Диссертация (1140633), страница 6

Просмтор этого файла доступен только зарегистрированным пользователям. Но у нас супер быстрая регистрация: достаточно только электронной почты!

Текст из файла (страница 6)

Проведенное ChuaS. в 2010 году исследование, в котором была произведена трансплантациямультипотентных стволовых клеток крысам при смоделированной травмеспинногомозга,показало,чтотрансплантированныеклеткиулучшалиневрологическую функцию, возможно, продуцируя нейтрофические, ангиогенныеипротивовоспалительныецитокины,которыеуменьшаютвторичноеповреждение [67]. Также обращает на себя внимание то, что в проведенныхNeuhoff S. экспериментах in vitro, была продемонстрирована способностьмононуклеарныхклетокпуповиннойкровисекретироватьинтерлейкины,факторы роста и белки хемотаксиса [102].

Первые клинические испытанияаутологичных клеток пуповинной крови новорожденным с гипоксически–ишемической энцефалопатией были проведены в Сингапуре в сотрудничестве сУниверситетом Дьюка. Испытания проводились в течение двух лет. Детям с30гипоксически–ишемической энцефалопатией, нуждающимся в терапевтическойгипотермии, проводилась трансфузия аутологичной пуповинной крови.

Фракциюядросодержащих клеток получали из собранной пуповинной крови. Даннаяфракция не замораживалась и делилась на четыре образца по 5 мл каждый.Каждый образец вводили на 12, 24, 48, и 72–й часы жизни ребенка. Былопоказано,чтопослеобработкинекриоконсервированнойфракцииядросодержащих клеток пуповинной крови их жизнеспособность через 96 часовсоставляла 91,3%. В исследовании участвовали двое новорожденных сгипоксически–ишемической энцефалопатией II стадии (по Sarnat), судорогами и снеблагоприятным прогнозом дальнейшего развития.

Аутологичная пуповиннаякровь вводилась по схеме: 6 и 156 млн. клеток/кг. Побочных реакций, связанных странсфузией, выявлено не было. По данным проведеного МРТ исследования удетей на томограммах присутствовали начальные изменения в головном мозге,однако при повторном исследовании в возрасте 4–6 месяцев жизни ониотсутствовали. В возрасте одного года жизни в первом случае – ребенокразвивался нормально, во втором – у ребенка оставалась значительная задержкамоторного развития с некоторым когнитивным дефицитом. Для оценкиклиническойэффективноститакоголечениянеобходимыдальнейшиеисследования [93, 57].В 2014 году Cotten CM и др.

опубликовали результаты первой фазыисследования трансплантации аутологичных клеток пуповинной крови 23 детям сгипоксически–ишемической энцефалопатией и получавших курс терапевтическойгипотермия. Было установлено, что трансфузия некриоконсервированныхаутологичных клеток пуповинной крови, разделенных на 4 порции, каждая изкоторых содержит 1-5 х 107/кг клеток, хорошо переносится. Никакихзначительныхпобочныхреакций,кардио-респираторныхнарушенийиливозникновения инфекции в результате трансфузии клеток, отмечено не было.Такимобразом,данноеисследованиепродемонстрировало,чтолечениеаутологичными клетками пуповинной крови возможно и, вероятно, безопасно[68].31Количество недоношенных детей с высоким риском развития такогозаболевания, как бронхолегочная дисплазия растет, в связи с технологическими инаучными достижениями в неонатальной интенсивной терапии, увеличивающимишанс выживания этих детей.В настоящее время обращает на себя внимание отсутствие эффективныхмер по предотвращению или некоторому уменьшению последствий, связанных сразвитием у детей бронхолегочной дисплазии, которая остается главной причинойлетального исхода или длительного выхаживания недоношенных детей [119, 60,58, 87].

На сегодняшний день доклинические исследования применениямезенхимальных стволовых клеток на животных моделях с бронхолегочнойдисплазией, показали их терапевтическую эффективность [53, 79]. Механизмдействиямезенхимальныхстволовыхклеток,которыйприводиткихтерапевтической эффективности, остается неизвестным. Недавно сообщалось очастицах (экзосомы), которые осуществляют терапевтическую эффективностьмезенхимальных стволовых клеток на мышиной гипоксической модели легочнойгипертензии [92].Клинические испытания по использованию мезенхимальных стволовыхклеток в терапии различных заболеваний растут быстрыми темпами.Учеными из University of Alberta в сотрудничестве со специалистамиканадской биотехнологической компании Cell Therapy Technologies в 2009 годубыл разработан метод предотвращения повреждения легких кислородом ипредотвращенияразвитиябронхолегочнойдисплазии.Поспециальноразработанной методике в легкие крыс с целью профилактики бронхолегочнойдисплазии вводились культивированные мезенхимальные стволовые клетки.Трансплантированные клетки встраивались в ткань легочных альвеол иэкспрессировали сурфактант–ассоциированный белок С, что указывало на ихдифференцировку в альвеолярные пневмоциты II типа.

Клеточная терапияпредотвращала повреждение альвеол кислородом [54].32Такие факторы как относительно несложное выделение и производство, атакже отсутствие иммуногенности, делают мезенхимальные стволовые клеткиидеальным кандидатом для возможного лечения бронхолегочной дисплазии.Существует много потенциальных источников мезенхимальных стволовыхклеток, такие как костный мозг или жировая ткань, однако лучшим источникомявляется пуповинная кровь человека [91].

В пуповинной крови содержатсяразличныевидыстволовыхклеток,вихчислебольшоеколичествогемопоэтических и гораздо меньшее количество негемопоэтических, таких какмезенхимальные стволовые клетки, и мультилинейные клетки-предшественники.Потребуетсяпроведениеразличныхисследований,дляоценкиэффективности клеточной терапии мезенхимальными стволовыми клетками и/илистволовыми клетками пуповинной крови при таких значимых заболеванияхноворожденных и детей раннего возраста, как бронхолегочная дисплазия,гипоксически–ишемическая энцефалопатия и других патологиях. В настоящеевремя существует необходимость разработки новых терапевтических методик длятерапии пока неизлечимых заболеваний, которые представляют собой большоебремя для пациента, его семьи и общества в целом.Очевидно, что стволовые клетки могут стать прорывом в области лечениямногихтяжелыхзаболеванийноворожденныхдетей.Одновременноеисследование на доклинических моделях, трансляционные исследования, а такжепроведениехорошоспланированныхклиническихиспытаний,имеетпервостепенное значение для лучшего понимания биологии стволовых клеток иих действия на развивающийся организм с целью достижения новых парадигм вклинической практике.33Глава 2 МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯВ соответствии с поставленной целью и задачами в ФГБУ «Научный центракушерства, гинекологии и перинатологии имени академика В.И.

Кулакова»Министерства здравоохранения РФ (директор академик РАН, профессор СухихГ.Т.) на базе отделения хирургии реанимации и интенсивной терапииноворожденных (заведующая отделением к.м.н. Подуровская Ю.Л.) былопроведеноклиническоеоткрытоесравнительноеисследованиеконтролируемоеэффективностинерандомизированноепослеоперационнойтрансфузииаутоэритроцитов пуповинной крови новорожденным с пороками развития,требующим хирургической коррекции в ранние сроки после рождения.В ходе исследования проведен сравнительный анализ клеточного составаотмытой аутоэритроцитной массы из пуповинной крови, цельной пуповиннойкрови и отмытой донорской эритроцитной массы, а также выполнен анализструктурно–функционального состояния и жизнеспособности клеток ПК придлительном хранении в условиях, стандартно применяемых для храненияэритроцитной массы.Проведенсравнительныйанализклиническойэффективностиибезопасности трансфузий отмытой аутоэритроцитной массы из ПК и отмытойдонорской эритроцитной массы 110 новорожденным детям с клиниколабораторнымипризнакамианемиивпослеоперационномпериоде,наблюдавшимся в отделении хирургии, реанимации и интенсивной терапииноворожденных в период с 2005 года по 2014 год.В ходе работы была разработана и оптимизирована медицинская технологияпо заготовке, хранению и клиническому применению аутоэритроцитной массы изПК для терапии анемии у новорожденных детей.Настоящее исследование проводилось по правилам и в соответствии спринципами Национального стандарта РФ ГОСТ Р 52379–2005 «Надлежащаяклиническая практика» (идентичен Good Clinical Practice; ICH), включающего всебя разрешение Комиссии по этике биомедицинских исследований ФГБУ « НЦ34АГиП им.

Кулакова» Минздрава России (выписка из протокола №12 от01.11.2013г) и предварительно полученное добровольное информированноесогласие законных представителей пациентов, включенных в исследование.2.1 Материалы исследования2.1.1 Дизайн исследования и критерии исключения и включения обследуемыхноворожденных детей в исследованиеВ исследование было включено 110 новорожденных детей с порокамиразвития, которым в послеоперационном периоде потребовалась трансфузияэритроцитных компонентов крови.

Пациенты были разделены на две клиническиегруппы.Впервуюгруппу,группуисследования(Гр.1,n=77),вошлиноворожденные дети, у которых при рождении проводился забор пуповиннойкрови и ее хранение с последующей предтрансфузионной обработкой ипереливаниемотмытойаутологичнойэритроцитноймассыизпуповинной/плацентарной крови.Во вторую группу, группу сравнения (Гр. 2, n=33), были включеныноворожденные дети, которым проводилась стандартная трансфузия отмытойаллогенной эритроцитной массы из крови взрослых доноров.В каждой из групп также были выделены две подгруппы: – доношенныхноворожденных (подгруппа А) и недоношенных новорожденных (подгруппа Б)(Рисунок 2.1).35Заготовленааутологичная ПКНоворожденные дети сПР, поступившие вОХРИТННе заготовленааутологичная ПКТрансфузия эритроцитного компонента крови новорожденным с клиниколабораторными признаками анемии в послеоперационном периодеТрансфузияаутологичныхотмытыхэритроцитов ПКСтратификация посходным нозологическимгруппам заболеванийГруппа 2Группа 1Подгруппа АдоношенныеноворожденныеПодгруппа БнедоношенныеноворожденныеТрансфузияотмытыхэритроцитовкрови доноровОценкаклиническойэффективноститрансфузииПодгруппа АдоношенныеноворожденныеПодгруппа БнедоношенныеноворожденныеОценкабезопасноститрансфузииРис.

2.1 Дизайн исследованияКонечными точками исследования являлись:средние нормальные гематологические показатели и минимизация факторовриска при аутотрансфузии эритроцитной массы из пуповинной кровискорректированные отношения шансов развития посттрансфузионныхосложнений и показателей клинической эффективности36Согласно дизайну исследования, в него были включены пациенты,соответствующие следующим критериям:доношенные новорожденные дети,недоношенные новорожденные (с 29 недели гестации),новорожденные дети с пороками развития (ПР), оперированные в ОХРИТН,новорожденные дети с клинико–лабораторными признаками анемии впослеоперационном периоде.Критериями исключения из исследования являлись:недоношенность менее 29 недель гестации,множественные пороки развития, несовместимые с жизнью,исходно низкие уровни гемоглобина и гематокрита при рождении,злокачественные опухолевидные образования у новорожденных детей,наличиеуноворожденногосептическогопроцесса,развившегосявнутриутробно,проведение новорожденному процедуры ЭКМО,наличиепротивопоказанийкзаготовке,хранениюипереливаниюаутологичной эритроцитной массы, полученной из пуповинной крови: наличие у матери особо опасных инфекций: гепатита А, В, С и др., ВИЧ,сифилиса, наличие у матери острого инфекционно-воспалительного или септическогопроцесса любой локализации. наличие у матери признаков хорионамнионита по данным УЗИ,наличие у новорожденного клинически и лабораторно подтвержденнойгемолитической болезни по АВО и/или системе Rh,отказ законного представителя ребенка от участия в исследовании.37Набор новорожденных детей для исследования производился в отделениихирургии реанимации и интенсивной терапии новорожденных (ОХРИТН).

Характеристики

Список файлов диссертации