Диссертация (1139658), страница 18
Текст из файла (страница 18)
Среди детей контрольнойгруппы наиболее частый гомозиготный генотип ТТ составил 56,8%, также бездостоверных различий. Частота редкого гомозиготного генотипа СС составиласреди детей основной группы 8,6%, контрольной – 6,8% (р=0,328).Полученные результаты свидетельствовали о необходимости изучениягетерозиготного генотипа полиморфного участка С-2508Т гена МСР1 для оценкиего связи с туберкулезной инфекцией у детей.
С этой целью рассмотрелираспределение генотипов в зависимости от клинической формы заболевания и еготечения (таблица 5.8).Таблица 5.8 – Распределение частот генотипов полиморфизма С-2508Т генаМСР1 среди детей подгрупп «ТБ1» и «ТБ2» (абс, %)Регистрируемый показатель«ТБ1», n=61«ТБ2», n=20абс.(%)абс.(%)ТТ29 (47,5)7 (35)ТС29 (47,5)9 (45)СС3 (5)4 (20)Критерий χ2, рOШ(95% ДИ)χ2 =0,959;р=0,164χ2 =0,039;р=0,422χ2 =4,339;р=0,0191,683(0,591-4,796)1,108(0,402-3,054)0,207(0,042-1,021)102Исходя из таблицы 5.8, среди пациентов подгруппы «ТБ1» (N=81; n=61,75,3%) распределение по генотипам (ТТ и ТС) полиморфного варианта генаМСР1 (С-2508Т) достоверно не отличалось от результатов подгруппы «ТБ2»(N=81; n=20, 24,7%).
При этом у пациентов подгруппы «ТБ1» с одинаковойчастотой регистрировали гетерозиготный генотип и гомозиготный по аллелю Т –47,5%.Средидетейподгруппы«ТБ2»чаще,чемдругиегенотипы,регистрировали гетерозиготный генотип ТС полиморфного участка С-2508Т генаМСР1 – 45%, при этом статистически незначимо (χ2 =2,85; р=0,241).Среди детей с осложненным течением заболевания, распространеннымипроцессамиисбактериовыделением(МБТ+)чащерегистрировалигетерозиготный генотип (ОШТС-ТТ=1,761; 95% ДИ 0,608-5,096 и ОШТС-СС=3,662;95% ДИ 0,969-13,84), это позволило рассматривать данный генотип какдополнительныйкритерийрискапрогрессированияитяжелоготечениязаболевания. Была рассчитана вероятность прогрессирования ТБ, котораясоставила 76,54% (95% ДИ от 66,17 до 84,51%) у детей с носительствомгетерозиготного генотипа.При оценке связи генотипа полиморфного варианта гена МСР1 (С-2508Т) свосприимчивостью к МБТ не было получено значимых различий в частотевстречаемости генотипов среди детей с ЛТИ и НТ (таблица 5.9), при этом и вгруппе «ЛТИ» и «НТ» чаще регистрировали гомозиготный генотип по аллелю Т(51,4% и 81,2% соответственно).Таблица 5.9 – Распределение частот генотипов полиморфного варианта генаМСР1 (С-2508Т) среди детей с латентной туберкулезной инфекцией и неинфицированных МБТ (абс, %)*группа «ЛТИ»,группа «НТ»,n=72n=16абс.(%)абс.(%)ТТ37(51,4)13(81,2)ТС29 (40,3)3(18,8)СС6(8,3)0Примечание: *таблица отвечает критериям КохренаРегистрируемыйпоказательКритерий χ2, рχ2 =5,056; р=0,080103Таким образом, впервые установлено, что при развитии ТБ можно выделитьдополнительный генетический показатель риска его прогрессирования и тяжелоготечения – гетерозиготный генотип при полиморфизме С-2508Т гена МСР1.5.7.
Значение полиморфного варианта гена IFNG (T-1488C) для уровняИФН- у детей исследуемых группДля проверки связи полиморфизма гена IFNG (T-1488C) с уровнемпродукции его цитокина нами проведена оценка спонтанного уровня ИФН-независимо от стадии туберкулезной инфекции. Нами было установлено, чтоуровень спонтанной продукции ИФН- не зависел от генотипа полиморфного генаIFNG (T-1488C) (H=0,039; р=0,983). В связи с этим для уточнения связи генотипаполиморфного варианта гена IFNG (T-1488C) с уровнем продукции ИФН- припрогрессировании туберкулезной инфекции и формировании заболеванияопределили уровень данного цитокина у детей с ЛТИ и с ТБ при различныхгенотипах (таблица 5.10).Таблица 5.10 – Уровень продукции спонтанного ИФН- (пг/мл) в зависимости отгенотипов полиморфного варианта T-1488C гена IFNG у детей исследуемыхгрупп, ME (Q25%:Q75%)Группы«ТБ», N=81«ЛТИ», N=72ТТn=2318,9(10,8:14,1)n=2425,5(9:16,1)генотипТСn=4233,2(9,7:13,2)n=2933,1(11,5:15)ССn=1611,6(10,5:13,2)n=1919,1(10,5:13,2)Критерий КраскелаУоллиса (H), рH = 4,810;р=0,090H = 1,663;р=0,435Как видно из таблицы 5.10, при анализе показателей спонтанного ИФН-(пг/мл) не было установлено значимых различий уровня продукции цитокина взависимости от генотипа полиморфного варианта T-1488C гена IFNG как средидетей с ЛТИ, так и при развитии ТБ.104Таким образом, по результатам наших исследований уровень продукцииспонтанного ИФН- не зависел от генотипа при полиморфизме гена IFNG (T1488C), в том числе при развитии ТБ у детей.Известно, что до развития заболевания длительное время туберкулезнаяинфекция протекает бессимптомно и ее можно выявить только с помощьюиммунологического анализа [279; 430].
При этом, учитывая генетическиефакторы и связанный с ними риск развития туберкулезной инфекции, неисключена их роль в формировании определенных фенотипов количественнойоценки иммунного ответа на туберкулезную инфекцию [230; 248; 249; 268; 455].Поэтому, учитывая отсутствие связи с генотипами при спонтанном ответе, внастоящее время представляет интерес изучение их обусловленности синтенсивностью ответа при стимуляции МБТ антигенами. С целью выявлениявлияния генотипов полиморфного варианта Т-1488C гена IFNG на уровеньпродукции ИФН- после стимуляции специфическими антигенами (CFP32B,Rv2660c, ESAT6, Ag85a, ESAT6-CFP10) и туберкулиновую реактивность приразвитии заболевания провели оценку показателей (уровня индуцированногоИФН-) у детей при развитии ТБ в зависимости от генотипов (таблица 5.11).Таблица5.11–УровеньпродукциииндуцированногоИФН-(пг/мл)специфическими антигенами в зависимости от генотипов полиморфного вариантаT-1488C гена IFNG при туберкулезе, ME (Q25%:Q75%)Специфическиеантигеныгруппа «ТБ», N=81генотипТС,n=42ТТ и СС,n=39ППД-Л1001,6 (698:1200)1380,7 (741,5:1294,5)CFP32B69,8 (10,2:68)95,8 (21:122,5)Rv2660c102,6 (12,2:83)149,6 (37,5:195,5)101,5 (10,9:57,4)112,8 (26:173)65 (0,2:40)90,3 (6,5:101)440,4 (139:761)549,5 (187:1133)ESAT685аESAT6-CFP10Критерий МаннаУитни (U), рU=703,5;р=0,275U=554,5;р=0,018U=513;р=0,006U=523,5;р=0,005U=549,5;р=0,016U=768;р=0,630105Анализ результатов исследования, представленный в таблице 5.11, показал,что при развитии туберкулеза определена связь между генотипом полиморфноговарианта гена IFNG (T-1488C) и уровнем индуцированного ИФН-.
Притуберкулезе уровень индуцированного ИФН- (при индукции специфическимиантигенами CFP32B, Rv2660c, ESAT6, 85a) значимо снижался при гетерозиготномгенотипе полиморфного варианта T-1488C гена IFNG. Учитывая полученныерезультаты для уточнения связи гетерозиготного генотипа исследуемогополиморфизма с выраженностью иммунного ответа, проанализировали частотувстречаемостиотрицательногорезультатавтестахпристимуляцииспецифическими антигенами у детей, больных ТБ (таблица 5.12).Таблица 5.12 – Связь генотипов полиморфного варианта гена IFNG (T-1488C) свыраженностью иммунного ответа на специфические антигены у детей, больныхтуберкулезомОпределениеиндуцированногоуровня ИФН-γ,отрицательныйрезультат по и.с.ППД-ЛESAT6-CFP10ESAT6Rv2660cCFP32B85aПолиморфизм T-1488C гена IFNGГенотип ТС, n=42Генотип ТТ и СС, n=39абс.%абс.%38403734347,11995,288,1818113243019192,67,761,576,948,748,7рОШ95%ДИ0,2020,0680,00010,0920,00120,00122,9232,82412,52,224,4744,4740,291-29,350,691-11,532,628-59,470,672-7,331,656-12,081,656-12,08Анализ таблицы 5.12 показал наличие ассоциации гетерозиготного генотипаполиморфного варианта гена IFNG (T-1488C) со снижением иммунного ответапри индукции специфическими антигенами.Проведенный кластерный анализ показателей у детей, больных ТБ и с ЛТИ,позволил в зависимости от генотипов полиморфного варианта T-1488C гена IFNGи уровня продукции ИФН- (по и.с.) выделить 3 группы (кластера) (рисунок 5.3).1065стандартизованные показатели43210-1-2-312345678Кластер 1Кластер 2Кластер 3признаки*Рисунок 5.3 – Кластерный анализ по стандартизованным показателям уровняИФН- индуцированного специфическими антигенами (и.с.) в зависимости отгенотипов полиморфного варианта гена IFNG (T-1488C) у детей групп «ТБ» и«ЛТИ»Примечание: *1- группы (ТБ-3; ЛТИ-2); 2 - ИФН- с ППД-Л, и.с.; 3 - ИФН- с CFP32B, и.с.; 4 ИФН- с Rv2660c , и.с.; 5 - ИФН- с ESAT6, и.с.; 6 - ИФН- с Ag85a, и.с.; 7 - ИФН- с ЕSAT6CFP10, и.с.; 8 - INFG_T(-1488)C (1-ТС, 2-ТТ, 3-СС)Первыйитретийкластерыформировалипризнаки,которыехарактеризовали ситуацию при развитии ТБ у детей.
Первый вариант был связан сгомозиготным генотипом по аллелю С полиморфного варианта гена IFNG (T1488C) и снижением уровня продукции ИФН- на стимуляцию белками раннейстадии туберкулезной инфекции (CFP32B, Rv2660c, ESAT6, 85a) при сохраненииболее выраженного ответа на гибридный белок, чем в третьем кластере. Третийвариант был связан с гетерозиготным генотипом полиморфного варианта генаIFNG (T-1488C) и снижением ответа на белки ранней стадии туберкулезнойинфекции при сохранении менее выраженного ответа на ЕSAT6-CFP10, чтопозволило говорить об ассоциации гетерозиготного генотипа с низкой продукциейцитокина и высоким риском ТБ.107Второй кластер формировали признаки, которые характеризовали ситуациюпри развитии ЛТИ, для нее было характерно наличие гомозиготного генотипа поаллелю Т полиморфного варианта гена IFNG (T-1488C) и высокого уровняпродукции ИФН- на стимуляцию белками ранней стадии туберкулезнойинфекции при низком ответе на гибридный белок, что подтверждалопротективную роль генотипа ТТ при полиморфизме гена IFNG (T-1488C), авыраженныереакциинаспецифическиеантигенысвидетельствовалиоформировании адекватного противотуберкулезного иммунитета.Дисперсионный анализ показал значимый вклад следующих признаков приразвитии туберкулезной инфекции: генотипов полимофного гена IFNG (T-1488C)(F=77,874; р=0,000000), туберкулина (F=73,445; р=0,000000) и белков раннейстадии туберкулезной инфекции – Rv2660c (F=102,137; р=0,000000), 85a(F=69,722; р=0,000000), ESAT6 (F=46,857; р=0,000000), CFP32B (F=24,065;р=0,000000); менее значимым был гибридный белок ЕSAT6-CFP10 (F=3,676;р=0,028).Таким образом, нами впервые определена связь гетерозиготного генотипаприполиморфизмегенаIFNG(Т-1488C)соснижениемпродукциииндуцированного отдельными МБТ антигенами ИФН- и развитием ТБ.Резюме:Оценивая функциональную значимость полиморфных вариантов геновIFNG (T-1488C) и МСР1 (С-2508Т) в механизмах иммунологической защитыпротив микобактерий и определении предрасположенности к ТБ у детей, впервыеустановили, что маркером высокого риска развития ТБ как при первичном, так ивторичном по генезу варианту заболевания и его неблагоприятного теченияявлялся гетерозиготный генотип полиморфного варианта T-1488C гена IFNG.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
