Диссертация (1139510), страница 11
Текст из файла (страница 11)
У пациентов для проведения лабораторныхисследований брали два вида материала: соскоб с использованием буккальноготампона, цельная кровь в пробирку с ЭДТА. Образцы цельной кровизамораживали и хранили при температуре -30°С до проведения анализа. Напервом этапе работы проводилось выделение из образцов цельной кровигеномной ДНК с помощью набора реагентов «ArrowBlood DNA 500» (настанции NorDiagArrow).Постановка полимеразной цепной реакции проводилась на прибореVeritiDx96-WellThermal Cyclerсогласнопротоколампроизводителякомпонентов реакционной смеси (мастер-микса, праймеров) с учетом ихкорректировки для получения достоверных и последовательных результатов (втом числе с дальнейшим проведением горизонтального электрофореза длявизуализации продуктов).
Праймеры для 5-HTTLPR, STin2, 3’-VNTR былиподобраны с помощью программы «Primer-BLAST» (Таблица 2). Детекцияпродуктов реакции амплификации проводилась на генетическом анализатореApplied Biosystems3500xl.Результатыанализировалисьспомощьюспециализированного программного обеспечения для фрагментного анализаGeneMapper 5.0.60Таблица 2. Праймеры, использованные в исследованииПолиморфизмПоследовательность праймеров5-HTTLPRForwardReverseSTin2ForwardReverse3’-VNTRForwardReverseДляTCCTCCGCTTTGGCGCCTCTTCCTGGGGGTTGCAGGGGAGATCCTGGTCAGTATCACAGGCTGCGAGTCATGTTCCTAGTCTTACGCCAGTGTGTGGTGTAGGGAACGGCCTGAGCTTCCTGGAGGTCACGGCTCAAGGсистемыбиотрансформацииигликопротеина Рпостановкаполимеразной цепной реакции проводилась в режиме реального времени наамплификаторе CFX-96 (BIO-RAD) с использованием наборов реагентов длягенотипирования SNPs TaqMan по 11 точкам (C_27102425_10; C_27102414_10;C_27102431_D0;C_27861809_10;C_11484460_40;C_7586657_20;C_11711720D_40).
РезультатыC_34816116_20;C_25986767_70;C_7586662_10;C_11711720C_30;анализировались с помощью программногообеспечения по двум каналам VIC и FAM.Результаты анализа генетической структуры представлены в Таблицах 38 Распределение частот аллелей и генотипов по изучаемым маркерамсоответствовало равновесию Харди-Вайнберга (р>0,05) для европеоиднойпопуляции [152, 210]. Таким образом, представленная выборка быларепрезентативна по изучаемому параметру – частотам генотипов и аллелей.Таблица 3. Распределение генотипов по маркерам 5-HTTLPR, STin2 генаSLC6A4, 3’-VNTR гена SLC6A3 (n=188)Генотипы по полиморфному маркеру 5-HTTLPRLLLSSS0,410,390,20Генотипы по полиморфному маркеру STin2LLLSSS0,360,510,13Генотипы по полиморфному маркеру 3’-VNTR10/109/109/90,630,280,9Частота S-аллеля0,40Частота S-аллеля0,39Частота аллеля с 9повторами0,2361Таблица 4.
Частота аллельных вариантов CYP2D6 среди больных сдепрессивными расстройствами (n=98)Частота висследовании0,500,260,230,030,05Аллель*1*2*4*10*41Распространенность среди европеоидов[Hicks JK et al, 2013]0,520,270,180,030,09Таблица 5. Распределение генотипов CYP2D6среди больных с депрессивными расстройствамиГенотип*1/*1*1/*2*1/*4%, n=9815,3%23,5%24,5%Фенотип«распространенные» метаболизаторы«распространенные» метаболизаторы«промежуточные» метаболизаторы*1/*105,1%«промежуточные» метаболизаторы*1/*414,1%«промежуточные» метаболизаторы*2/*29,2%«распространенные» метаболизаторы*2/*46,1%«промежуточные» метаболизаторы*2/*413,1%«промежуточные» метаболизаторы*4/*48,2%«медленные» метаболизаторы*4/*411,0%«промежуточные» метаболизаторыТаблица 6.
Частота аллельных вариантов CYP2C19 среди больных сдепрессивными расстройствами (n=98)Аллель*1*2*3*17Частота висследовании0,640,1700,19Распространенность средиевропеоидов [Hicks JK et al, 2013]0,630,150,00420,21Таблица 7. Распределение генотипов CYP2C19 среди больных сдепрессивными расстройствамиГенотип*1/*1*1/*2%, n=9864,3%15,3%Фенотип«распространенные» метаболизаторы«промежуточные» метаболизаторы62продолжение таблицы*1/*1716,3%«промежуточные» метаболизаторы*2/*21,0%«медленные» метаболизаторы*2/*171,0%«промежуточные» метаболизаторы*17/*172,0%«быстрые» метаболизаторыТаблица 8.
Распределение генотипов ABCB1среди больных с депрессивными расстройствамиSNPrs1045642(C3435T)rs2032582(G2677T/A)rs1128503(C1236T)%,n=98ГенотипTC46,0%GT/A48,0%TC40,8%CC22,4%GG26,5%CC30,6%TT31,6%TT25,5%TT28,6%Все больные с депрессивными расстройствами (388 больных) получалипсихофармакотерапию. Всем больным назначались антидепрессанты в видемонотерапиииликомплекснойпсихофармакологическихгрупптерапииспрепаратами(антипсихотиками,другихнормотимиками,транквилизаторами). Выбор антидепрессанта производился в соответствии ссиндромальной структурой депрессии, соматическим состоянием больного,возрастом,индивидуальнойпереносимостью.Дозаподбираласьиндивидуально, в соответствии с психическим состоянием больного ипереносимостью, с учетом терапевтических доз, рекомендованных прилечении больных с депрессивными расстройствами [23, 44, 58].Эффективность психофармакотерапии оценивалась по следующимпараметрам: клиническая динамика состояния; ответ на терапию (снижениесуммарного балла шкалы MADRS более чем на 50% от начального); уровеньдостжения ремиссии (суммарный балл MADRS менее 12).
Проводился анализскоростиразвитияэффектатерапии,оцененнойклиническимиипсихометрическими методами. Анализ безопасности психофармакотерапиипроводился путем оценки частоты развития и выраженности нежелательных63лекарственных явлений, которые регистрировались клинически (расспросбольных, наблюдения врача и медицинского персонала, данные лабораторныхи инструментальных исследований) и психометрически (шкала UKU). Дляанализа влияния прогностических факторов на эффективность терапиииспользовались показатели доли респондеров по шкалам MADRS.Для анализа полученных данных применялись методы статистическойобработки, рекомендованные для медико-биологических исследований [6, 33,34, 292]. Математическая обработка данных проводилась с помощью пакетапрограмм Statistica 8.0. Параметры выборки оценивались стандартнымиметодамиописательнойстатистикидляраспределения,отличногоотнормального.
Сравнительный анализ проводился с помощью методовнепараметрическойстатистики.Дляноминальныхпеременныхиспользовались критерий хи-квадрат с поправкой Йетса, критерий Фишера(для групп менее 5-ти человек). Сравнение количественных переменных внезависимых группах проводилось с помощью U-теста Манна-Уитни и тестаКраскела-Уоллиса.
Связь между количественными признаками оценивали спомощью коэффициента ранговой корреляции Спирмена. Силу ассоциацийоценивали в значениях показателя отношения шансов OddsRatio (OR) с 95%доверительныминтервалом.Анализвлияниянескольких независимыхпеременных на выраженность депрессии или депрессивных симптомовпроводился с использованием регрессионного анализа. Степень влиянияоценивалась с помощью стандартизированного коэффициента регрессии Beta.Анализ влияния нескольких независимых переменных на ответ на терапиюпроводили с использованием логистической регрессии. Многофакторныйанализ депрессивной симптоматики с целью определения возможностигруппирования на отдельные типы проводился с использованием факторного икластерного анализов.64ГЛАВА 3. КЛИНИКО-ПСИХОПАТОЛОГИЧЕСКАЯХАРАКТЕРИСТИКА ДЕПРЕССИВНЫХ РАССТРОЙСТВМОНОПОЛЯРНОГО ТЕЧЕНИЯ3.1.
Психопатология депрессивных расстройств монополярного теченияДепрессивныерасстройствамонополярного течениязначительноразличаются в их клинических проявлениях, ответе на терапию, взаимосвязис различными факторами риска. Современная диагностическая процедура,квалифицируяподгетерогеннуюрубрикойгруппу«большоеразличныхдепрессивноесостояний,расстройство»используеткалькуляциюсимптомов из набора некоторых, наиболее часто встречающихся и значимыхпризнаков. Такой формализованный подход приводит к тому, что под данныйдиагноз подходят 227 различных комбинаций симптомов [358].
При такомширокомспектревариацийдвапациентасдиагнозомбольшогодепрессивного расстройства могут иметь только один общий симптом.Попытки структурировать депрессивные расстройства монополярноготечения по клиническим или иным признакам не принесли значимых,применимых в клинике, результатов. Описательный подход, использованныйпри определении типологии монополярной депрессии, предлагает, поменьшей мере, 15 депрессивных подтипов, дифференциация которыхпроводиласьнаконкретныхкомбинацийпсихотическая),основевыраженностисимптомовособенностяхдебютадепрессивнойсимптоматики,(меланхолическая,заболеванияатипичная,(возрастначалазаболевания, сезонность фаз, послеродовые депрессии), особенностяхтечения (однократный эпизод, рекуррентное, хроническое течение) [135, 63,359]. Инструментальные исследования в последние годы добились весомогоуспеха в описании патогенеза депрессии, но, ни для каких клинически65определяемых депрессивных подтипов не было доказано специфических(генетических, нейровизуализационных, гормональных и пр.) характеристик.Более того существующие диагностические стандарты скорее мешаютпрогрессувбиологическихисследованияхдепрессии.Процедурафинансирования исследований требует при планировании дизайна строгогосоответствия критериев отбора пациента критериям диагностическихклассификаций [133, 231, 359].
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
