Диссертация (1140633), страница 10
Текст из файла (страница 10)
Также не было статистически значимого сниженияпоказателей гемоглобина и гематокрита. Оценка изменения средних значенийгемоглобина, гематокрита и эритроцитарных индексов в 1 мл пробы в процессехранения пуповинной крови в течение 1 месяца при температуре +4°С,подсчитанного при помощи автоматического счетчика клеток представлена вТаблице 3.7.Таблица 3.7 - Оценка изменения средних значений гемоглобина, гематокрита иэритроцитарных индексов в 1 мл пробы в процессе хранения пуповинной кровиСрок храненияСредние значения гемоглобина, гематокрита и эритроцитарных индексов впосле забора1 мл пуповинной крови, млн.пуповиннойкровиHGBHCTMCVMCHMCHCИсходно81,50 ± 18,0324,88 ± 5,53105,5 ± 3,9534,57 ± 0,76327,7 ± 4,92–е сутки100,66 ± 45,0630,68 ± 13,91104,0 ± 3,4134,23 ± 1,02328,5 ± 7,33–е сутки85,33 ± 22,5624,90 ± 6,57104,0 ± 3,4635,65 ± 1,21343,0 ± 2,34–е сутки83,33 ± 20,0824,88 ± 6,15105,7 ± 2,5635,47 ± 0,70335,2 ± 4,11 неделя83,17 ± 19,4824,55 ± 6,23106,0 ± 3,0636,07 ± 1,14336,0 ± 8,22 недели86,67 ± 28,1425,75 ± 8,57107,0 ± 2,5236,12 ± 0,63337,7 ± 6,23 недели92,17 ± 45,4727,23 ± 13,85104,7 ± 4,0335,75 ± 0,97341,3 ± 11,74 недели77,50 ± 15,6523,35 ± 5,83103,3 ± 6,0534,67 ± 0,85336,3 ± 19,4р*0,7160,6780,5170,8480,355Примечание: * р – уровень достоверности различия между исходным и конечным значением60Изменения в абсолютном и относительном содержании различныхпопуляций лейкоцитов (лимфоциты/моноциты/гранулоциты) на разных срокаххраненияоценивалиспомощьюпроточнойцитофлуориметриипослеокрашивания антителами к CD45.
Соответствующие популяции лейкоцитовотчетливо различимы на графиках в координатах светорассеяние/флуоресценция(Рисунок 3.4).Рис. 3.4 Репрезентативные гистограммы распределения ядросодержащихклеток ПК после окрашивания ФИТЦ–мечеными антителами кобщелейкоцитарному антигену CD45 (а) и витальным красителем 7–AAD (б),использованные для определения соотношения и жизнеспособности клеточныхпопуляцийПримечание: Область R1 соответствует 7–AAD–позитивным (нежизнеспособным)клеткам.61Анализ жизнеспособности отдельных клеточных популяций (Рис. 3.4, а) спомощью окрашивания витальным красителем 7-AAD (Рис. 3.4, б) подтвердилболее высокую выживаемость клеток лимфоцитарно–моноцитарного ряда и ГСК(Таблица 3.8).Таблица 3.8 - Изменение жизнеспособности клеток лейкоцитарного ряда придлительном хранении пуповинной кровиДоля жизнеспособных клетокСрокпо результатам окрашивания 7–AAD, %храненияОбщееЛимфоцитыМоноцитыГранулоцитыГСКИсходно99.16±0.4099.97±0.0399.32±0.5799.24±0.3897.98±1.311 сут.95.44±2.3999.88±0.0896.43±3.1394.84±2.8298.53±1.442 сут.96.92±2.0299.97±0.0398.67±1.2196.37±2.3899.56±0.233 сут.95.85±2.6099.84±0.1997.79±3.2794.79±3.2799.97±0.071 нед.92.25±4.5497.81±2.3492.93±6.5488.97±6.0696.68±3.172 нед.85.11±5.9293.44±4.9684.22±10.5869.72±16.3179.01±19.293 нед.75.00±6.0086.25±7.1674.39±10.0852.97±18.6761.76±18.414 нед.72.65±10.0185.25±6.2874.40±14.4248.77±21.5950.01±20.24В течение первой недели хранения показатели жизнеспособности общихлейкоцитов, лимфоцитов, моноцитов и ГСК практически не менялись иколебались в пределах 92–97%.
Начиная со второй недели хранения,жизнеспособность всех популяций лейкоцитов снижалась более существенно и кконцу 4-й недели составила 85.25±6.28, 74.40±14.42, 48.77±21.59 и 50.01±20.24процентов для лимфоцитов, моноцитов, гранулоцитов и ГСК, соответственно (заисключением лимфоцитов, различия были достоверны). Примечательно, что,несмотря на относительно высокую жизнеспособность и численную сохранность62клетоклимфоцитарногорядавтечениевсегосроканаблюдения,жизнеспособность ГСК все же падала, начиная со второй недели хранения(Таблица 3.9).Подсчет абсолютного содержания жизнеспособных (7-AAD-негативных)клеток, составляющих отдельные популяции лейкоцитов, с использованиемсистемы «TrueCount» показал снижение этого показателя уже на 3-и суткихранения (Таблица 3.9).
Так, к 4–й неделе хранения содержание живыхлимфоцитов и моноцитов сокращалось в 2–2,5 раза, ГСК – пятикратно, агранулоцитов – более чем в 10 раз (в пересчете на 1 мл крови).Таблица 3.9 - Влияние длительного хранения на абсолютное количествожизнеспособных клеток лейкоцитарного ряда в 1 мл пуповинной кровиЧисло жизнеспособных клеток, млн./млСрокхраненияОбщееЛимфоцитыМоноциты ГранулоцитыГСКИсходно7.21±2.431.85±0.670.78±0.334.05±1.550.014±0.0051 сут.7.35±3.391.98±0.670.71±0.394.19±2.170.015±0.0072 сут.5.34±2.041.52±0.240.51±0.242.94±1.240.012±0.0053 сут.4.89±1.391.54±0.480.45±0.192.52±0.700.013±0.0071 нед.3.84±0.911.52±0.510.51±0.211.46±0.540.013±0.0062 нед.2.43±0.731.29±0.360.32±0.090.65±0.490.008±0.0043 нед.1.90±0.561.05±0.340.25±0.080.39±0.240.004±0.0024 нед.1.94±0.521.14±0.240.31±0.160.34±0.210.003±0.0015Для оценки функционального потенциала ГСК и его изменения в процессехранения был использован тест на способность формировать колонии разныхтипов в полужидкой среде в присутствии экзогенных индукционных факторов(Рисунок 3.5).63Рис.
3.5 Влияние времени хранения на способность клеток ПК формироватьколонии различных типов в полужидкой среде. Приведены результаты одного изсерии экспериментов. Данные представлены как изменение числа колоний впроцентах от исходного значенияПримечание: КОЕ-Г – гранулоцитарные колонии, КОЕ-ГМ – гранулоцитарно–макрофагальные колонии, КОЕ-М – макрофагальные колонии, КОЕ-Э –эритроидные колонии, КОЕ-ГЭММ – смешанные колонии.Проведенные эксперименты показали, что на 2–3 сутки хранения ПК числоКОЕ-Г и КОЕ-Э остается практически неизменным (Рисунок 3.5).
Число КОЕ-М,КОЕ-ГМ и КОЕ-ГЭММ сокращается в среднем вдвое уже на вторые суткихранения и еще вдвое – на третьи. На 4-е сутки хранения ПК в 2–3 раза посравнению с 3-ми сутками снижается число всех типов колоний (в том числе иобщее число КОЕ). Первым (в некоторых образцах уже на вторые сутки) начинаетсокращаться число КОЕ-ГЭММ, затем на 3–4 сутки число КОЕ-М и КОЕ-ГМ.Через неделю хранения общее число КОЕ уменьшается более чем в 10 раз посравнению с первоначальным уровнем; определяются только КОЕ-Г (около 10 %от общего числа КОЕ) и КОЕ-Э (около 90 % от общего числа КОЕ).
Через двенедели хранения способность клеток формировать колонии утрачиваетсяполностью.643.5Результатыконтролястерильностиаутологичнойидонорскойэритроцитной массы и качества клеток аутоэритроцитной массы из ПКперед трансфузиейЗа время исследования проведено гемокультивирование 46 аликвот крови,отобранных из образцов аутоэритроцитной массы из ПК и донорскойэритроцитной массы, заготовленных в ОГХК. Результаты бактериологическиханализов были отрицательны во всех случаях.Также в ходе работы производилось определение гемолиза в образцахотмытой аутоэритроцитной массы из ПК перед трансфузией путем анализа насвободный гемоглобин с последующим расчетом степени гемолиза. В результатеработы выявлено, что при среднем уровне свободного гемоглобина 19,2 ± 5,8 г/л вобразце определялся гемолиз >1%, в то время как при уровне свободногогемоглобина 4,4 ± 2,3 г/л степень гемолиза была ниже 1%.
Всего исследовано 115образцов аутологичной эритроцитной массы из ПК, из них гемолиз был выявлен в24 образцах, которые были утилизированы.3.6 Сравнительный анализ эффективности трансфузии аутоэритроцитноймассы из ПК и донорской эритроцитной массы новорожденным детям впослеоперационном периодеВ послеоперационном периоде показания к трансфузии эритроцитногокомпонента крови выявлялись в зависимости от клинического состояния изначенийгемоглобинаигематокритавклиническоманализекровиноворожденных детей.В Гр. 1 гемотрансфузии выполнялись в среднем на 11,8 ± 6,4 сутки жизни впериод от неполных первых суток до 21 суток жизни, что было связано сразличными сроками проведения операций, зависящими от длительностиобследования при различных пороках и соответствующей предоперационнойподготовки новорожденных детей, а также от лимита хранения аутологичной ПК(21 день).
В Гр. 2 гемотрансфузии выполнялись в период от неполных первых65суток до 28 суток жизни, что в среднем составило 11,3 ± 8,9 суток. Статистическизначимого различия в количестве суток жизни на момент трансфузии в группах небыло(р=0,807,р>0,05).Распределениезначенийсреднеговозрастановорожденных детей на момент трансфузии по подгруппам представлено вТаблице 3.10.Таблица 3.10 - Возраст доношенных и недоношенных новорожденных детей намомент трансфузии в группахВозраст на момент трансфузии, суткирГруппа 1 (n=77)Группа 2 (n=33)А11,8 ± 6,413,5 ± 8,70,48Б11,5 ± 6,69,1 ± 8,80,34ПодгруппыЭффективность аутотрансфузий отмытой эритроцитной массы из ПК идонорской эритроцитной массы у новорожденных детей в послеоперационномпериодеоцениваласьподвумосновнымкритериям:лабораторномуиклиническому.1.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
