Диссертация (1139727), страница 21
Текст из файла (страница 21)
Составвспомогательных веществ исследуемого и референтного препарата (Никавир® 200 мг и 400 мг), в связи с этим дополнительных валидационных работпо установлению специфичности методики не требовался. Кроме того, аналитические характеристики методики не изменялись при смене рН средырастворения (рН 1,2, 4,5, 6,8). В связи с этим методика количественного определения фосфазида для изучения кинетики растворения препаратов Никавир® 200 мг и 400 мг была подвергнута процедуре межлабораторного переноса (трансфера).Методика количественного определения, приведенная в проекте НД напрепарат Фосфаладин 150+400 мг, подразумевала хроматографирование 1пробы в течение 32 мин. Поскольку один аналитический цикл для СТКРдолжен включать в себя для каждой среды растворения не менее 102 проб (4проб х 12 повторностей х 2 препарата = 96 проб + не менее 6 проб стандарта)для выполнения требования о параллельности изучения исследуемого и референтного препарата, его длительность при использовании методики по НДдолжна составлять не менее 54,4 ч (то есть более двух суток).
Такая длительность является недопустимой с точки зрения стабильности испытуемых истандартных растворов, которые следует использовать свежеприготовленными согласно проекту НД (т.е. их следует проанализировать в течение 24 ч).В связи с этим для данного исследования была разработана новая хроматографическая методика с длительностью анализа 8 мин, приведенная в разделе1112.1.7.2.
Данная методик была подвергнута полной валидации.2.1.8.1. Межлабораторный перенос методики количественного определения фосфазидаДля каждой из сред растворения параллельно готовили 2 стандартныхраствора (из двух навесок) и проводили их количественное определение. Далее рассчитывали открываемость методики по следующей формуле:R = (C1xS2)/(C2xS1), гдеR – открываемость, %С1 – концентрация первого стандартного раствора, мг/млС2 – концентрация второго стандартного раствора, мг/млD1 – площадь пика фосфазина на хроматограмме первого стандартногораствораD2 – площадь пика фосфазина на хроматограмме второго стандартногораствораРезультаты оценки открываемости методики считались удовлетворительными, если открываемость принимала значения от 0,98 до 1,02.Определяли сходимость методики, для чего хроматографировали стандартный раствор 6 раз и рассчитывали относительное стандартное отклонение (RSD,%).
Результаты оценки сходимости методики считались удовлетворительными, если RSD не превышало 2%.1.1.8.1. Валидация методики количественного определения фосфазида и ламивудинаВалидацию методики количественного определения фосфазида и ламивудина для СТКР проводили по следующим валидационным характеристикам: специфичность, линейность, правильность, прецизионность (сходимостьи промежуточная прецизионность), аналитическая область, устойчивость(робастность).Для установления специфичности методики последовательно хроматографировали стандартные растворы фосфазида и ламивудина, плацебораствор, а также среды растворения (рН 1,2, 4,5, 6,8). Критерием приемлемо-112сти было отсутствие пиков со временами удерживания фосфазида и ламивудина на хроматограммах плацебо-раствора и сред растворения рН 1,2, 4,5,6,8.Для установления линейности методики готовили серию из 6 стандартных растворов фосфазида и ламивудина (в диапазоне 40% - 140% от номинального содержания: 40%, 60%, 80%, 100%, 120%, 140% для каждого изаналитов) и проводили их анализ согласно разработанной методике.
Далеестроили калибровочные графики в нормализованных координатах (зависимость найденных концентраций от введенных) и рассчитывали коэффициентлинейной детерминации (r2) и остаточный член линейной зависимости (a).Для оценки линейности были установлены следующие критерии приемлемости: величина коэффициента линейной детерминации (r2) должна составлять не менее 0,999, значение остаточного члена линейной зависимостине должно статистически значимо отличаться от нуля.Для установления правильности и прецизионности (сходимость и промежуточная прецизионность) готовили стандартные растворы фосфазида иламивудина на трех уровнях концентраций: 40%, 100%, 140% от номинального содержания, хроматографировали по 5 раз и рассчитывали величиныотносительной погрешности (Ɛ, оценка правильности) и относительногостандартного отклонения (RSD, оценка прецизионности).Для оценки сходимости оценивали величину RSD по результатам анализа одним аналитиком в течение одного рабочего дня, для оценки промежуточной прецизионности – двумя аналитиками в течение двух дней.
Оценкупромежуточной прецизионности проводили на уровне концентраций 100% отноминального на 6 повторностях.Критерии приемлемости для оценки правильности и прецизионностибыли установлены на уровне 2% для величин Ɛ и RSD.Для оценки устойчивости (робастности) методики необходимо былоподтвердить, что валидационные характеристики методики сохраняются приизменении какого-либо критически значимого фактора. Таким фактором, в113первую очередь, является рН среды растворения, поскольку СТКР проводится в средах растворения с различными значениями рН (1,2, 4,5, 6,8). В связи сэтим оценивали дополнительно правильность и прецизионность методики натрех уровнях концентраций (40%, 100%, 140% от номинального содержания)в 5 повторностях в каждой из трех сред растворения.Критерии приемлемости для оценки устойчивости: 2% для величин Ɛ иRSD для каждой из трех сред растворения.На основании оценки всех валидационных характеристик методикибыла установлена ее аналитическая область.2.2.
Результаты и обсуждение2.2.1. Биофармацевтическая классификация фосфазидаВ качестве действующего вещества препарат Никавир® содержит фосфазид: 3'-азидо-2',3'-дидезокситимидин-5'-монофосфат натрия.Структурная формула фосфазида приведена на Рисунке 2.1.Рисунок 2.1. Структурная формула фосфазида.Фосфазид является нуклеозидным ингибитором обратной транскриптазы (НИОТ), противовирусным средством, применяемым в составе комбинированной антиретровирусной терапии, активен в отношении ВИЧ и гепатитаB. По химической природе фосфазид представляет собой натриевую сольсложного эфира (фосфонат) другого антиретровирусного лекарственногосредства – азидотимидина (зидовудина). Данные о биофармацевтической114классификации и, соответственно, биофармацевтической растворимостифосфазида в литературе отсутствуют, в связи с этим для последующего исследования кинетики растворения и подбора оптимальных условий теста необходимо экспериментальным путем установить биофармацевтическую растворимость и класс фосфазида по БКС.
Исходя из структуры молекулы,представляющей собой натриевую соль замещенной фосфористой кислоты,можно предположить «высокую» растворимость фосфазида в водных растворах в физиологическом диапазоне рН, однако для инновационных молекулнеобходимо экспериментальное определение биофармацевтической растворимости для точного установления класса по БКС.При изучении биофармацевтической растворимости было установлено,что навески субстанции фосфазида (50 мг) полностью растворились в 1000мкл каждой из сред растворения рН 1,2, 4,5, 6,8.
В связи с этим былопринято,чтобиофармацевтическаярастворимостьфосфазидавфизиологическом диапазоне рН превышает 5 % (50 мкг/мл). Рассчитанныевеличины D/S и биофармацевтическая растворимость фосфазида приведена вТаблице 2.2. Кроме того, при изучении стабильности фосфазида в средахрастворения рН 1,2, 4,5, 6,8 при 37оСв рамках исследованиябиофармацевтической растворимости было показано, что степень деградациифосфазида до азидотимидина в течение 24 ч в каждой из трех средрастворения не превышала 2 %, несмотря на наличие в составе молекулысложноэфирной связи с неорганической (фосфористой) кислотой.
Такимобразом, можно сделать предположение, что фосфазид обладает «высокой»биофармацевтической растворимостью и стабильностью в физиологическихусловиях ЖКТ.По результатам фармакокинетических исследований, приведенных влитературе, относительная биодоступность фосфазида при пероральномприменении составляет 83,7 % [427]. Данная величина биодоступности позволяет охарактеризовать кишечную проницаемость фосфазида как «низкую»(критерий приемлемости: не менее 85%).
Принимая во внимание «высокую»115биофармацевтическую растворимость и «низкую» кишечную проницаемостьфосфазида, его следует отнести к III классу БКС. Для препаратов III классаБКС, как и для I класса БКС, ожидается полное высвобождение (более 85%) вкаждой из сред растворения рН 1,2, 4,5, 6,8 при проведении исследованиякинетики растворения.Таблица 2.2.Оценка биофармацевтической растворимости субстанции фосфазидаСреда растворенияD/S (Dmax = D/S (ВРД = Растворимость400 мг)400 мг)0,1 М раствор хлористово<8<8дородной кислоты + 0,2%натрия хлорида рН 1,2ацетатный буферный рас<8<8твор рН 4,5фосфатный буферный рас<8<8твор рН 4,52.2.2.
Биофармацевтическая классификация ламивудинаЛамивудинпредставляетсобой4-амино-1-[(2R,«высокая»«высокая»«высокая»5S)-2-(гидроксиметил)-1,3-оксатиолан-5-ил]-1,2-дигидропиримидин-2-он. Ламивудин является нуклеозидным ингибитором обратной транскриптазы. Используется как противовирусное средство, применяемое в составе комбинированной высокоактивной антиретровирусной терапии, проявляет активность в отношении ВИЧ и гепатита В. Структурная формула ламивудина приведена наРисунке 2.2.Рисунок 2.2.
Структурная формула ламивудина.116Ламивудин представляет собой производное дигидропиримидин-2-онаи содержит в составе молекулы первичную аминогруппу, которая определяетего слабоосновные свойства (рКа 4,3). Согласно литературным данным, ламивудин имеет «высокую» биофармацевтическую растворимость в физиологическом диапазоне рН и абсолютную биодоступность на уровне 82 – 88%.Принимая во внимание критерий ВОЗ для «высокой» кишечной проницаемости (более 85%), ламивудин следует отнести к 3 классу БКС (на границе с 1классом БКС по проницаемости).
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
