Диссертация (1155054), страница 25
Текст из файла (страница 25)
6.4, 6.5).155Таблица 6.3. Физико-химические параметры ТИА инкапсулированных эритроцитовФизико-химические параметры эритроцитовСвободныеэритроцитыУравнения аппроксимирующей кривой в зависимости lgD lg Уравнения аппроксимирующей кривой в зависимости√ - µсрy = 1,2461x 3,2557ТИА инкапсулированные эритроцитыЭри-ТИАЭри- ТИАЭри- ТИАПЭГ 1:20VCRVLBy = 1,4256x - y = 1,2089x - y = 1,2089x 3,75933,15073,1507y = -0,0935x +1,4817y = -0,097x +1,4882y = -0,1017x+ 1,4926y = -0,0985x +1,48921,4817 ±0,00045*1,10989 ±0,00011,246111,84,2267 ±0,05968,4535 ±0,11911,1648 ±0,00016,07 ±0,009921×10766,48135 ±0,2641,48821,48861,48921,114761,115061,115511,425610,63,79301,2089113,76311,2244113,74877,58617,52617,49751,16961,17261,1733эрmn̅ (мкм)Диаметр (d) (мкм)Плотность эритроцитов Р =1+1,5 (m-1) г/см3Концентрация эритроцитов в1см3 пробеКонцентрация сухого вещества в эритроците, C% =605,0 (m-1) (г/100мл)Содержание сухого веществав эритроците, (пг): C = 3,15(m-1)d3Содержание воды в эритроците, %:Cв =100-0,75 С%Инкапсулированные количества препаратов в 1 эритроцита (пг)ППМЭ (EMPI)9,07×1076,751×1077,558×107Ср.
зн. - 7,57 ± 2,0496 × 10769,454069,611369,8775209,1747 ±8,9520157,8731143,0619153,332450,1390 ±0,0438847,909547,791547,5919-13,89217,1115,0041,32594±0,0023282,372381,8921188,69762,30601,448641,456561,46853Ср. зн. - 1,45791 ± 0,0248782,690274,063166,155182,245573,643365,7691176,3784166,4797157,66742,14452,26062,3973MCVVRBCSARCB(SARCB /VRBC)(Р= 95%); ср буфер = 1,335 ; λ = 660 нм ; *- ± ∆ ̅156Таблица 6.4.
Метрологические характеристики cреднего результата некоторыхфизико-химических параметров ТИА инкапсулированных эритроцитовПоказатель физико-химическихсвойств эритроцитовПоказательпроницаемости мембран эритроцитов (ППМЭ)Метрологические характеристики среднего результатаКонтрольные эритроцитыEry-ТИА= 1,3259; SD = 0,001872 X ̅ =1,4579; SD =0,01002RSD = 0,957RSD = 0,00141Х ± ∆х = 1,3259 ± 0,00233 Х ̅±∆х ̅ = 1,4579 ± 0,02487%(P- 95%); ξ= 1,7055%(P- 95%); ξ= 0,17554 %Объём эритроцита= 81,8921; SD = 1,5366= 73,886; SD = 8,24VRBC (фл)RSD = 0,01876RSD = 0,11153Х ± ∆х = 81,8921± 1,908Х ± ∆х = 73,886 ± 5,858(P- 95%); ξ= 2,33 %(P- 95%); ξ= 27,69 %Инкапсулированные количества= 15,33; SD = 1,6344препаратов в 1 эритроците (пг)RSD = 0,1066CdпгХ ± ∆х = 15,33± 4,0575(P- 95%); ξ= 26,4587%Диаметр (d), мкм= 8,4535; SD = 0,09582= 7,5366; SD = 0,04522RSD = 0,006RSD = 0,006Х ± ∆х = 8,4535 ± 0,01133Х ± ∆х = 7,5366± 0,11226(P- 95%); ξ= 1,4072%(P- 95%); ξ= 1,4895%Содержание сухого вещества в= 209,175; SD = 7,2= 151,4225; SD = 7,5881эритроците, (пг): C = 3,15 (m- RSD = 0,03472RSD = 0,05011)d3Х ± ∆х = 209,175 ± 8,952Х ± ∆х = 151,4225 ± 18,8382(P- 95%); ξ= 4,3166%(P- 95%); ξ= 12,441%При помощи метода спектральной мутности установлен диаметр контрольных эритроцитов (d = 8,4535 ± 0,119 мкм) и ТИА инкапсулированных эритроцитов (d = 7,5366 ± 0,1123 мкм) (P=95%; ξ≤1,489) (таблица 6.3).Физико-химические параметры ТИА инкапсулированных эритроцитов демонстрируют наличие повреждений эритроцитов в процессе инкапсулирования.Содержание воды в эритроцитах при инкапсулировании уменьшается приблизительно на 3% по сравнению с изолированными эритроцитами (таблица 6.3; Приложение А, рис.11 и 12).
Показано, что в процессе инкапсулирования процентноесодержание сухого вещества увеличивается приблизительно на 3% по отношению к контрольным эритроцитам, а размер эритроцитов уменьшается. После инкапсулирования вещества (ТИА препараты) количественное содержание сухоговещества (пг) в опытном эритроците значительно меньше, чем в контрольныхэритроцитах. Такие явления могут быть в результате потери значительного количества гемоглобина из эритроцитов в процессе инкапсулирования. Получен157ные значения ППМЭ в контрольных эритроцитах составляют 1,32594 ± 0,00232(P=95%; ξ=0,1755%), а в ТИА инкапсулированных эритроцитах - 1,45791 ±0,02487 (P=95%; ξ=1,7055%), что свидетельствует об увеличении проницаемостиэритроцитарной мембраны в процессе инкапсулирования.
ЭН, инкапсулированные в модифицированной среде с ПЭГ 1:20, имеют значительно меньшую величину ППМЭ, чем инкапсулированные в немодифицированной среде, составляляющую 0,636% от среднего результата. На основе полученных результатовможно предположить гипотезу того, что ПЭГ стабилизирует и восстанавливаетэритроцитарные мембраны при загрузке ТИА в эритроциты.Полученные результаты измерения диаметра эритроцитов методом спектральной мутности и методом оптической микроскопии приблизительно совпадают, что подтверждает подлинность результатов. Следовательно, восстановление эритроцитов после загрузки ТИА препаратов приблизительно равно85,67%(показателям ППЭМ; VRBC;Cdпг;d), что является довольно хорошим показателем (литературные данный утверждают, что восстановление эритроцитовпосле загрузки составляет от 50 до 90% [148]).
Таким образом, была полученаТИА инкапсулированная эритроцитарная форма с минимальными повреждениями эритроцитов.6.1.3. Изучение устойчивости клеточных носителей к десорбции и высвобождению ТИА препаратовДля изучения устойчивости клеточных носителей к возможной десорбциии выделению ТИА в кровеносном русле были проведены следующие биофармацевтические исследования in vitro. ЭН с включенными VCR и VLB по описаннойранее методике дважды отмывали изотоническим раствором натрия хлорида, азатем инкубировали в аутологичной плазме или изотоническом буфере при 37 0Св течение 5 мин, 10 мин, 20 мин, 40 мин, 60 мин, 120 мин, 240 мин, 360 мин.
После периода каждой инкубации растворы центрифугировали при 2000 об/мин втечение 5 мин и собирали определенное количество супернатанта (8,0 мл) дляанализа. Схема пробоподготовки представлена на рис. 6.6. Содержание ТИА158препаратов в супернатанте определяли спектрофотометрически по разработанной выше методике (Глава 3).Рис. 6.6. Схема пробоподготовки для изучения характеристик высвобожденияТИАХарактеристики высвобождения VCR из инкапсулированных эритроцитовКоличественное содержание VCR определяли по разработанной аналитической методике (Глава 3, п. 3.3.2).
При высокой концентрации ТИА в анализируемой пробе, для получения более достоверного результата, пробы разбавлялиочищенной водой так, чтобы оптическая плотность разбавленного растворанаходилась в пределе 0,1 - 1,0, которая соответствует аналитическому пределуаналитического метода. Полученные результаты высвобождения VCR из инкапсулированных эритроцитов представлены в таблицах 6.5 - 6.6 (Приложение Б,таблица 5 и 6) и на рис. 6.7.Таблица 6.5.
Кинетика высвобождения VCR из различных эритроцитарных формв течение 6 ч. in vitro (% выражение)Время инкубации (t) минVCR, %*50,83 ± 0,12Общее количество высвобожденного VCRVCR: PEGVCR: PEGVCR: PEG4000 - 1:5, %*4000 - 1:10,4000- 1:20%*%*2,72 ± 0,531,63 ± 0,131,93 ± 0,38VCR: ДМСО– 2 мг/мл, %*1,93 ± 0,47159104,84 ± 0,502010,22±0,414023,67±0,496040,29±0,7412045,07±0,7524050,75±1,2436054,93±1,38*среднее знач. ± SD5,43 ± 0,138,80 ± 0,6316,65 ±0,07330,30 ±0,0837,34 ±0,1245,39 ±0,6853,33 ± 1,093,78 ± 0,096,34 ± 0,199,23 ± 0,1119,07 ± 0,5724,76 ± 0,8931,36 ± 1,2540,13 ± 1,994,04 ± 0,217,08 ± 0,2210,74 ± 0,6217,36 ± 0,6425,48 ± 0,6934,66 ± 0,8839,99 ± 1,27,30 ± 1,1912,97 ± 0,5218,93 ± 1,0125,23 ± 1,4937,68 ± 2,0947,97 ± 2,9854,24 ± 3,72Таблица 6.6.
Результаты оценки высвобождения VCR сульфата из различныхэритроцитарных форм (ЭФ) для временной точки 360 мин in vitroВид ТИАинкапсулированныхЭФVCRVCR: PEG 4000 - 1:5VCR: PEG 4000 - 1:10VCR: PEG 4000- 1:20VCR: ДМСО – 2 мг/млОбщее количество высвобождившегося VCR сульфата во временной точке 6 ч. in vitro (37 0C)% (ср. знач.)Метрологическая характеристикарезультатовn =3, f =2s2 = 1,9SD = 1,38= 54,93RSD = 0,022093Х ± ∆х = 54,93± 3,29%(P- 95%)ξ= 5,27 %n =3, f =2s2 = 1,1893SD = 1,09= 53,33RSD = 0,022083Х ± ∆х = 53,33± 2,60%(P- 95%)ξ= 5,26 %n =3, f =2s2 = 3,97SD = 1,99= 40,13RSD = 0,05148Х ± ∆х = 40,13 ± 4,74%(P- 95%)ξ= 12,27 %n =3, f =2s2 = 1,45SD = 1,2= 39,99RSD = 0,03Х ± ∆х = 39,99 ± 2,86 %(P- 95%)ξ= 7,16%n =3, f =2s2 = 13,82SD = 3,72= 54,24RSD = 0,0685Х ± ∆х = 54,24 ± 8,87%(P- 95%)ξ= 16,33%160Рис.
6.7. График зависимости высвобождения VCR сульфата из различных эритроцитарных форм in vitro (37 0С) от времениСлева- общее количество (m – ср. знач.± SD) высвобождившегося VCR сульфата (мкг); Справа- % (– ср. знач.± SD) выражение от инкапсулированного количества препарата в ЭН.Характеристики высвобождения VLB из инкапсулированных эритроцитовПолученные результаты высвобождения VLB из инкапсулированных эритроцитов представлены в таблицах 6.7 - 6.8 (Приложение Б, таблицы 7 и 8) и нарис.
6.8.Таблица 6.7. Кинетика высвобождения VLB из различных эритроцитарных формin vitro (% выражение)Время инкубации (t)минVLB%*108,30 ± 0,712015,45 ± 1,784031,34 ± 2,916049,45 ± 3,8312060,52 ± 5,0324064,80 ± 5,7136068,07 ± 6,1*среднее знач.± SDОбщее количество высвобожденного VLBVLB: PEGVLB: PEGVLB: PEG4000 - 1:104000 - 1:20400- 1:20%*%*%*6,70 ± 0,468,36 ± 0,3111,59 ± 0,3213,04 ± 0,7417,16 ± 0,5619,80 ± 0,6223,47 ± 1,0125,32± 1,4128,66 ± 1,4237,51 ± 0,5344,81 ± 2,5236,63 ± 0,8644,97 ± 0,7752,87 ± 3,1043,98 ± 1,5851,85 ± 1,5158,06 ± 2,9150,78 ± 2,1863,89 ±2,8360,75 ± 2,5660,35 ± 3,09VLB: ДМСО– 2 мг/мл%*9,59 ± 0,3016,73 ± 0,1024,42 ± 0,1032,77 ± 0,5446,19 ± 0,9456,25 ± 0,9764,50 ± 0,80Таблица 6.8.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
