Диссертация (1174316), страница 9
Текст из файла (страница 9)
Методы функциональной диагностики кожиПередпроцедуройХПвсемучастницамисследованияпроводилиисследование функциональных параметров кожи лица и шеи. Обследованиевключалоизмерениевлагосодержания,кислотно-щелочногоравновесия,определение содержания меланина и гемоглобина, себуметрию и эластометриюкожи (рисунок 2.3.1).51Рисунок 2.3.1 – Прибор Cutometer MPA 580 (Courage&Khazaka, Германия).Измерение функциональных параметров кожи проводилось в помещениидиагностической лаборатории кафедры косметологии ГБОУ ВО СЗГМУ им. И.И.И.И. Мечникова.
На обследование пациентки приходили без макияжа и кремов.Находились в помещении полчаса при температуре 20-21° и влажности 40-60% впокое, после чего производились замеры.2.3.1. Определение влажности кожиИзмерение влагосодержания рогового слоя эпидермиса проводилось сиспользованием прибора Corneometer CM 825 (Courage&Khazaka, Германия).Метод определения гидратации кожи основан на измерениях емкостныххарактеристик кожи на глубину до 30 мкм.
Измерительный датчик содержитметаллический проводник. Между дорожками проводника образуется слабое52переменное электрическое поле, которое проходит через кожу. При этомизмеряется сопротивление кожи. Количество воды в коже определяет еѐемкостные характеристики.
Полученные результаты измерений переводятсяпрограммным обеспечением в условные единицы. За 100% влажностьпринимается показатель, равный 120 у.е., за влажность 0% – 0 у.е.Влагосодержание кожи в каждой точке исследовали не менее трех раз.2.3.2. Исследование рН поверхности кожиКислотно-щелочное равновесие изучалось на поверхности кожи лица ишеи. Датчик для измерений представлял собой комбинированный электрод длярН-метрии с рабочей мембраной фирмы Skin-pH-Meter PH 905 (США),подключенный к Cutometer MPA 580.
Диапазон измерений датчика от 0 до 14 ед.рН.2.3.3. Измерение выраженности эритемы и пигментации кожиМексаметрию в коже проводили с использованием датчика Mexameter MX18 (Cutometer MPA 580 Courage&Khazaka, Германия). Датчик прибора излучаетволны определенных длин. Часть света поглощают находящиеся в коже пигменты(меланин и гемоглобин), отраженный свет измеряется датчиком. Учитываяразницу между поглощенным и отраженным светом, программное обеспечениеопеределяет количество меланина и гемоглобина в условных единицах. За 999у.е. принимается показатель, равный максимуму (100%) поглощения света, призначении, равном нулю, свет полностью отражается.2.3.4. Измерение салоотделенияДля исследования уровня салоотделения кожи использовали приборSebumeter MPA 580 (Courage&Khazaka, Германия).
На датчике в отверстии для53измерения находится отрезок бумажной ленты. При контакте с поверхностьюкожионпропитываетсякожнымсалом.Затемдатчикпомещаютвфотометрическую ячейку. Через пропитанную ленту пропускается свет. Системарегистрирует степень поглощения света и определяет количество себумавдиапазоне от 0 до 350 нг/см².2.3.5. Определение эластичности кожиКутометрию проводили на аппарате Cutometer MPA 580 (Courage&Khazaka,Германия). Для измерения эластичности кожи датчик прибора устанавливаетсяперпендикулярно поверхности кожи.
В процессе измерений кожа 5 развсасывается в отверстие датчика диаметром 2 мм под действием отрицательногодавления 450 мбар. С помощью оптической системы датчик определяетпоказатели эластичности кожи, программное обеспечение рисует на основеизмерений кривую эластичности [26]. При эластометрии изучены показатели R0(растяжимость, измеряется в мм), R2 (коэффициент упругости, при значении 1соответствует 100% упругости), R4 («эффект утомления», измеряется в мм), R6(коэффициент упруго-вязких свойств кожи, чем больше значение, тем большевязкость), R8 (часть растяжимости R0, измеряется в мм), F0 и F1 (измеряются вмм/с, максимальная упругость соответствует 0).2.4.
Иммуногистохимическое исследование кожиДля изучения реакции кожи в ответ на проведение ХП с ретиноевойкислотой и ХП с ретинолом проводилось ИГХ исследование с целью выявлениямаркеров пролиферации (Ki-67) и антиапоптоза (Bcl-2), а также рецепторов кэпидермальному фактору роста (EGFR) и коллагена IV типа.1-й этап: Фиксация кожи и приготовление срезов.Биоптаты кожи транспортировали из клиники в лабораторию в салфетке,пропитанной 0,9% раствором хлорида натрия, затем образцы кожи 10х10х5 мм54монтировали на криостатные блоки и подвергали заморозке в камере криостатапри температуре – 40ºС.Толщина подготовленных криостатных срезов составляла 5 мкм, плоскостьсечениялежалавертикально,срезыразмещалинапредметныестѐкла,высушивали на воздухе при комнатной температуре не менее 30 минут, затемфиксировали в течение 10 минут в абсолютном ацетоне и высушивали.Приготовленные срезы окрашивали или держали при температуре - 20ºС.2-й этап: Иммуногистохимическое исследование.Чтобы определить экспрессию клеточных маркеров, использовали методнепрямой иммуногистохимии.
Иммуногистохимическое исследование проводилиполимерным методом с использованием системы детекции Super Sensitive™ IHCDetection Systems (BioGenex). Характеристика моноклональных антител кисследуемым маркерам представлена в таблице 2.4.1.Длятогочтобынейтрализоватьнеспецифическуюпероксидазнуюактивность в клетках исследуемых образцов, срезы обрабатывали 3% растворомперекиси водорода. Затем срезы инкубировали в 10% растворе реагента PowerBlock (Bio Genex, США) на основе казеина, чтобы избежать неспецифическогоокрашивания. После процедуры блокирования неспецифических эпитопов, ксрезам были добавлены моноклональные антитела к соответствующим антигенам(таблица 2.4.1).
Контрольные варианты инкубировали в буфере без антител.Таблица 2.4.1 – Характеристика использованных моноклональных антителАнтителоПроизводительМишеньAnti-Bcl-2Dako,Дания (Denmark)Anti-Ki-67Bio Genex, СШАAnti-EGFRDako,Дания (Denmark)Белок Bcl-2,антиапоптотический факторАнтиген активнопролиферирующих клетокРецептор эпидермальногофактора ростаAnti-СolIVBio Genex, СШАКоллаген IV типа55После первой инкубации проводились отмывки в буфере в течение 10 мин.Далее срезы инкубировались с применением реактива Super Enhanser (Bio Genex,США), после – реактива Polymer-HPR (Bio Genex, США) (коньюгат спероксидазой) в течение 30 минут, по окончании производили трехкратнуюпромывку.
После этого срезы окрашивались раствором диаминобензидина изнабора (Bio Genex, США), препарат разводился в соответствии с инструкциейпроизводителя.Время окрашивания составляло 5-15 мин, далее для промыванияиспользовалась дистиллированная вода, при окрашивании ядер использовалсягематоксилин Carazzi. Коричневая окраска на фоне голубой окраски ядерхарактеризовалапрепаратыположительнуюфотографировались.экспрессиюПомаркеров.отдельностиГистологическиепроизводиласьсъемкаэпидермиса и дермы.2.5. Методы лечения2.5.1. Методика выполнения химического пилинга Yellow Peel FacialПроцедура химического пилинга проводилась косметическим средствомYellow Peel Facial (Mene&Moy System, США).
Косметическое средство имеетконсистенцию крема желтого цвета, содержит 5% ретиноевую кислоту. Составдля проведения пилинга представлен в таблице 2.5.1.Таблица 2.5.1 – Набор для проведения химического пилинга ретиноевой кислотойЭтап примененияПредпилинговая подготовкаПрепараты1. Очищающая пенка «Face&BodyCleancer». Содержит 20%гликолевую кислоту56Окончание таблицы 2.5.1Этап примененияПредпилинговая подготовка кожи вовремя процедурыПилингСредства для обработки кожи допроцедуры пилингаРасходные материалыПрепараты1. Очищающая пенка «Face&BodyCleancer» (рН 3,7), содержащая 20%гликолевую кислоту;2.
«Alfa&Beta Complex Gel» (рН 1,4),содержащий 40% гликолевуюкислоту, 5% салициловую кислоту,резорцин;3. Нейтрализатор для «Alfa&BetaComplex Gel» - «Post PeelNeutralizer». Содержитпропиленгликоль, стеариловыйспирт, третаноламин.1. Пилинг Yellow Peel Facial.Содержит 5% ретиноевую кислоту,15% азелаиновую, 5% коевую, 5%фитиновую, 5% аскорбиновуюкислоты.1. Аптечный вазелин.Салфетки из нетканого материала,веерная кисть, ватные палочки,бумажные салфетки, медицинскиеперчатки.Предпилинговая подготовка.Пациентки самостоятельно дома ежедневно два раза в день использовалидля умывания лица и шеи очищающую пенку «Face&Body Cleancer» в течение 1014 дней.
При появлении раздражения на коже было рекомендовано перейти наочищение пенкой один раз в день. После предпилинговой подготовки пациенткиприходили на процедуру ХП.Проведение процедуры:1-й день.1 этап: очищение кожи. Пенка «Face&Body Cleancer» наносится на кожулица и шеи на 4-5 минут, затем смывается водой.572 этап: осушение кожи. Кожи лица и шеи высушивается бумажнойсалфеткой.3 этап: защита кожи губ и доброкачественных новообразований. Накраснуюкаймуидоброкачественныеобразованиянаноситсявазелин,прпятствующий проникновению кислот.4 этап: предпилинговая подготовка кожи во время процедуры кожи лица. Наповерхность кожи лица, в том числе параорбитальной области, и шеи веернойкистью наносится «Alfa&Beta Complex Gel».
Сразу после этого наносилинейтрализатор «Post Peel Neutralizer». Во время нанесения кислотного растворабольшинство пациентов испытывают легкое жжение, которое проходит посленанесения нейтрализатора. После нейтрализации кожа очищается от препаратовсалфетками, смоченными в прохладной воде.5 этап: осушение кожи. Кожа лица и шеи высушивается бумажнойсалфеткой.6 этап: аппликация пилинга. На кожу лица и шеи наносится равномернымслоем пилинг и тщательно втирается с помощью ватных палочек в течение 5-7минут, в области век наносим препарат похлопывающими движениями пальцев.Пилинг находится на коже 40-60 минут. После чего смывается прохладнойпроточной водой, кожа высушивается бумажными салфетками, и процедурананесения пилинга Yellow Peel Facial повторяется.
Через 40-60 минут послевторого нанесения проводится третья аппликация пилинга, пациентку отпускаемдомой. Дома через 3-4 часа пациентка водой удаляет остатки пилинга. Послевторой аппликации пилинга, как правило, появляется легкая гиперемия кожи лицаи шеи. При нанесении пилинга в третий раз некоторые пациенты отмечаютжжение.2-й день.1 этап: очищение кожи. Пенка «Face&Body Cleancer» наносится на кожулица и шеи на 4-5 минут, затем смывается водой.2 этап: осушение кожи. Кожи лица и шеи высушивается бумажнойсалфеткой.583 этап: защита кожи губ и доброкачественных новообразований.
Накраснуюкаймуидоброкачественныеобразованиянаноситсявазелин,прпятствующий проникновению кислот.4 этап: предпилинговая подготовка кожи во время процедуры кожи лица. Наповерхность кожи лица, в том числе параорбитальной области, и шеи веернойкистью наносится «Alfa&Beta Complex Gel».
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
