Диссертация (1174378), страница 2
Текст из файла (страница 2)
Внедрение молекулярно-генетических методовисследованияврождённогоиммунитетапозволитнаучнообосноватьиразработать новые подходы к диагностике и терапии астмы.Исходя из этого, сформулированы цель и задачи настоящего исследования.Цель исследования:Изучитьособенностиврожденногоиммунитетаудетейбольныхбронхиальной астмой разной степени тяжести на локальном и системном уровнях.Задачи исследования:1. Провести комплексную оценку экспрессии генов распознающих рецепторов(TLR2, TLR4, TLR9) в клетках слизистой оболочки полости носа илейкоцитах периферической крови больных с бронхиальной астмой разнойстепени тяжести в сравнении с группой здоровых детей.2.
Изучить экспрессию гена HBD1 в клетках слизистой оболочки полости носау больных бронхиальной астмой.3. Провести анализ содержания IL-33 и TSLP на локальном и системномуровнях у детей с бронхиальной астмой.4. Выявитьособенностицитокиновогопрофиля,включающегопро-ипротивоспалительные цитокины, в назальных смывах у пациентов сбронхиальной астмой.5. Проанализировать изменения экспрессии противовирусного цитокина IL-28Bна уровне гена и молекулы белка.7 6. На основе разработанного подхода оценки показателей врождённогоиммунитетаопределитьмолекулярно-генетическиемаркеры,ассоциированные с бронхиальной астмой у детей.Научная новизна работыВ настоящей работе впервые проведено комплексное изучение показателейврождённого иммунитета, включая экспрессию генов распознающих рецепторов(TLR2, TLR4, TLR9) и β-дефенсина 1, IL-28. про- и противовоспалительныхцитокинов, на уровне слизистой оболочки полости носа у пациентов с БА издоровых детей.Выявлен дефект врожденного иммунитета, характеризующийся высокимуровнем экспрессии генов рецепторов TLR2, TLR4, TLR9, снижением экспрессиигена противомикробного пептида HBD1 и противовирусного цитокина IL-28B удетей с БА средней и тяжелой степени тяжести.Впервые у детей с тяжелой степенью БА в смывах из полости носа выявленоповышение уровня TSLP и IL-33, играющих важную роль в развитииаллергического воспаления.Более того, в настоящем исследовании дисбаланс факторов врождённогоиммунитета подтверждён высоким уровнем как провоспалительных (IL-1β,фактор некроза опухолей α (TNF-α), IL-6), так и противовоспалительных (IL-1ra,IL-10, IL-4) цитокинов в назальных смывах.
Выявлена прямая корреляция оттяжести БА.Впервыеиммунитетапроведенанасравнительнаялокальномиоценкасистемномпоказателейуровне.Болееврождённоговыраженныеиинформативные изменения у больных БА выявлены на локальном уровне (вслизистой оболочке полости носа).Практическая значимость работыРазработан подход для оценки врождённого иммунитета на уровне слизистойоболочки полости носа у детей с БА, основанный на определении экспрессии8 генов распознающих рецепторов (TLR2, TLR4, TLR9) и HBD1, а также оценкипро- и противовоспалительных цитокинов в назальных смывах.
Выявленныйдисбаланс показателей врождённого иммунитета в группе пациентов с БАразличной степени тяжести позволяет рекомендовать включение данного подходав комплекс клинико-лабораторных методов обследования для полученияинформации о состоянии мукозального иммунитета у детей с БА, оценкипрогноза заболевания и эффективности проводимого лечения.Обоснована информативность использования для оценки врожденногоиммунитета соскобов со слизистой оболочки полости носа.Разработанный метод позволяет прогнозировать тяжёлое и инфекционнозависимое течение БА и может быть применим для исследования врождённогоиммунитета при различных воспалительных заболеваниях дыхательных путей удетей.Основные положения, выносимые на защиту1. У детей с бронхиальной астмой на уровне слизистой оболочки полости носавыявлены нарушения врожденного иммунитета.
Выраженность нарушенийзависитотстепенитяжестизаболевания.Дисбалансмукозальногоиммунитета у детей со средней и тяжелой степенью бронхиальной астмыпроявляется снижением экспрессии гена противомикробного пептида HBD1и увеличением экспрессии генов распознающих рецепторов TLR2, TLR4,TLR9, что свидетельствует о нарушении локальных иммунных механизмовзащиты.2. В слизистой оболочке полости носа обнаружено нарушение в системецитокинов,проявляющеесязначительнымповышениемпро-ипротивовоспалительных цитокинов (IL-1, IL-8, TNF-α, IL-10, IL-4 IL-1ra) иснижением противовирусного цитокина IL-28В, что свидетельствует оразвитиихроническогопротивовирусноговоспаленияиммунитетависнижениидыхательныхпутях.локальногоЗначительноеувеличение содержания эпителиальных цитокинов IL-33 и TSLP в назальных9 смывах способствует формированию Th2 типа иммунного ответа иатопического воспаления.
Снижение регуляторного цитокина TGF-β вназальных смывах исследуемых групп с бронхиальной астмой можеткосвенно свидетельствовать о подавлении функциональной активности Treg.3. Сравнение показателей врожденного иммунитета (TLR2, TLR4, TLR9, IL28B, IL-4, IL-33, TSLP, TGF-β) на локальном и системном уровнях показало,что слизистая оболочка носа является информативным объектом длядиагностики нарушений мукозального иммунитета у больных бронхиальнойастмой.4. Выявлены иммунологически значимые маркеры врожденного иммунитета,ассоциированные с тяжелой формой бронхиальной астмы у детей: снижениеэкспрессии гена HBD1 более чем в 4 раза, увеличение экспрессии гена TLR2более чем 6,5 раз, TLR4 более чем в 2,5 раза, TLR9 более чем в 2,6 раз,увеличение содержания в назальных смывах IL-33 более чем 2,2 раза, TSLPболее чем в 2,4 раза, снижение противовирусного цитокина IL-28В более чемв 1,9 раз и регуляторного цитокина TGF-β более чем в 6,5 раз на уровнеслизистой оболочки полости носа по сравнению с группой здоровых детей.
Апробация работыОсновные положения диссертационной работы были представлены на:PediatricAllergyandAsthmaMeeting(Берлин,Германия,2015),28-мМеждународном педиатрическом конгрессе IPA (Ванкувер, Канада, 2016),конгрессах Европейской академии аллергии и клиническоӗ иммунологии EAACI(Вена, Австрия, 2016; Хельсинки, Финляндия, 2017), Всероссийской научнопрактическойстуденческойконференциисмеждународнымучастием«Медицинская весна–2016» (Москва, 2016), Международном студенческомконгрессе биомедицинских наук ISCOMS (Гронинген, Нидерланды, 2017), на XIIМеждународной Пироговкой научной конференции студентов и молодыхученных (Москва, 2017).10 Апробация диссертации была проведена на заседании кафедры иммунологиимедико-биологического факультета ФГБОУ ВО РНИМУ имени Н.И.
ПироговаМинздрава России 26 марта 2018 г. протокол № 18.Личный вклад автораАвтором были самостоятельно выполнены все этапы по подготовкедиссертации: выбор направления исследования диссертационной работы, анализ иобобщениелитературныхисточников,разработкадизайнаисследования,определение цели и задач, забор биологического материала, выделение ДНК/РНК,проведние реакции обратной транскрипции и полимеразно-цепную реакции врежиме реального времени, внесение полученной информации в специальноразработанные электронные таблицы и статистическая обработка данных споследующей интерпретацией и формулированием выводов. Автор личноучаствовал в подготовке всех публикаций по выполненной работе, в апробациирезультатов исследования, а также лично написал и оформил данную рукопись.Внедрение результатов исследованияРезультатыработывнедренывклиническуюпрактикувотделение стационарозамещающих технологий ФГАУ «НМИЦ здоровья детей»Минздрава России, а также в учебный процесс кафедры иммунологии МБФФГБОУ ВО Российского национального исследовательского медицинскогоуниверситета им.
Н.И.Пирогова Минздрава России для студентов, ординаторов иаспирантов.Получен патент “Способ оценки врождённого иммунитета у детей сбронхиальной астмой” №2618410 от 04.05.2017.ПубликацииПо теме диссертационной работы опубликовано 18 печатных работ, в томчисле 8 статей в изданиях, рекомендованных Высшей аттестационной комиссиейМинистерства образования и науки РФ.11 Объем и структура диссертацииДиссертация состоит из введения, обзора литературы, описания материалов иметодов,результатовсобственныхисследований,заключения,выводов,практических рекомендаций, списка сокращений и списка использованнойлитературы.
Работа изложена на 123 страницах и содержит 24 рисунка и 11таблиц. Список литературы включает 170 библиографических источников, в томчисле 27 отечественных и 143 зарубежных публикаций.12 Глава 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ1.1 Клинические особенности бронхиальной астмы у детейБронхиальная астма – это гетерогенное заболевание, для которогохарактернохроническоевоспалениедыхательныхпутейиналичиереспираторных симптомов (свистящие хрипы, одышка, кашель), варьирующих повремени, интенсивности и проявляющихся вместе с вариабельной обструкциейдыхательных путей [69].Хроническоевоспалениеспособствуетразвитиюгиперреактивностибронхов, что приводит к рецидивирующим эпизодам свистящих хрипов, одышкии кашля, особенно по ночам [25].
По данным эпидемиологических исследований,в последние десятилетия в мире увеличивается распространенность БА [29]. Этутенденцию продемонстрировали результаты исследования ISAAC (InternationalStudy of Asthma and Allergies in Childhood – Международное исследование астмыи аллергии у детей), по данным которого, в период с 1995 по 2010 годыраспространенность симптомов заболевания увеличилась на 42,1% [69]. В России,согласно недавнему эпидемиологическому исследованию, распространенность БАсреди взрослого населения составляет 6,9% [48]. Эти факты свидетельствуют отом, что в настоящее время БА является глобальной медико-социальнойпроблемой, что обусловливает необходимость ее всестороннего изучения.Одной из наиболее сложно решаемых проблем в педиатрической практикеявляется своевременная диагностика БА по первым эпизодам бронхиальнойобструкции, особенно у детей раннего и дошкольного возраста [4].
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
