Диссертация (1174378)
Текст из файла
ФЕДЕРАЛЬНОЕ ГОСУДАРСТВЕННОЕ БЮДЖЕТНОЕОБРАЗОВАТЕЛЬНОЕ УЧРЕЖДЕНИЕ ВЫСШЕГО ОБРАЗОВАНИЯ«РОССИЙСКИЙ НАЦИОНАЛЬНЫЙ ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКИЙМЕДИЦИНСКИЙ УНИВЕРСИТЕТ ИМЕНИ Н.И.ПИРОГОВА»МИНИСТЕРСТВА ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИНа правах рукописиБрагвадзе Белла ГелаевнаОСОБЕННОСТИ ВРОЖДЕННОГО ИММУНИТЕТА У ДЕТЕЙ СБРОНХИАЛЬНОЙ АСТМОЙ14.03.09 – Клиническая иммунология, аллергологияДиссертация на соискание ученой степеникандидата медицинских наукНаучные руководители:доктор медицинских наук,профессор Л.В. Ганковскаядоктор медицинских наук,профессор, академик РАНЛ.С. Намазова-БарановаМосква – 2018 ОглавлениеВВЕДЕНИЕ .................................................................................................................. 5Глава 1.
ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ ................................................................................ 131.1 Клинические особенности бронхиальной астмы у детей .................................. 131.2 Иммунопатогенез бронхиальной астмы. Роль врожденного иммунитета впатогенезе бронхиальной астмы ...............................................................................
201.2.1Дисфункцияэпителиальногобарьерареспираторноготрактаприбронхиальной астме ................................................................................................... 221.2.2 Двойственная роль Toll-подобных рецепторов в патогенезе бронхиальнойастмы… ....................................................................................................................... 251.2.3 Характеристика противомикробного пептида β-дефенсина-1 ........................
301.2.4 Эпителиальные цитокины IL-33 и TSLP .......................................................... 331.2.5 Роль трансформирующего фактора роста β в воспалении при бронхиальнойастме............................................................................................................................ 361.2.6 Интерферон III типа (IL-28λ), участие в патогенезе бронхиальной астмы .... 37Глава 2.
Материалы и методы ................................................................................... 432.1 Клиническая характеристика исследуемых групп ............................................. 432.2 Общая схема исследования................................................................................. 452.3 Получение биологического материала................................................................ 472.3.1 Получение лейкоцитов периферической крови ............................................... 482.4 Определение уровня экспрессии генов TLR2, TLR4, TLR9, HBD1,IL-28Bметодом ПЦР в режиме реального времени .............................................................
492.4.1 Выделение РНК из соскобов со слизистой оболочки полости носа илейкоцитов периферической крови ........................................................................... 492.4.2 Реакция обратной транскрипции (ОТ) ............................................................. 512 2.4.3 Полимеразная цепная реакция в режиме реального времени ......................... 522.5 Оценка экспрессии TLR2, TLR4 на лейкоцитах периферической кровиметодом проточной цитометрии ............................................................................... 572.6Определениецитокинов(IL-28B,IL-33,IL-4,TSLP)методомиммуноферментного анализа ....................................................................................
592.7Определениепро-ипротивоспалительныхцитокиновметодоммультиплексного иммунофлюоресцентного анализа в назальных смывах ............ 632.8 Статистическая обработка результатов .............................................................. 63Глава 3. Результаты и обсуждение ............................................................................ 643.1 Особенности экспрессия генов TLR2, TLR4, TLR9 и HBD 1 в клеткахслизистой оболочки полости носа у детей с бронхиальной астмой различнойстепени тяжести ......................................................................................................... 643.2.
Анализ экспрессии TLR2, TLR4, TLR9 в лейкоцитах детей с бронхиальнойастмой ......................................................................................................................... 713.2.1 Особенности экспрессии генов TLR2, TLR4, TLR9 в лейкоцитах у детей сбронхиальной астмой ................................................................................................. 713.2.2 Изменение экспрессии мембранных рецепторов (TLR2 и TLR4) в лейкоцитаху детей с бронхиальной астмой .................................................................................
733.3 Анализ содержания эпителиальных цитокинов IL-33 и TSLP в назальныхсмывах и сыворотке крови детей с бронхиальной астмой....................................... 763.4 Изменение спектра про- и противовоспалительных цитокинов у детей сбронхиальной астмой ................................................................................................. 803.5. Изменение экспрессии противовирусного цитокина IL-28B на уровне гена имолекулы белка у детей с бронхиальной астмой ..................................................... 86Заключение ................................................................................................................. 90ВЫВОДЫ ...................................................................................................................
983 Практические рекомендации ................................................................................... 100СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ ...................................................................................... 101СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ ........................................................................................ 1044 ВВЕДЕНИЕАктуальностьБронхиальная астма (БА) – это хроническое воспалительное заболеваниедыхательных путей, которое сопровождается обструкцией и гиперреактивностьюбронхов [25].
В настоящее время во всем мире насчитывается более 300 млнпациентов с БА [35]. Более того, БА является одним из самых распространенныххронических детских заболеваний и обуславливает значительное снижениекачества жизни пациентов и членов их семей [157].На современном этапе исследования БА сконцентрированы на изучении еепатогенеза, выделению патогенетических и клинических фенотипов БА с цельюразработки новых методов диагностики и лечения. IgE-опосредованномумеханизму формирования атопического фенотипа отводят ключевую роль впатогенезе БА [50]. При этом, в последние время особое внимание уделяютисследованию механизмов врождённого иммунитета.
Это обусловлено важнойрольюврождённогоиммунитетавразвитиихроническоговоспаления,являющегося неотъемлемым компонентом формирования БА. А также темфактом, что нарушение механизмов защиты врожденного иммунитета упациентов с БА способствуют развитию острых респираторных инфекции (ОРИ).Долгоевремярассматривалиэпителийтолькокакслизистойоболочкимеханическийбарьер,дыхательныхпутейзащищающийотнеблагоприятных факторов окружающей среды. В настоящее время ему отводятроль полноправного участника иммунных механизмов, выполняющего своюфункциюпутёмудаленияпатогеназасчётмукоцилиарногоклиренса,распознавания патогена Toll-подобными рецепторами (TLRs), секреции рядацитокинов и противомикробных пептидов [27, 59, 92, 118].Противомикробные пептиды β-дефенсины, продуцируемые эпителием,обладают бактерицидной активностью и предотвращают вторжение патогенов вслизистую оболочку респираторного тракта.
А реализация противовирусногоиммунитета клетками слизистой оболочки возможна благодаря продукции5 интерферонов (IFN), в частности IFN I и III типов. В последние годы исследуетсяроль интерлейкина 28 (IL-28B - IFN-λ3) как медиатора врождённого иммунитета впатогенезе вирусиндуцированной астмы [110].Кроме этого, эпителиальные клеткислизистой оболочки оказываютвыраженное влияние на характер активации дендритных клеток (ДК) идальнейшее формирование Th1- или Th2- типов иммунного ответа [80]. Этафункция реализуется вследствие синтеза IL-33, IL-25 и тимического стромальноголимфопоэтина (TSLP).
Эти цитокины играют важную роль в формированииаллергического типа воспаления, индуцируя продукцию иммуноглобулина Е(IgE).Болеетого,данныеэффекторныемолекулывыступаютвролихемоаттрактантов для эозинофилов и базофилов, которые непосредственновлияют на гладкомышечные и слизистые клетки респираторного тракта [110,137].
Данный процесс обуславливает развитие гиперреактивности дыхательныхпутей и хронической воспалительной реакции.Синтезэффекторныхмолекулицитокиновинициируетсяпаттернраспознающими рецепторами, среди них ключевыми рецепторамиявляются TLRs [37]. Наиболее информативным представляется изучениерецепторов TLR2, TLR4 и TLR9, т.к. они распознают широкий спектр лигандовбактериальной и вирусной природы.
Так, TLR2 распознает Pathogen-associatedmolecular pattern (PAMP) грамположительных бактерий, микоплазм и дрожжей, аTLR4 активируется при воздействии грамотрицательных бактерий, белковтеплового шока, а также аллергенов. В свою очередь, рецептор TLR9 распознаетучастки бактериальной и вирусной ДНК, обогащённые неметилированными CpG(цитозин-фосфат-гуанин)-последовательностями.рецепторактивируетсяврезультатеТакимвоздействияобразом,патогеновнеданныйтолькобактериальной, но и вирусной природы [134].Diogenes S. Ferreira с соавторами, используя иммуногистохимический метод,обнаружилигиперэкспрессиюTLR2,TLR3иTLR4наповерхностиэпителиальных клеткок слизистых оболочек дыхательных респираторного трактау пациентов с тяжелой БА [62].6 В последние годы показано, что аллергены, а также аллергены, загрязненныебактериальным липополисахаридами (ЛПС), активируют TLR2- и TLR4опосредованные механизмы, направляющие дифференцировку Т-лимфоцитов поTh2 пути [136, 156].В связи с этим комплексный подход в изучении TLRs и эффекторныхмолекул: β-дефенсина 1 (HBD1), IL-28B, про- и противовоспалительныхцитокинов, представляется реальным шагом в определении роли врожденногоиммунитета в патогенезе БА.
Характеристики
Тип файла PDF
PDF-формат наиболее широко используется для просмотра любого типа файлов на любом устройстве. В него можно сохранить документ, таблицы, презентацию, текст, чертежи, вычисления, графики и всё остальное, что можно показать на экране любого устройства. Именно его лучше всего использовать для печати.
Например, если Вам нужно распечатать чертёж из автокада, Вы сохраните чертёж на флешку, но будет ли автокад в пункте печати? А если будет, то нужная версия с нужными библиотеками? Именно для этого и нужен формат PDF - в нём точно будет показано верно вне зависимости от того, в какой программе создали PDF-файл и есть ли нужная программа для его просмотра.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
