Диссертация (1139658), страница 19
Текст из файла (страница 19)
В тожевремявкачестведополнительногогенетическогофакторарискапрогрессирования и тяжелого течения заболевания установлен гетерозиготныйгенотип при полиморфизме С-2508Т гена МСР1. Косвенным показателем,свидетельствующим о гетерозиготном генотипе полиморфного варианта T-1488Cгена IFNG, может быть низкая результативность вакцинации БЦЖ (БЦЖ-М).108Впервые была определена ассоциация полиморфизма гена IFNG (Т-1488C) сразличной выраженностью иммунного ответа против отдельных МБТ антигенов.ВпервыеустановилисвязьприразвитииТБгетерозиготногогенотипаполиморфного варианта гена с низким уровнем индуцированного цитокина.Также была определена протективная роль гомозиготного генотипа по аллелю Тпри полиморфизме гена IFNG (T-1488C) и его связь с формированиемадекватного противотуберкулезного иммунитета у детей.109ГЛАВА 6. ИССЛЕДОВАНИЕ СПЕЦИФИЧЕСКИХ БЕЛКОВПРИ ТУБЕРКУЛЕЗНОЙ ИНФЕКЦИИ У ДЕТЕЙПриоритетнойкомплексноезадачейизучениеисследованийспецифическихпоследнеговременииммунологическихявляетсямаркеровдляпонимания всех этапов развития туберкулезной инфекции [254].Однако идентификация таких потенциальных маркеров – специфическихантигенов – представляет собой непростую задачу, поскольку их количественныйи качественный составы могут существенно меняться от инфицирования дозаболевания [311].
Поэтому распознавание клетками хозяина антигенов МБТ наразных стадиях развития туберкулезной инфекции является в современныхисследованиях перспективным [211].С целью определения значимости различных туберкулезных антигенов приразвитии туберкулезной инфекции у детей и их качественной и количественнойоценке нами были проведены исследования 310 пациентов в возрасте до 18 лет.Пациенты были разделены на три группы в зависимости от разной степенивыраженности туберкулезной инфекции: 1-я – 110 детей с установленнымдиагнозом ТБ (группа «ТБ»), 2-я – 156 детей с ЛТИ (группа «ЛТИ»), 3-я – 44ребенка НТ (группа «НТ»).
Дополнительно из 1-й группы было выделено двеподгруппы: 1-я – 86 детей с первичными формами ТБ (группа «ТБ1») и 2-я – 24ребенка с вторичными формами ТБ (группа «ТБ2»). Дополнительно из 2-й группыбыло выделено две подгруппы: 1-я – 75 детей в РППТИ (группа «РППТИ») и 2-я –81 ребенок, инфицированный МБТ более года (группа «Т»). Дополнительно из 3-йгруппы было выделено две подгруппы: 1-я – 21 ребенок с ПВА (группа «ПВА») и2-я – 23 ребенка с ПТА (группа «ПТА»).Количественнуюоценкуспецифическихантигеновпроводилиприпостановке тестов in vitro иммуноферментного анализа для определенияиндуцированного ИФН- в цельной крови (после 72-часовой индукцииспецифическими антигенами ППД-Л, CFP32B, Rv2660c, ESAT6, 85а, ESAT6CFP10) по и.с.
и в пг/мл [104].1106.1. Оценка уровня ИФН-, индуцированного ППД-Л, и его значимость приразвитии туберкулезной инфекции у детейДо настоящего времени наиболее часто в качестве специфическогомитогена использовался туберкулин (ППД), который состоит из сотен различныхбелков МБТ [196; 286] (более 90%, [406]), но только в последние годы появиласьвозможность провести протеомную оценку ППД и определить его молекулярныйсостав. При этом текущий анализ состояния ППД, в дополнение к описаниюкандидатов(антигенов)следующегопоколенияППД,основанныхнаиспользовании индивидуального белка или белковых коктейлей, не позволилсделать однозначный выбор в пользу отказа от данного митогена [480]. Поэтому сцелью уточнения значимости антигена в индукции ИФН- при развитиитуберкулезной инфекции у детей ППД-Л был включен в наше исследование.Уровень продукции индуцированного ИФН- с ППД-Л (пг/мл) у детейисследуемых групп представлен в таблице 6.1.Таблица 6.1 – Уровень продукции индуцированного ИФН- с ППД-Л (пг/мл) удетей исследуемых группКритерийКритерийКритерийМанна-Уитни Манна-Уитни Манна-УитниMEQ25%:Q75%(U), р1(U), р2(U), р3U=11771;U=140;ТБ*1101885,7711,0:1297,0р<0,0001р<0,0001U=11771;U=483,5;ЛТИ*156839,1288,5:1163,0р<0,0001р<0,0001U=140;U=483,5;НТ*44108,215,6:96,5р<0,0001р<0,0001Примечание: *ТБ – группа с установленным диагнозом туберкулез; ЛТИ – группа с латентнойтуберкулезной инфекцией; НТ – группа не инфицированных МБТ.1- Различия между группой ТБ и группами ЛТИ, НТ,2- Различия между группой ЛТИ и группами ТБ, НТ,3- Различия между группой НТ и группами ТБ, ЛТИ.ГруппыИФН- с ППД-Л (пг/мл)nПо результатам исследования уровень ИФН- (пг/мл) среди детей группы«ТБ» статистически значимо отличался от показателей детей группы «ЛТИ»(р<0,0001) и «НТ» (р<0,0001) и был выше, что позволило говорить о выраженных111иммунных реакциях, характеризующих активность туберкулезной инфекции.Несмотря на определение ППД-Л во всех группах, именно количественная оценкапозволила установить разный уровень выраженности иммунного ответа взависимость от стадии туберкулезной инфекции (Критерий Краскела-УоллисаH=109,913; р=0,000).При определении и.с.
в группах «ТБ» (и.с.=27,6±3,7; Q25%:Q75% 10,9:22,7),«ЛТИ» (и.с.=12,4±1,3; Q25%:Q75% 4,2:14,6) и «НТ» (и.с.=1,8±0,5; Q25%:Q75% 0,3:1,75)также установили значимые различия (Н=112,32; р=0,000), свидетельствующие оразной степени активности туберкулезной инфекции.Сравнивая показатели (и.с.) у детей, больных ТБ, в зависимости от генезазаболевания, не установили достоверных различий (U=865; р=0,227), так, у детейгруппы «ТБ1» продукция индуцированного цитокина регистрировалась на уровне30,0±4,6 (n=86, Q25%:Q75% 12:23,7), показатель детей группы «ТБ2» был на уровне19,0±4,6 (n=24, Q25%:Q75% 7,9:20,6) (рисунок 6.1), что свидетельствовало осохранении выраженного иммунного ответа на ППД-Л как при развитиипервичных, так и вторичных форм ТБ у детей.4540уровень ИФН- Y с ППД-Л, и.с.3530252015105ТБ1ТБ2подгруппы сравнения*Средство±SE±1,96*SEРисунок 6.1 – Уровень индуцированного ИФН- с ППД-Л у детей, больныхтуберкулезом (и.с.)Примечание: *ТБ1 – группа детей с первичными формами туберкулеза; ТБ2 – группа детей свторичными формами туберкулеза112Сравнивая уровень индуцированного ИФН- с ППД-Л у детей группы«ТБ1» в фазе инфильтрации (n=57, 28,7±6,3; Q25%:Q75% 11,4:21,8) и в фазекальцинации (n=29, 32,7±5,7; Q25%:Q75% 15,1:27,7), были установлены различия(U=1056;р=0,036),чтомоглосвидетельствовать,соднойстороны,овосстановлении клеточного иммунного ответа, с другой – о сохраненииактивности инфекции.Результаты и.с.
индуцированного ИФН- с ППД-Л в группах сравненияпредставлены на рисунке 6.2 (Н=127,78; р=0,000).4035*уровень ИФН-Y с ППД-Л, и.с.302520151050-5ТБРППТИТПВАПТАСредство±SE±1,96*SEгруппы сравнения**Рисунок 6.2 – Уровень индуцированного ИФН- с ППД-Л у детей в группахсравнения (и.с.)Примечание: * р=0,000 (критерий Краскела-Уоллиса)**группы сравнения: ТБ – группа с установленным диагнозом туберкулез; РППТИ– группа детей в раннем периоде первичной туберкулезной инфекции; Т – группаинфицированных МБТ более года; ПВА – группа с поствакцинальной аллергией; ПТА – группас положительной туберкулиновой анергией.Анализ результатов в группах сравнения показал наличие статистическизначимых различий по критерию Краскела-Уоллиса, при этом данный критерийне позволил определить, между какими группами эти различия существуют, чтопотребовало проведения апостериорных (множественных) сравнений с помощьюкритерия Манна-Уитни (таблица 6.2).113Таблица 6.2 – Уровень продукции индуцированного ИФН- с ППД-Л (и.с.) удетей групп сравненияГруппыnИФН- с ППД-Л (и.с.)ME±Q25%:Q75%SEMТБ*11027,6±3,710,9:22,7РППТИ*7516,6±2,36,5:18,7Т*818,6±1,23,1:11,6ПВА*213,3±0,91,1:3,7ПТА*230,5±0,080,2:0,7КритерийМанна-Уитни(U), р1U=3010;р=0,0018U=1806,5;р<0,0001U=181,5;р<0,0001U=21,5;р<0,0001КритерийМанна-Уитни(U), р2U=3010;р=0,0018U=4231,5;р<0,0001U=200,5;р<0,0001U=33,5;р<0,0001КритерийМанна-Уитни(U), р3U=1806,5;р<0,0001U=4231,5;р<0,0001U=380;р<0,0001U=21,5;р<0,0001КритерийМанна-Уитни(U), р4U=181,5;р<0,0001U=200,5;р<0,0001U=380;р<0,0001U=409,5;р<0,0001Примечание: *ТБ – группа с установленным диагнозом туберкулез; РППТИ – группа детей враннем периоде первичной туберкулезной инфекции; Т – группа инфицированных МБТ болеегода; ПВА – группа с поствакцинальной аллергией; ПТА – группа с положительнойтуберкулиновой анергией.1- Различия между группой ТБ и группами РППТИ, Т, ПВА и ПТА,2- Различия между группой РППТИ и группами ТБ, Т, ПВА и ПТА,3- Различия между группой Т и группами ТБ, РППТИ, ПВА и ПТА,4- Различия между группой ПВА и группами ТБ, РППТИ, Т и ПТАВ группах сравнения полученные результаты индуцированного ИФН- сППД-Л (и.с.) значимо различались, отражая разную степень выраженностииммунного ответа при развитии туберкулезной инфекции у детей, так, показательсреди детей группы «ТБ» был достоверно выше (р=0,0018), чем в группе«РППТИ», у детей группы «РППТИ» показатель был выше (р<0,0001), чем вгруппе «Т», у детей группы «Т» значимо выше (р<0,0001), чем в группе «ПВА», ау детей группы «ПВА» выше (р<0,0001), чем в группе «ПТА».Учитывая референсные значения показателя уровня индуцированногоИФН- с ППД-Л (и.с.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
