вмешательства по поводу различных пороков развития.
В группуПР органов пищеварения вошли следующие нозологические формы: атрезиякишечника (10), атрезия, киста или удвоение пищевода (6), дупликационная кистажелудка (1), удвоение кишечника (3). Отдельно выделен ПР «врожденнаядиафрагмальная грыжа» (20). В группу объемных образований вошли такие ПРкак тератома крестцово–копчиковой области (4) и лимфангиома шеи (3).Большую группу ПР из блока «врожденные аномалии и деформации костно–мышечной системы» составили гасторшизис и омфалоцеле (21+2).
Другиенозологические формы аномалий развития были представлены пороками развитиялегких (2) и мочевыводящей системы (5).Распределение новорожденных детей по нозологическим группам в процентахот общего числа пациентов в Гр. 1 представлено на Рисунке 2.2.пороки развития органовпищеварения10%9%25%врожденная диафрагмальнаягрыжаврожденные аномалии кожномышечной системы30%26%объемные образования(тератома, лимфангиома)другие аномалии развитияРис. 2.2 Распределение новорожденных детей в основной группе (Гр.
1) понозологическим формам пороков развития39Группу сравнения(Гр.2)составили33новорожденныхребенка,оперированных по поводу аналогичных пороков развития: ПР органовпищеварения (атрезия кишечника – 8, атрезия пищевода – 3), врожденнаядиафрагмальная грыжа (2), объемные образования (тератома – 7, лимфангиома –1), врожденные аномалии костно–мышечной системы (гасторшизис – 8,омфалоцеле – 1), другие аномалии развития (аденоматоз и секвестрация легких –3).
В эту группу вошли дети, которым аутологичная кровь, по различнымпричинам, не заготавливалась, либо на этапе предтрансфузионной подготовки,образцы аутологичной эритроцитной массы были признаны непригодными дляпереливания. Распределение новорожденных детей по нозологиям в процентах отобщего числа пациентов в Гр. 2 представлено на Рисунке 2.3.пороки развития органовпищеварения9%24%врожденная диафрагмальнаягрыжа34%врожденные аномалии кожномышечной системы27%6%объемные образования(тератома, лимфангиома)другие аномалии развитияРис.
2.3 Распределение новорожденных детей в группе сравнения (Гр. 2) понозологическим формам пороков развития402.2 Методы исследованияОбследование новорожденных детей включало в себя стандартные видыисследования, применяемые в условиях неонатального отделения реанимации иинтенсивной терапии с учетом хирургического профиля пациентов, лабораторныеметоды, а также специальные методы исследования и статистический анализполученных в ходе работы данных данных.2.2.1 Клиническое наблюдение и лабораторные методы обследованияноворожденных детейВ послеоперационном периоде в процессе наблюдения и лечения, а такжепосле гемотрансфузий в ОХРИТН пациентам обеих групп проводилосьрегулярное динамическое клинико-лабораторное обследование в установленныепротоколом отделения сроки. Круглосуточный мониторинг витальных функцийосуществлялся с помощью прикроватных мониторов слежения Dräger серииInfinity Delta и Infinity Vista (Dräger Medical AG&Co., Германия).Новорожденным детям обеих групп в процессе наблюдения и лечения вОХРИТН в соответствии с планом обязательных стандартных исследованийпроводились клинические анализы крови, по результатам которых оцениваласьдинамика показателей гематокрита и гемоглобина до и после трансфузий отмытойаутоэритроцитной массы из ПК или отмытой донорской эритроцитной массы.Клинический анализ крови, выполнялся на гемоанализаторе Sysmex XS–800i(Sysmex, Япония).Следует подчеркнуть, что с целью кровесбережения и минимизацииятрогенных потерь крови у новорожденных детей дополнительный забор кровидля целей нашего клинического исследования до и после трансфузий невыполнялся.
Анализ показателей гематокрита и гемоглобина нами проводился порезультатам плановых клинических анализов крови, которые укладывались вследующие временные интервалы:41 за 24 часа перед трансфузией (1-я точка исследования) на 1 сутки после трансфузии (2-я точка исследования) в конце 1 недели (6–7 сутки) после трансфузии (3-я точка исследования) в конце 2 недели (13–14 сутки) после трансфузии (4-я точка исследования) в конце 3 недели (20–21 сутки) после трансфузии (5-я точка исследования) в конце 4 недели (27–28 сутки) после трансфузии (6-я точка исследования)2.2.2 Специальные методы исследованияДля решения задачи 1:1)проводилсясравнительныйанализгемограммыотмытойаутоэритроцитной массы из пуповинной крови с гемограммами цельнойаутопуповинной крови и отмытой донорской эритроцитной массы,2)проводился анализ изменений клеточного состава, структурно–функционального состояния и жизнеспособности клеток нефракционированнойпуповинной крови в результате длительного хранения в условиях, стандартноприменяемых для хранения эритроцитной массы (на базе Банка пуповиннойкрови ООО «КриоЦентр», Москва)1) Методика исследования гемограммОбщий клинический анализ образцов цельной аутопуповинной кровивыполнялся перед процедурой отмывки, а отмытой аутоэритроцитной массы изпуповинной крови и отмытой донорской эритроцитной массы – после обработки инепосредственно перед выдачей для трансфузии.
Исследование проводилось нагемоанализаторах Sysmex XS–800i и XT–1000i, XT–4000i (Sysmex, Япония).2) Методика исследования изменений клеточного состава, структурно–функционального состояния и жизнеспособности клеток нефракционированнойпуповинной крови в результате длительного хранения в условиях, стандартноприменяемых для хранения эритроцитной массы.Заготовку ПК проводили до рождения последа (in utero) с письменногоинформированного согласия у здоровых обследованных рожениц в акушерских42отделениях НЦ АГиП. Кровь собирали в полимерные контейнеры «Гемасин» дляконсервирования донорской крови и ее компонентов с антикоагулянтом«Глюгицир» (ОАО «Синтез», Россия).
После перемешивания образцы помещали вмедицинский холодильник и хранили при температуре +4 ̊С. Непосредственноперед охлаждением, а также через 24, 48 и 72 часа в асептических условияхотбирали аликвоты клеточных суспензий (2 мл) для анализа. Аналогичные пробыотбирали по прошествии 1, 2, 3 и 4 недель хранения.Подсчетколичестваформенныхэлементовпроизводилинаполуавтоматическом гематологическом анализаторе «МЕК 5216» (Nihon Kohden,Япония). Соотношение различных популяций клеток лейкоцитарного рядаанализировали с помощью проточной цитофлуориметрии на приборе «FACSCalibur» (Becton Dickinson, США) с использованием программного обеспеченияCellQuest Pro.
В работе использовали флуоресцеин-изотиоцианат (ФИТЦ) ификоэритрин-конъюгированные моноклональные антитела к CD45 и CD34(«BeckmanCoulter-Immunotech»,Великобритания)вконцентрации,рекомендованной изготовителем. Для определения жизнеспособности клетокиспользовали тест с витальным красителем 7-амино-актиномицином Д (7-AAD,BD Biosciences, США). Для последующего подсчета абсолютного количестваклеток анализ проводили в пробирках BD TruCOUNT (BD Biosciences, США),содержащих нормированное количество микросфер (~50 000), в соответствии срекомендациямифирмы–изготовителя.Посколькуприборсчитываетимикросферы, и клетки, для коррекции результатов автоматического анализаабсолютное количество клеток в образце подсчитывалось вручную по формулам(1–3):Абсолютное количество клеток в пробе ==число подсчитанных клеток × число микросфер в пробе (50000)число подсчитанных микросфер(1)43Абсолютное количество клеток в 1 мл крови ==количество клеток в пробе × 1000 мкл,мкл крови в пробе(2)Абсолютное количество живых клеток в 1 мл крови ==количество клеток в 1 мл крови × жизнеспособость(%)(3)100%В каждой пробе анализировали не менее 100 тысяч CD45+ клеток.Выявление колониеобразующих единиц (КОЕ).Общее и относительное содержание функциональных гранулоцитарных(КОЕ-Г), гранулоцитарно–макрофагальных (КОЕ-ГМ), макрофагальных (КОЕ-М),эритроидных (КОЕ-Э) и смешанных (КОЕ-ГЭММ) предшественников оценивалипо способности к формированию колоний в полужидкой среде MethоCultOptimum (STEMCELL Technologies inc., Канада).
Перед посадкой клетокэритроциты лизировали в течение 10 мин. раствором хлорида аммония, несодержащим фиксатора (Pharm Lyse, «BD Biosciences»). После отмывки отлизирующегорастворасуспензиюядросодержащихклетоквносиливполужидкую среду из расчета 4-5 × 105 клеток на чашку Петри диаметром 35 мм икультивировали в соответствии с инструкцией производителя. Число и составобразованных колоний оценивали с помощью фазово-контрастной микроскопиичерез 14 суток.Для решения задачи 2 проводился контроль стерильности и качествааутоэритроцитной массы из ПК и донорской эритроцитной массы:a)гемокультивирование аликвот крови, выборочно отобранных изобразцов аутоэритроцитной массы из ПК и донорской эритроцитной массы,заготовленной в ОГХК (1% от числа неиспользованных контейнеров с истекшимсроком годности).
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
