Диссертация (1139727), страница 19
Текст из файла (страница 19)
В то же время, биовейвер на основе IVIVC не может бытьиспользован для замены регистрационных исследований БЭ, однакопозволяет заменить исследования in vivo на пострегистрационном этапеи уменьшить их количество при разработке ЛС. Следует отметить, чтотребования к проведению процедуры «биовейвер» существенно различаются в документации разных стран и регуляторных органов.6.
Требования к объему и условиям к проведению СТКР при масштабировании производства и пострегистрационных изменениях в Российских документах отсутствуют (на начало 2016 г.). При этом существуетряд зарубежных рекомендаций, которые следует использовать при планировании исследований, наиболее подробными из которых являютсяруководства FDA.97ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬГЛАВА2.ИЗУЧЕНИЕИННОВАЦИОННОГОКИНЕТИКИПРЕПАРАТАРАСТВОРЕНИЯНИКАВИР®ИЕГОФИКСИРОВАННОЙ КОМБИНАЦИИ С ЛАМИВУДИНОМЗадачами настоящего этапа диссертационного исследования разработать методики и провести исследования кинетики растворения и валидациюметодики определения высвободившегося ЛВ для инновационного лекарственного средства (Никавир®, таблетки 200 мг и 400 мг) и его фиксированнойкомбинации (Фосфаладин, таблетки, покрытые пленочной оболочкой, 150 мг+ 400 мг).
Актуальность данного этапа исследования в первую очередь определяется необходимостью разработки качественных, эффективных и безопасных отечественных импортозамещающих антиретровирусных ЛС, к которым относятся Никавир® и Фосфаладин.2.1. Материалы и методы1.1.1. Объекты исследованияПрепараты фосфазидаИсследуемое лекарственное средство:Никавир® таблетки 400 мг производства ООО «АЗТ ФАРМА К.Б.», Россия,серия IM006A, годен до 12.2012 г.
(далее по тексту главы - Никавир® 400 мг).Состав: фосфазид 400 мг; вспомогательные вещества: кальция карбонатосажденный 225,5 мг, целлюлоза микрокристаллическая 72,7 мг, кремния диоксид коллоидный 25,5 мг, кальция стеарат 7,3 мг.Референтное лекарственное средство:Никавир® таблетки 200 мг производства ООО «АЗТ ФАРМА К.Б.», Россия,серия S01136, годен до 09.2013 г. (далее по тексту главы - Никавир® 200 мг).Состав: фосфазид 200 мг, вспомогательные вещества: кальция карбонат, целлюлоза микрокристаллическая, аэросил, кальция стеарат.Состависследуемыхпропорциональным.лекарственныхсредствявляетсядозо-98В качестве действующего вещества исследуемое и референтное лекарственные средства содержат фосфазид: 3'-азидо-2',3'-дидезокситимидин-5'монофосфат натрия.Препараты фосфазида и ламивудинаИсследуемое лекарственное средствоФосфаладин таблетки, покрытые пленочной оболочкой, 150 мг + 400 мг(ООО «АЗТ ФАРМА К.Б.», Россия), серия 010415, срок годности до 04.17 г.(далее по тексту: Фосфаладин 150+400 мг).Состав: ламивудин 150 мг, фосфазид 400 мг; вспомогательные вещества:целлюлозамикрокристаллическаясилицированная55,0мг(микрокристаллическая целлюлоза 98%, кремния диоксид коллоидный 2%)(Ph.
Eur. или USP/NF), натрия стеарилфумарат 3,0 мг (Ph. Eur. или USP/NF),кальциястеарат3,0мг(USP/NF).Составоболочки:пленочноепокрытие «Вивакоат®» РМ-2Р-000 18,0 мг, гипромеллоза 9,0 мг (Ph. Eur.или USP/NF, или E464), титана диоксид 4,5 мг (Ph. Eur или Е171), оксиджелеза желтый 0,9 мг (USP/NF или Е172), тальк 1,8 мг, (USP/NF или Ph. Eur,или Е553b), гипролоза 0,9 мг (Ph. Eur. или USP/NF), макрогол-3350 0,9 мг(Ph. Eur. или USP/NF).Референтное лекарственное средство №1Эпивир® таблетки, покрытые пленочной оболочкой, 150 мг («ГлаксоСмитКляйн Фармасьютикалз С.А.», Польша), серия UH0420, срок годности до 06.18г. (далее по тексту: Эпивир® 150 мг).Состав: ламивудин, 150 мг; вспомогательные вещества: микрокристаллическая целлюлоза, карбоксиметилкрахмал натрия (натрия крахмала гликолят),магния стеарат, Opadry® YS-1-7706-G (гипромеллоза 59, титана диоксид,макрогол 400 (полиэтиленгликоль 400), полисорбат 80).Референтное лекарственное средство №2Никавир® таблетки, 400 мг (ООО «АЗТ ФАРМА К.Б.», Россия), серия010415, срок годности до 04.17 г.99Состав: фосфазид 400 мг; вспомогательные вещества: кальция карбонат(осажденный), целлюлоза микрокристаллическая, кремня диоксид коллоидный (аэросил), кальция стеарат.В качестве действующих веществ исследуемое и референтное лекарственные средства содержат фосфазид и ламивудин – 4-амино-1-[(2R, 5S) -2(гидроксиметил)-1,3-оксатиолан-5-ил]-1,2-дигидропиримидин-2-он.Все лекарственные средства были предоставлены ООО «АЗТ ФАРМАК.Б.», Россия.1.1.2.
Оборудование, реактивы, программное обеспечениеСравнительный тест кинетики растворения проводили на аппаратахAgilent Technologies 708-DS Dissolution Apparatus (США) и Erweka DT 8001000LH, (Германия). Определение биофармацевтической растворимости субстанций проводили на термостатируемом шейкере TS-100, Biosan, Латвия.Количественное определение высвободившегося ЛВ проводили методомВЭЖХ на жидкостных хроматографах Waters Alliance 2695 с диодноматричным детектором 2998 (США) и программным обеспечением Waters Empower2 и Agilent 1290 Infinity II с диодноматричным УФ-детектором, Agilent Technologies (США) и программным обеспечением OpenLAB ChemStation Edition,версия С.01.07.
Взятие навесок осуществляли на аналитических весах (точность до 0,1 мг) A&D Company Ltd. GR-200 (Япония) и Mettler Toledo, AL204 (Швейцария). Определение рН проводили на рН-метрах 728 рН lab, Metrohm AG (Швейцария) и Five FE20 (рН-метр) в комплекте с электродомLE409, Mettler Toledo (Швейцария). Обработку результатов СТКР и валидации методики проводили при помощи валидированных автоматических таблиц Microsoft Excel.В качестве вспомогательного оборудования использовали: вакуумныенасосы XF54 230 50, Millipore (Франция) и Waters, Solvent Clarification Kit(США), дозатор пипеточный одноканальный с переменным объемом «Ленпипет» (Россия), вортекс-шейкер Reax Top, Heidolph (Германия), магнитную100мешалку RH Basic 2 (IKA, Финляндия), система водоподготовки Milli-QIntegral A10, Millipore (Франция).В работе использовалась мерная лабораторная посуда: мерный цилиндрвместимостью 1000 мл, стаканы пластиковые вместимостью 5000 мл, колбымерные класса «А» вместимостью 20, 25 и 50 мл, пипетки аналитическиекласса «AS» вместимостью 2 и 10 мл.
Фильтрацию проб проводили черезмембранные фильтры с размером пор 0,45 мкм (Agilent Captiva Premium Syringe Filter® или CHROMAFIL®).В работе использовалась реактивы: хлористоводородная кислота концентрированная (Сигма Тек, Россия, класс «х.ч.»), аммония ацетат (Panreac,Испания, класс «х.ч.»), натрия ацетат тригидрат (Panreac, Испания, класс«х.ч.»), уксусная кислота ледяная (Panreac, Испания, класс «х.ч.»), натриягидрофосфат дигидрат (Panreac, Испания, класс «х.ч.»), калия дигидрофосфат(Panreac, Испания, класс «х.ч.»), фосфорная кислота 85% (Panreac, Испания,класс «х.ч.»), натрия гидроксид (Panreac, Испания, класс «х.ч.»), натрия хлорид (Scharlau, Испания, класс «х.ч.»), ацетонитрил (Scharlau, Испания, HPLCgrade), вода деионизированная (18,2 мОМ).1.1.3.
Стандартные образцы стандартный образец фосфазида (Никавир® ЗАО «Производственно-коммерческаяАссоциацияАЗТ»,Россия,серия010211,содержание фосфазида 99,5%, годен до 02.2013 г.); стандартный образец фосфазида (Никавир® ООО «АЗТ ФАРМАК.Б.», Россия, содержание фосфазида 99,5%, серия 011214, годен до12.2016 г.); стандарт ламивудина (European Pharmacopoeia Reference Standard,CRS, содержание ламивудина 99,7%, серия Y0000425).Стандартные образцы были предоставлены ООО «АЗТ ФАРМА К.Б.»,Россия.1011.1.4.
Нормативная документацияДля определения биофармацевтической субстанции фосфазида использовался типовой протокол определения биофармацевтической растворимостисубстанций, приведенный в [170]. Исследование сравнительной кинетикирастворения проводили в соответствии с требованиями Руководства по экспертизе лекарственных средств, том I, 2013 г. и том III, 2014 г., Методических Указаний Минздравсоцразвития России «Оценка биоэквивалентностилекарственных средств», приложение 4, 2008 г [22,23,10].
Исследования кинетики растворения, проведенные до 2014 г., выполнялись на 6 повторностях,после 2014 г. – на 12 повторностях. Валидацию методик количественного определения фосфазида и ламивудина проводили согласно ОФС «Валидацияаналитических методик», ГФ XIII [426].1.1.5. Приготовление сред растворения0,2% раствор натрия хлорида в 0,1 М растворе хлористоводородной кислоты рН 1,2 (далее по тексту: среда растворения рН 1,2)В мерную колбу вместимостью 1000 мл вносили 500 мл воды очищенной,8,7 мл хлористоводородной кислоты концентрированной, доводили объем раствора до 1000 мл водой очищенной и тщательно перемешивали.
2,0 г натрияхлорида растворяли в 1000 мл 0,1 М раствора хлористоводородной кислоты иперемешивали. Проверяли рН и при необходимости доводили значение рНдо 1,2 1 М раствором хлористоводородной кислоты или 1 М раствором натриягидроксида.Ацетатный буферный раствор рН 4,5 (далее по тексту: среда растворения рН 4,5)В мерную колбу вместимостью 1000 мл вносили 2,99 г натрия ацетататригидрата и растворяли в 200 мл воды очищенной. К полученному растворуприбавляли 14 мл 0,2 М раствора уксусной кислоты, доводили объем растворадо метки водой очищенной и тщательно перемешивали. Измеряли рН растворана рН-метре, при необходимости доводили рН до значения 4,5 0,1 М растворомхлористоводородной кислоты или 0,1 М раствором натрия гидроксида.102Фосфатный буферный раствор рН 6,8 (далее по тексту: среда растворения рН 6,8)4,67 г натрия гидрофосфата и 4,609 г калия дигидрофосфата вносили вмерный стакан вместимостью 1000 мл, прибавляли 400 мл воды очищенной,перемешивали с использованием магнитной мешалки в течение приблизительно 30 мин до полного растворения, затем переносили в мерную колбувместимостью 1000 мл, доводили объем раствора до метки водой очищеннойи тщательно перемешивали.
Измеряли рН раствора на рН-метре, при необходимости доводили значение рН до значения 6,8 раствором фосфорной кислоты или 0,1 М раствором натрия гидроксида.1.1.6. Изучение биофармацевтической растворимости субстанциифосфазидаОколо 50 мг (точная навеска) субстанции фосфазида вносили вполипропиленовыецентрифужныепробиркитипа«Eppendorf»вместимостью 1,5 мл и прибавляли 1000 мкл соответствующей средырастворения. Пробирки помещали в термошейкер и встряхивали в течение 24ч при температуре 37,0оС при 1400 об/мин, далее незамедлительноцентрифугировали при 13500 об/мин в течение 10 мин и отделялинадосадочную жидкость.
Для каждой среды растворения испытаниепроводили в трех повторностях. Параллельно проводили термостатированиев течение 24 ч для стандартных растворов в каждой из сред растворения дляоценкистабильностисубстанциифосфазидавусловияхизучениябиофармацевтической растворимости.Для количественного определения надосадочную жидкость разводили в1000 раз соответствующей средой растворения. 100 мкл надосадочнойжидкости переносили в полипропиленовые пробирки вместимостью 10 мл,прибавляли 9,9 мл соответствующего буферного раствора и перемешивали навортекс-шейкере в течение 1 мин. 1 мл полученного раствора переносили вполипропиленовые пробирки вместимостью 10 мл, прибавляли 9 мл103соответствующего буферного раствора и снова перемешивали на вортексшейкере в течение 1 мин.Количественное содержание растворившегося фосфазида проводилиметодом ВЭЖХ.Хроматографические условия:Колонка: 150 х 4,6 мм Phenomenex Luna C18 (2) 100A 5 мкм; предколонкаPhenomenex С18, 40 х 3,0 ммТемпература колонки: 30 ± 2 °СТемпература образца: 20 ± 2 °СОбъем пробы: 10 мклСкорость потока: 1 мл/минПодвижная фаза: 0,05 М раствор ацетата аммония – ацетонитрил (7 : 1)Детектор: УФ, 265 нмВремя хроматографирования: 11 мин.Время удерживания фосфазида около 3 мин.Для оценки биофармацевтической растворимости никавира в каждой изсред проводили расчет отношения дозы к растворимости (D/S), котороерассчитывали по формулам, рекомендованным ВОЗ и FDA:D/S = Dmax/S и D/S = ВРД/S, где:D/S – отношения дозы к растворимости, млDmax – максимальная дозировка ЛС, зарегистрированная в РФ кмедицинскому применениюВРД – высшая разовая доза ЛС.Растворимость ЛВ считается «высокой», если значение величины D/Sсоставляет не менее 250 мл.1.1.7.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
