Диссертация (1140411), страница 16

Просмтор этого файла доступен только зарегистрированным пользователям. Но у нас супер быстрая регистрация: достаточно только электронной почты!

Текст из файла (страница 16)

рисунок 79).При темнопольной и поляризационной микроскопии матрикс всех типовфибриллизации дает более выраженное свечение, чем нативный с наибольшейинтенсивностью свечения в очагах Ф1 – Ф3 типов, практически идентичнойтаковой у надхрящницы (см. рисунки 77 и 78). Анизотропия очагов Ф1 – Ф3типов характеризуется, преимущественно, желто-оранжевым и оранжево-краснымспектрами, в то время, Ф4 – нежным желтовато-зеленоватым, близким кнативному матриксу, но более ярким.123Рисунок 75 – Строение реберного хряща у детей с КД: надхрящница – Н,субперихондрий – СП, хрящевой канал – К, центральная зона хряща – ЦЗ;фазово-контрастная микроскопия, окраска пикросириусом красным, × 100.Рисунок 76 – Строение реберного хряща у детей с КД: в матриксе виднатонкая сеточка коллагеновых волоконец (стрелки), фазово-контрастнаямикроскопия, окраска пикросириусом красным, × 1 000.124Рисунок 77 – Строение реберного хряща у детей с КД: надхрящница – Н,субперихондрий – СП, хрящевой канал – К, центральная зона хряща – ЦЗ;темнопольная микроскопия, окраска пикросириусом красным, × 100.Рисунок 78 – Строение реберного хряща у детей с КД: надхрящница – Н,субперихондрий – СП, хрящевой канал – К, центральная зона хряща – ЦЗ;полярационная микроскопия, окраска пикросириусом красным, × 100.125Рисунок 79 – Строение реберного хряща у детей с КД (центральная зона):нативный матрикс (НМ); 4 типа фибриллизации матрикса (Ф1 – Ф4),окраска пикросириусом красным: а и б – фазово-контрастная микроскопия:а) × 1 000; б) × 200; в и г – темнопольная микроскопия, × 200; д и е –поляризационная микроскопия, окраска пикросириусом красным: д) × 1 000,е) × 200.ИГХ-исследование (см.

рисунок 80) выявляет экспрессию коллагена I и IIIтипов в надхрящнице и в периферической части хрящевых каналов при ееотсутствии в матриксе гиалиновой хрящевой ткани и хондроцитах. В то же время,коллаген II типа определяется в матриксе гиалиновой хрящевой ткани ивстречается в цитоплазме хондроцитов, однако в надхрящнице и каналах онотсутствует.126Рисунок 80 – Иммуногистохимическая характеристика реберного хряща удетей с КД: надхрящница – Н, субперихондрий – СП, центральная зона хряща– ЦЗ; хрящевой канал – К, бесклеточные участки – звездочка (*);иммунопероксидазный метод: а) антитела к коллагену I типа, × 100 иб) антитела к коллагену I типа, × 200; в) антитела к коллагену II типа,× 100; г) антитела к коллагену III типа, × 200.Очаги фибриллизации матрикса Ф1-Ф4 типов при ИГХ-исследовании(рисунок 81) характеризуются коллагеновым составом волокон идентичнымсоставу нативного матрикса реберного хряща (наличие коллагена II типа приотсутствии коллагенов I и III типов).127Рисунок 81 – Иммуногистохимическая характеристика реберного хряща удетей с КД: нативный матрикс (НМ); 4 типа фибриллизации матрикса (Ф1 –Ф4); иммунопероксидазный метод: а) антитела к коллагену I типа, × 50;б) антитела к коллагену I типа, × 200; в) антитела к коллагену II типа, × 50;г) антитела к коллагену II типа, × 400; д) антитела к коллагену III типа,× 200; е) антитела к коллагену III типа, × 400.При НЛОМ надхрящница с хрящевыми каналами и гиалиновая хрящеваяткань реберного хряща дают ГВГ, свидетельствующий о коллагеновой природеструктур, и ДФФ, свидетельствующий о наличии в них флуорофоров (рисунок82).128Рисунок 82 – Строение реберного хряща у детей с КД: надхрящница – Н,субперихондрий – СП, центральная зона – ЦЗ, хрящевой канал – К, нативныйматрикс – НМ (территориальный матрикс – ТМ, интертерриториальныйматрикс – ИМ), хондроциты – ХЦ; 4 типа фибриллизации матрикса (Ф1 –Ф4), гигантская лакуна – звездочка (*), а –г, НЛОМ, режим ГВГ + ДФФ, × 600.ГВГ-сигнал полностью отсутствует в хондроцитах, которые дают лишьДФФ-сигнал (наиболее интенсивный, по сравнению с другими структурами).ГВГ-сигнал отмечается в надхрящнице, в нативном матриксе (в виде нежнойсеточки) и в очагах фибриллизации Ф1 – Ф4 типов (при этом интенсивностьсигнала в них значительно выше, чем в нативном матриксе).При ТЭМ реберного хряща у детей с КД грудной клетки (рисунок 83) вматриксе определяются одноядерные хондроциты с различной формой иразмерами.

В ядрах находится, эу- и гетерохроматин, ядрышки четко не видны. Вцитоплазме видны вакуоли, элементы синтетического аппарата, гранулыгликогена и липидные капли.129Рисунок 83 – Ультраструктура реберного хряща у детей с КД, ТЭМ: ТЭМ:а) глубокие отделы субперихондрия: хондроциты (ХЦ), один из которых всостоянии апоптоза (справа), другой – с признаками вакуолизациицитоплазмы (слева), вакуоли обозначены красными стрелками, × 6 000;б) нативный матрикс с гранулами протеогликанов и коллагеновымифибриллами диаметром до 100 нм с поперечной исчерченностью 60 – 70 нм,× 40 000.Нативныйпараллельны)матриксфибриллхрящатолщинойсостоитдо120изразнонаправленныхнмспериодом(иногдапоперечнойисчерченности 55 – 70 нм (рисунок 83).

Фибриллы расположены средифибриллярно-гранулярного матрикса (протеогликаны).Очаги фибриллизации матрикса Ф1 – Ф4 типов состоят из фибрилл спериодом поперечной исчерченности 55-70 нм и толщиной более 100 – 120 нм,достигающей 1 000 нм, которые расположены среди матрикса с неравномернымраспределением фибриллярно-гранулярного вещества (рисунок 84).В нативном матриксе и в очагах фибриллизации Ф1 – Ф4 типовопределяются признаки латеральной агрегации в виде слияния субфибрилл сформированием более толстых фибрилл и агрегатов фибрилл.130Рисунок 84 – Ультраструктура реберного хряща у детей с КД, ТЭМ: а и б: Ф1тип фибриллизации: а) коллагеновые фибриллы диаметром до 400 нм,признаки латеральной агрегации фибрилл (красная стрелка), × 40 000;б) агрегат из двух коллагеновых фибриллы с периодом 55-60 нм общимдиаметром 800 нм, × 40 000; в) Ф2 тип фибриллизации: коллагеновыефибриллы диаметром до 1000 нм с периодом 55 – 60 нм, неравномерноераспределение гранул протеогликанов, × 30 000; г) Ф4 тип фибриллизации:коллагеновые фибриллы диаметром 100 – 200 нм с периодом 55 – 60 нм,равномерное распределение гранул протеогликанов, × 25 000.СЭМ нативного матрикса реберных хрящей у детей, страдающих КДгрудной клетки, выявляет трехмерную сеть из тонких, разнонаправленных,анастомозирующих между собой коллагеновых фибрилл диаметром до 100 – 120нм (рисунок 85).131Рисунок 85 – Ультраструктура нативного матрикса реберного хряща у детейс КД, СЭМ × 8 000.В участках фибриллизации матрикса Ф1-Ф4 типов диаметр фибриллзначительно превышает 100 – 120 нм, при этом формируются агрегаты суммарнойтолщиной до 4 000 нм (см.

рисунок 86). Фибриллы в очагах Ф1 типа имеютпараллельный ход, Ф2 типа – переплетаются между собой, Ф3 типа –расположены хаотично внутри лакун, а Ф4 – близки по архитектонике кнативному матриксу. Во многих препаратах нативного матрикса и Ф1 – Ф4 типовфибриллизации отмечаются признаки латеральной агрегации фибрилл.132Рисунок 86 – Ультраструктура фокусов фибриллизации реберного хряща удетей с КД, СЭМ: а) Ф1 тип фибриллизации; скопления параллельныхфибрилл толщиной до 500 нм, × 8 000; б) Ф2 тип фибриллизации;переплетение фибрилл и их агрегатов толщиной до 4 000 нм (краснаястрелка), × 2 500; в) среди фибрилл Ф2 типа скопления фибрилл Ф3 типа(красная стрелка), × 8 000; г) Ф4 тип фибриллизации; агрегаты фибриллдиаметром до 2 000 нм (стрелка), × 8 000.При АСМ реберных хрящей у детей, страдающих КД грудной клетки, всоставе нативного матрикса и фокусов фибриллизации Ф1 – Ф4 типовопределяются коллагеновые фибриллы с периодом поперечной исчерченности 60– 70 нм, имеющие трехмерную структуру, идентичную структуре, описанной приСЭМ (см.

рисунки 87 и 88).При АСМ нативного матрикса максимальный диаметр фибрилл составляет120 нм, в то время как диаметр фибрилл в составе Ф1 – Ф4 типов фибриллизациизначительно его превышает, достигая 1 500 нм за счет латеральной агрегациифибрилл.133Рисунок 87 – Ультраструктура нативного матрикса реберного хряща:фибриллы толщиной до 100 нм, АСМ, размер скана 5 × 5 мкм.Морфометрическое исследование реберных хрящей у детей, страдающихКД грудной клетки показало, что среднее относительное число лакун в 10 поляхзрения в норме составляет 129,61 лакуны (95 % ДИ составляет +/- 15,5), средняяотносительная доля пустых лакун – 0,649 лакуны (95 % ДИ составляет +/- 0,013).Частота встречаемости гиперлакунарных зон в реберных хрящах у детей сКД составляет 9,30 % (95 % ДИ составляет +/- 5,50 %), гиполакунарных – 81,40 %(95 % ДИ составляет +/- 7,10 %).

Частота встречаемости хрящевых каналовсоставляет 5,7 % (95 % ДИ составляет +/- 4,6 %), а их средняя относительнаяплощадь - 11007,91 мкм2 (95 % ДИ составляет +/- 8605,78 мкм2).134Рисунок 88 – Ультраструктура матрикса реберного хряща у детей с КД,АСМ: а) Ф1 тип фибриллизации; агрегаты фибрилл толщиной до 2 000 нм(красная стрелка), размер скана 5 × 5 мкм; б) Ф2 тип фибриллизации;агрегаты фибрилл толщиной до 1 500 нм (красная стрелка), размер скана 5 ×5 мкм; в) Ф3 тип фибриллизации: фибриллы толщиной до 2 000 нм,переплетающиеся между собой, размер скана 5 × 5 мкм; г) Ф4 типфибриллизации; фибриллы диаметром до 300 нм формируют агрегаты до1 000 нм (стрелка), размер скана 3 × 3 мкм.Средняя частота встречаемости фокусов фибриллизации в 10 полях зрения внорме составляет: для Ф1 типа: 35,0 % (95 % ДИ составляет +/- 9,4 %); для Ф2 типа: 66,7 % (95 % ДИ составляет +/- 9,3 %); для Ф3 типа: 6,7 % (95 % ДИ составляет +/- 5,3 %); для Ф4 типа: 95,0 % (95 % ДИ составляет +/- 4,7 %).Средняя относительная площадь фокусов фибриллизации в 10 полях зренияв норме составляет:135 для Ф1 типа: 163 840,00 мкм2 (95 % ДИ составляет +/- 92 486,54 мкм2); для Ф2 типа: 126 097,70 мкм2 (95% ДИ составляет +/- 43 043,93 мкм2); для Ф3 типа: 738,84 мкм2 (95 % ДИ составляет +/- 690,46 мкм2); для Ф4 типа: 604 346,40 мкм2 (95 % ДИ составляет +/- 126 171,00 мкм2); суммарная площадь: 897 852,80 мкм2 (95 % ДИ составляет +/- 143 459,60мкм2).Проведенный корреляционный анализ выявил следующие статистическидостоверные корреляции (даны коэффициенты корреляции): между общим количеством лакун и возрастом: минус 0,612 (p =0,020127); между долей пустых лакун и возрастом: минус 0,732499 (p = 0,002888); между общим количеством лакун и очагами фибриллизации: для Ф3 типа: минус 0,587 (p = 0,027258); между возрастом и площадью различных типов фибриллизации: для Ф3 типа: 0,576 (p = 0,031); между площадью различных типов фибриллизации: между Ф4 и Ф1: минус 0,670 (p = 0,009); между степенью внешних признаков ДСТ и: площадью Ф1 типа: 0,595 (p = 0,017); площадью Ф3 типа: 0,563 (p = 0,034); между степенью висцеральных признаков ДСТ и: площадью Ф1 типа: 0,525 (p = 0,025); площадью Ф3 типа: 0,510 (p = 0,048).Строение реберных хрящей у всех детей из группы с КД грудной клетки, вцелом, одинаковое, независимо от их возраста и пола.

Характеристики

Список файлов диссертации