Диссертация (1139727), страница 24
Текст из файла (страница 24)
ср.знач. (n=5)4010014039,5598,43142,364010014040,64101,03140,784010014040,6599,14139,054010014039,5198,29141,62S.D. (n=5)фосфазид рН 4,50,451,781,90фосфазид рН 6,80,761,541,14ламивудин рН 4,50,781,541,23ламивудин рН 6,80,741,560,98RSD,% (n=5)ε,%1,141,811,33-1,13-1,571,691,871,520,811,601,030,561,921,550,881,63-0,86-0,681,871,590,69-1,23-1,711,16Таким образом, по результатам полной валидации методики количественного определения фосфазида и ламивудина было показано, что разработанная методика может применяться для изучения кинетики растворенияпрепарата Фосфаладин 400+150 мг в трех средах растворения рН 1,2, 4,5, 6,8.2.3.
Выводы к главе 2.1. Экспериментально определена биофармацевтическая растворимостьфосфазида методом встряхивания в термостатируемом шейкере вфизиологическом диапазоне рН 1,2-6,8, которая была определенакак «высокая». Также была подтверждена стабильность фосфазида в139физиологических условиях ЖКТ в течение 24 ч. На основании экспериментальных данных по биофармацевтической растворимости илитературных по проницаемости («низкая») фосфазид был отнесен к3 классу БКС. Ламивудин на основании литературных данных былтакже отнесен к 3 классу БКС.2. Изучена сравнительная кинетика растворения инновационного препарата Никавир® (таблетки 200 мг относительно таблеток 400 мг) втрех средах растворения рН 1,2, 4,5, 6,8.
Показана эквивалентностьпрофилей исследуемых ЛС без математической оценки во всех средах растворения, что может свидетельствовать об аналогичном поведении в условиях in vivo для дополнительной дозировки препарата(400 мг).3. Изучена сравнительная кинетика растворения фиксированной комбинации фосфазида и ламивудина – Фосфаладина 400+150 мг относительно препаратов Никавир® 400 мг и Эпивир® 150 мг в трех средах растворения рН 1,2, 4,5, 6,8. Для ламивудина показана эквивалентность профилей растворения во всех средах растворения без математической оценки. Для фосфазида показана эквивалентностьпрофилей растворения без математической оценки в среде рН 1,2, инеэквивалентность в средах рН 1,2 и 4,5 на основании расчета фактора сходимости (26,61 и 24,23, соответственно). Поскольку в условиях in vivo полное высвобождение фосфазида из лекарственнойформы происходит уже в желудке (соответствует среде рН 1,2) какдля исследуемого (Фосфаладин 400+150 мг), так и для референтного(Никавир® 400 мг) препарата, можно предположить биоэквивалентность исследуемых ЛС в условиях in vivo и рекомендовать данныесерии ЛС в качестве серий-клинических кандидатов.4.
Проведен межлабораторный перенос количественного методики определения фосфазида, а также валидация разработанной методикиколичественного определения фосфазида и ламивудина методом140ВЭЖХ при совместном присутствии. Аналитический диапазон методики составил 40% - 140% от номинального содержания фосфазида и ламивудина. Было показано, что разработанная методика можетприменяться для изучения кинетики растворения препарата Фосфаладин 400+150 мг в трех средах растворения рН 1,2, 4,5, 6,8.141ГЛАВА3.ИЗУЧЕНИЕВОСПРОИЗВЕДЕННЫХНЕМЕДЛЕННОГОКИНЕТИКИРАСТВОРЕНИЯЛЕКАРСТВЕННЫХВЫСВОБОЖДЕНИЯВСРЕДСТВКАЧЕСТВЕДОПОЛНЕНИЯ К ИССЛЕДОВАНИЯМ БИОЭКВИВАЛЕНТНОСТИЗадачами настоящего этапа диссертационного исследования разработать методики и провести исследования кинетики растворения высвободившегося ЛВ для ряда отечественных и зарубежных воспроизведенных лекарственных средств немедленного высвобождения (38 препаратов) разныхклассов БКС в качестве дополнения исследования БЭ (выбор серииклинического кандидата).3.1.
Материалы и методы3.1.1. Объекты исследованияВ качестве объектов исследования были взяты оригинальные и воспроизведенные лекарственные средства немедленного высвобождения, содержащие в качестве ФС следующие вещества: абакавир/ламивудин, абиратерон, амлодипин, амлодипин/рамиприл, бетагистин, бикалутамид, бозентан,гиосцин, глибенкламид, гранисетрон, десмопрессин, ибупрофен, иматиниб,индапамид, капецитабин, левофлоксацин, левоцетиризин, леналидомид, линезолид, мелоксикам, меркаптопурин, метилдопа, невирапин, пропафенон,рисперидон, розувастатин, рокситромицин, сапроптерин, силденафил, такролимус,телмисартан,телмисартан/амлодипин,телмисар-тан/гидрохлоротиазид, темозоломид, топирамат, фексофенадин, фонтурацетам, эбастин.Среди объектов исследования в Список стратегически значимых ЛСвходят: абакавир, иматиниб, капецитабин, ламивудин, невирапин, такролимус, темозоломид.
В Перечень ЖНВЛП 2016 г. входят все исследуемые ЛС,кроме рамиприла, гиосцина, гранистетрона, левоцетиризина, мелоксикама,розувастатина, силденафила, телмисартана, фексофенадина, фонтурацетама,эбастина.142Все референтные (оригинальные) лекарственные средства были приобретены в аптечной сети г. Москва и г. Санкт-Петербург. Исследуемые воспроизведенные ЛС были либо приобретены в аптечной сети г. Москва, либобыли предоставлены компаниями-разработчиками.
Во избежание конфликтаинтересов и с учетом необходимости соблюдения соглашений о конфиденциальности с производителями лекарственных средств в настоящей главе неприводятся конкретные торговые (брендовые) наименования, фирмыпроизводители и серии исследуемых ЛС, а также никакие детальные методики из НД на исследуемые ЛС. Все лекарственные средства на момент исследования имели действующий срок годности.3.1.2.
Оборудование, реактивы, программное обеспечениеСравнительный тест кинетики растворения проводили на аппаратах Sotax AT7 Smart (Швейцария), OLPharmPro OL-1 (Россия), Agilent Technologies708-DS Dissolution Apparatus (США) и Erweka DT 800-1000LH, (Германия).Количественное определение высвободившегося ЛВ методом ВЭЖХпроводили на жидкостных хроматографах Waters Alliance 2695 с диодноматричным детектором, Waters Alliance 2795 с УФ-детектором (США) и программным обеспечением Waters Empower 2, Agilent 1260 c диодноматричнымдетектром, Agilent 1260 c рефрактометрическим детектром, Agilent 1290 Infinity I с диодноматричным УФ-детектором, Agilent 1290 Infinity II с диодноматричным УФ-детектором, Agilent Technologies (США) и программнымобеспечением OpenLAB ChemStation Edition.Количественное определение высвободившегося ЛВ методом УФспектрофотометрии проводили на УФ-спектрофотометрах Agilent Cary 50(США), Agilent Cary UV-Vis 8454 (США), Промэколаб ПЭ-5400УФ (Россия).Взятие навесок осуществляли на аналитических весах (точность до 0,1мг) OHAUS Discovery DV214C (Швейцария), A&D Company Ltd.
GR-200(Япония) и Mettler Toledo, AL 204 (Швейцария). Определение рН проводилина рН-метрах 728 рН lab, Metrohm AG (Швейцария) и Five FE20 (рН-метр) вкомплекте с электродом LE409, Mettler Toledo (Швейцария). Обработку ре-143зультатов СТКР и валидации методики проводили при помощи валидированных автоматических таблиц Microsoft Excel.В качестве вспомогательного оборудования использовали: вакуумныенасосы XF54 230 50, Millipore (Франция) и Waters, Solvent Clarification Kit(США), дозаторы пипеточные одноканальные с переменным объемом «Ленпипет» (Россия), вортекс-шейкер Reax Top, Heidolph (Германия), магнитнуюмешалку RH Basic 2 (IKA, Финляндия), систему водоподготовки Milli-QIntegral A10, Millipore (Франция).В работе использовалась мерная лабораторная посуда: мерные цилиндры вместимостью 100, 200, 500, 1000 мл, стаканы пластиковые вместимостью3000 и 5000 мл, колбы мерные класса «А» вместимостью 10, 20, 25, 50, 100,200, 250, 500, 1000 мл, пипетки аналитические класса «А» и «AS» вместимостью 0,5, 1, 2, 5, 10 мл.
Фильтрацию проб проводили через мембранныефильтры с размером пор 0,45 мкм (Agilent Captiva Premium Syringe Filter® илиCHROMAFIL®).В работе использовалась реактивы (для приготовления сред растворения, растворов стандартных образцов и подвижных фаз для ВЭЖХ): хлористоводородная кислота, лимонная кислота, аммония ацетат, натрия ацетаттригидрат, уксусная кислота ледяная, натрия гидрофосфат дигидрат, натриядигидрофосфат дигидрат, калия дигидрофосфат, калия гидрофосфат, фосфорная кислота 85%, натрия гидроксид, натрия хлорид, натрия фосфат додекагидрат, натрия лаурилсульфат, натрия гептансульфонат, диэтиламин, триэтиламин, натрия цитрат дигидрат, ацетонитрил, метанол, вода деионизированная (18,2 мОМ).Реактивы были предоставлены разными производителями и были класса чистоты не ниже «х.ч.».
Растворители для ВЭЖХ (метанол, ацетонитрил)были класса чистоты «HPLC grade».3.1.3. Стандартные образцыВсе используемые стандартные образцы были класса USP RS или EPCSR, действующих на момент проведения исследования серий, либо стан-144дартами фирмы с действующим сроком годности и содержанием АФС не менее 99,5 %.3.1.4. Нормативная документацияБиофармацевтическая классификация исследуемых ЛС проводиласьсогласно рекомендациям ВОЗ [15]. Исследование сравнительной кинетикирастворения проводили в соответствии с требованиями Руководства по экспертизе лекарственных средств, том I, 2013 г.
и том III, 2014 г., Методических Указаний Минздравсоцразвития России «Оценка биоэквивалентностилекарственных средств», приложение 4, 2008 г [10,22,23]. Исследования кинетики растворения, проведенные до 2014 г., выполнялись на 6 повторностях,после 2014 г. – на 12 повторностях.3.1.5. Приготовление сред растворенияТри среды растворения, моделирующие различные отделы ЖКТ (рН1,2, 4,5, 6,8 готовили, как описано в разделе 2.1.5). Прочие среды растворенияготовили следующим образом:0,01 М раствор хлористоводородной кислоты – по ГФ XII0,1 М фосфатный буферный раствор pH 2,0В мерную колбу вместимостью 1000 мл помещали 900 мл воды, 3,9 млфосфорной кислоты концентрированной и 6,48 г натрия дигидрофосфата однозамещенного дигидрата, перемешивали до растворения навески, объемраствора доводили водой до метки и перемешивали. Доводили рН полученного раствора до 2,0±0,05 фосфорной кислотой концентрированной.0,001 М раствор хлористоводородной кислоты рН 3,0В мерную колбу вместимостью 1000 мл вносили 500 мл воды, 10 мл0,1 М раствора хлористоводородной кислоты (ГФ XII), доводили объем раствора до 1000 мл водой очищенной и тщательно перемешивали.
Измеряли рН раствора на рН-метре, при необходимости доводили значение рН до 3,0±0,05 0,1 Мраствором хлористоводородной кислоты или 0,1 М раствором натрия гидроксида.1450,25% раствор натрия лаурилсульфата в фосфатном буферном растворе рН 4,57,5 г натрия лаурилсульфата и 23,3 г натрия дигидрофосфата растворяли в 1500 мл воды. Доводили рН раствора до 4,5±0,05 с помощью фосфорнойкислоты разведенной 10%, далее доводили объем раствора водой до 3000 мли перемешивали.Цитратный буферный раствор рН 6,6Навеску натрия цитрата дигидрата около 73,5 г помещали в мернуюколбу вместимостью 5000 мл, растворяли в около 3500 мл воды. Доводиливодой до метки и перемешивают. Проверяли рН полученного раствора, устанавливая на значение 6,6±0,05 1 М раствором хлористоводородной кислотыили 1 М раствором натрия гидроксида.3 % раствор натрия лаурилсульфата30,0 г натрия лаурилсульфата помещали в мерную колбу вместимостью1000 мл, растворяли в 700 мл воды, доводили объем раствора до метки темже растворителем и перемешивали.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
