Диссертация (Разработка технологий получения рекомбинантного тимозина бета-4 человека и его аналогов)
Описание файла
Файл "Диссертация" внутри архива находится в папке "Разработка технологий получения рекомбинантного тимозина бета-4 человека и его аналогов". PDF-файл из архива "Разработка технологий получения рекомбинантного тимозина бета-4 человека и его аналогов", который расположен в категории "". Всё это находится в предмете "химия" из Аспирантура и докторантура, которые можно найти в файловом архиве РТУ МИРЭА. Не смотря на прямую связь этого архива с РТУ МИРЭА, его также можно найти и в других разделах. Архив можно найти в разделе "остальное", в предмете "диссертации и авторефераты" в общих файлах, а ещё этот архив представляет собой кандидатскую диссертацию, поэтому ещё представлен в разделе всех диссертаций на соискание учёной степени кандидата химических наук.
Просмотр PDF-файла онлайн
Текст из PDF
ОглавлениеСписок сокращений......................................................................................................................5Введение.........................................................................................................................................61. Литературный обзор...............................................................................................................91.1. Тимозины и их свойства. Тимозин бета 4 .................................................................................91.2.
Структура Тβ4 ..............................................................................................................................101.3. Способы получения Тβ4 .............................................................................................................101.4. Ацилирование белков in vivo .....................................................................................................121.5. Биологическая активность Тβ4 ................................................................................................141.5.1. Кардиопротекторные свойства Тβ4......................................................................................................141.5.2. Tβ4 стимулирует ангиогенез и неоваскуляризацию ишемизированного миокарда ........................161.5.3.
Роль Tβ4 в развитии опухолей и метастазировании ...........................................................................171.5.4. Влияние Tβ4 на восстановление кожных покровов и рост волос......................................................181.6. Обзор молекулярных механизмов, регулируемых активностью Tβ4 ...............................191.7. Cтратегия контролируемого высвобождения вещества: способ доставки Tβ4 к тканям................................................................................................................................................................231.8. Сульфоксид Tβ4 (Tβ4SO)............................................................................................................251.9.
Активные аминокислотные фрагменты в составе молекулы Tβ4 ....................................261.10. Применение Tβ4 в клинике .....................................................................................................292. Собственные исследования ..................................................................................................302.1. Материалы и методы исследований ...............................................................................302.1.1.
Оптимизация и масштабирование лабораторного метода получениярекомбинантного Tβ4 человека до пилотного производства.....................................................302.1.1.1. Материалы ...........................................................................................................................................302.1.1.2. Приготовление буферных растворов ................................................................................................312.1.1.3. Выращивание инокулята штамма ER2566/ pERTEVrsTB4 для засева ферментёра......................312.1.1.4.
Культивирование штамма-продуцента ER2566/pERTEVrsTB4 в ферментёре ...........................322.1.1.5. Разрушение биомассы ........................................................................................................................322.1.1.6. Подбор условий осаждения балластных белков из осветлённого клеточного лизата..................332.1.1.7.
Масштабирование процесса температурной обработки клеточного лизата..................................332.1.1.8. Хроматографическая очистка гибридного белка .............................................................................332.1.1.9. Подготовка телец включения TEV-протеиназы...............................................................................332.1.1.10.
Поиск оптимального соотношения фермент/субстрат протеолитического расщеплениягибридного белка .............................................................................................................................................342.1.1.11. Масштабирование реакции протеолитического расщепления гибридного белка ......................342.1.1.12.
Хроматографическое разделение дезацетилтимозина бета 4 и остаточного белка ....................342.1.1.13. Определение условий ингибирования реакции ацетилирования дезацетилтимозина бета 4 ....352.1.1.14. Масштабирование реакции ацетилирования дезацетилтимозина бета 4 и очистка продуктовреакции на ОФ ВЭЖХ.....................................................................................................................................352.1.1.15. Аналитические методы контроля ....................................................................................................352.1.2.
Разработка способов получения аналогов Tβ4 в виде конъюгатов, устойчивых кдеградации в токе крови....................................................................................................................362.1.2.1. Материалы ...........................................................................................................................................362.1.2.2. Подбор условий проведения реакции ацилирования дезацетилтимозина бета 4 ангидридомгексановой кислоты .........................................................................................................................................362.1.2.3. Масштабирование реакции ацилирования деацетилтимозина бета 4 ангидридом гексановойкислоты .............................................................................................................................................................362.1.2.4.
Очистка моногексаноилтимозина бета 4 ..........................................................................................372.1.2.5. Подбор условий проведения реакции сиалирования дезацетилтимозина бета 4..........................372.1.2.6. Масштабирование реакции сиалирования дезацетилтимозина бета 4...........................................3722.1.2.7. Очистка моносиалированного Tβ4 ....................................................................................................372.1.2.8. Подбор условий проведения реакции ПЭГилирования дезацетилтимозина бета 4......................382.1.2.9.
Масштабирование реакции ПЭГилирования дезацетилтимозина бета 4 ......................................382.1.2.10. Очистка моноПЭГилированного Tβ4..............................................................................................382.1.2.11. Определение структуры модифицированного Tβ4 ........................................................................382.1.2.12. Тестирование стабильности аналогов Tβ4 и химически синтезированного Tβ4 сиспользованием сыворотки крови..................................................................................................................392.1.2.13. Аналитические методы контроля ....................................................................................................392.1.3.
Разработка интеин-опосредованного метода получения рекомбинантного Tβ4 изацетилированного гибридного белка in vivo..................................................................................402.1.3.1. Материалы ...........................................................................................................................................402.1.3.2. Приготовление питательных сред .....................................................................................................412.1.3.3. Приготовление буферных растворов ................................................................................................412.1.3.4. Cинтез олигонуклеотидов для клонирования...................................................................................412.1.3.5.
Создание рекомбинантной плазмиды pER–Tb4–Gyr.......................................................................422.1.3.6. Создание рекомбинантной плазмиды pER –Tb4Gyr–RBS ..............................................................432.1.3.7. Создание рекомбинантных плазмид pER–Tb4GyrA–AcAla и pER–Tb4GyrA–AcSer ...................432.1.3.8. Подбор условий ацетилирования in vivo...........................................................................................442.1.3.9. Оптимизация условий культивирования штамма-продуцента E.
coli С3030/pER–Tb4GyrA–AcSer .................................................................................................................................................................442.1.3.10. Аффинная хроматография гибридного белка.................................................................................452.1.3.11. ОФ ВЭЖХ..........................................................................................................................................452.1.3.12. Аналитические методы контроля ....................................................................................................452.1.3.13. Метод отбора клонов ........................................................................................................................462.1.3.14.
Методы трансформации ...................................................................................................................462.1.4. Эффективность рекомбинантного Tβ4 в спонтанной мышиной модели хроническогодерматита .............................................................................................................................................472.1.4.1. Материалы ...........................................................................................................................................472.1.4.2. Определение эффективности рекомбинантного Tβ4 в спонтанной мышиной моделихронического дерматита..................................................................................................................................472.2.
Результаты и обсуждение ................................................................................................482.2.1. Оптимизация и масштабирование лабораторного метода получениярекомбинантного Tβ4 человека до пилотного производства.....................................................482.2.1.1. Масштабирование стадии культивирования штамма-продуцента и стадии разрушенияклеточной биомассы ........................................................................................................................................492.2.1.2.
Осаждение балластных белков из осветлённого клеточного лизата..............................................492.2.1.3. Оптимизация и масштабирование стадии анионообменной хроматографии гибридного белка.502.2.1.4. Оптимизация и масштабирование стадии протеолитического расщепления гибридного белка.512.2.1.5. Оптимизация и масштабирование стадии очистки дезацетилтимозина бета 4.............................522.2.1.6.
Оптимизация и масштабирование стадии ацетилирования дезацетилтимозина бета 4 ...............542.2.2. Разработка способов получения аналогов Tβ4 в виде конъюгатов, устойчивых кдеградации в токе крови....................................................................................................................572.2.2.1. Ацилирование дезацетилтимозина бета 4 ангидридом гексановой кислоты ................................582.2.2.2. Сиалирование дезацетилтимозина бета 4 .........................................................................................602.2.2.3. ПЭГилирование дезацетилтимозина бета 4......................................................................................622.2.2.4.
