Диссертация (1155054), страница 29
Текст из файла (страница 29)
Известно, что ПЭГ способствует снижению агрегации эритроцитов и обладает свойством скрывать эпитопы антигенов мембраны клеток. Также ПЭГ обеспечивает надежную защиту от воздействия экстремальных факторов окружающей среды и минимизирует повреждения клеточных мембран. ПЭГ повышаетосмотическое давление в инкубирующей среде и существенно повышает инкапсуляцию ТИА.Оптическое микроскопическое исследование показало, что процесс инкапсулирования ТИА в эритроциты не сопровождался выраженными изменениямиморфологии и физико-химических свойств ЭН. Данное исследование установило, что диаметр загруженных эритроцитов уменьшается на 1,0 -1,5 мкм, по сравнению с незагруженными. Средний d составил 7,2689 ± 0,092 мкм и 8,5525 ±0,125 мкм (Р = 95%; ξ ≤ 1,46%) для загруженных и незагруженных эритроцитовсоответственно.
При помощи метода спектральной мутности установлен диаметр контрольных эритроцитов, который составил d = 8,4535 ± 0,119 мкм и дляТИА инкапсулированных эритроцитов - d = 7,5366 ± 0,1123 мкм (Р= 95%; ξ ≤1,489%). Следовательно, восстановление эритроцитов после загрузки ТИА препаратов приблизительно равно 85,67% и является довольно хорошим показателем (по литературными данными восстановление эритроцитов после загрузкисоставляет от 50 до 90%, следовательно, максимальный процент инкапсуляциидля эритроцитов при 70% гематокрите составляет от 35 до 63% [148]). Так же врезультатах видно, что содержание воды в эритроцитах при инкапсулированииуменьшается приблизительно на 3%, по сравнению с контрольными изолирован180ными эритроцитами.
Показано, что проницаемость мембран эритроцитов(ППЭМ) в процессе инкапсулирования увеличивается. Инкапсулированниеэритроцитов приводило к повышению ППЭМ – до 1,45791 ± 0,02487, по сравнению с контрольными ЭН -1,32594 ± 0,00232 (Р = 95%; ξ ≤ 1,7055%). Установлено,что ЭН, которые инкапсулировали в модифицированной среде с ПЭГ 1:20, имеют значительно меньшую ППЭМ, чем инкапсулированные в немодифицированной среде.
При оценке механической стойкости ТИА инкапсулированных эритроцитов было установлено повышение лизиса эритроцитов после внешнего воздействия по сравнению с контрольными эритроцитами. ТИА инкапсулированные ЭН гемолизируются на 65,18% ± 5,0 в сравнении с контрольными эритроцитами, которые гемолизируются на 29,39% ± 2,44 (P = 95%; ξ ≤ 8,3) в 0,4% растворе NaCl. Также видно, что инкапсулирование эритроцитов в модифицированной среде с ПЭГ показывает небольшое повыжение устойчивости, нежели эритроциты, инкапсулированные в немодифицированной среде. Это свидетельствуето том, что ПЭГ стабилизируют и минимизируют повреждения клеточных мембран при инкапсулировании эритроцитов. Полученные результаты показывают,что высвобождение гемоглобина из ТИА инкапсулированных эритроцитов, посравнению с неинкапсулированным ЭН не велико и это подтверждает, чтонарушение целостности эритроцитов в процессе инкапсулирования минимально.В результате видно, что из ТИА инкапсулированных ЭН высвобождается гемоглобина в среднем значении: VCR – 7,39% ± 0,249, VLB – 7,36% ± 0,241, в модифицированной среде: VCR: ПЭГ4000 1:20 – 7,25% ± 0,24, VLB: ПЭГ4000 1:207,27 ± 0,117, VCR: ДМСО – 7,39 ± 0,412, VLB: ДМСО -7,26 ± 0,175, при этом вконтрольной пробе - 6,8 % ± 0,175 (P = 95%).
Относительная погрешность среднего результата (ξ) не превышала 5,6%.При хранении количественное содержание ТИА препаратов в эритроцитахизменяется: установлено, что после 3 дней хранения ЭН содержание в них ТИАв среднем составило 98,53% ± 0,32; после 7 дней - 95,96 % ± 0,52; после 14 дней 24,78% ± 3,99 (P = 95%; ξ = 16,11%) от инкапсулированной дозы. Наиболее веро181ятной причиной может быть тот факт, что при высокой степени гемолиза эритроциты теряют способность сохранять терапевтическую концентрацию ТИАпрепаратов.ОБЩИЕ ВЫВОДЫ:1.
Разработана спектрофотометрическая методика качественного и количественного определения VCR и VLB в субстанциях и лекарственных формах.2. В проведенном исследовании с применением модифицированного метода гипотонического лизиса с предварительным набуханием получены стабильныеVCR и VLB инкапсулированные эритроцитарные формы.3. Разработана методика количественного определения VCR и VLB в клеточных формах после предварительной очистки биоматериалов с помощью гельхроматографии, позволяющая стандартизовать их по содержанию действующеговещества.4. Установлено, чтоиспользование модифицированнных сред при инкапсулировании ТИА препаратов, повышает эффективность загрузки ЭН на 5-7% для АТФ,10-15% для ПЭГ-4000 и ПЭГ-400 (1:20) и на 15-20% для ДМСО.5. Изучены особенности морфологии и физико-химические свойства ЭН послезагрузки их ТИА. Установлено, что процесс инкапсулирования VCR и VLB в ЭНоказвывает незначительное изменение некоторых показателей.
ВосстановлениеЭН после загрузки составило 85,67%.6. Установлена устойчивость клеточных форм VCR и VLB при хранении. Изучена степень десорбции и кинетика высвобождения ТИА в аутологичной плазмеи изотоническом буфере в течение 6 часов.7. Определены условия сроки хранения для клеточных носителей, составляюшие – 7 суток при +4 0С; и клеточных эритроцитарных форм VCR и VLB - неболее 3 суток при +4 0С.182Практические рекомендации.
Компания «Эритех фарма» (EryTech Pharma Inc., USA) имеет интересную стратегию борьбы с раковыми заболеваниями.«Эритех фарма» развивает технологию Эрикапс (Erycaps), которая инкапсулирует терапевтические вещества внутри эритроцитов и создала препарат «Ery-ASP»,получивший одобрение от FDA и EMA.
Компания «EryDel SpA» является собственником технологии «Red Cell Loader» - полностью автоматизированногоприкроватного биомедицинского оборудования «EryDex System» для инкапсуляции эритроцитов методом гипотонического гемолиза с предварительным набуханием. Система EryDex (EDS) используется для загрузки дексаметазона натрияфосфата в аутологичные эритроциты, который вводится один раз в месяц пациенту. Эта тенденция демонстрирует, что в будущем фармацевтические компаниибудет создавать коммерческие продукты на основе эритроцитарных носителей.Поэтому методики, разработанные в данной работе, можно применить для инкапсулирования ТИА препаратов в эритроцитарные носители, что имеет огромное практическое значение для создания коммерческих препаратов VCR и VLB,осуществляющих их адресную доставку.Перспективы дальнейшей разработки темы. Представляется интересным исследовать возможности лиофилизирования ТИА инкапсулированныхэритроцитарных форм для увеличения сроков их хранения.
В перспективе возможно продление сроков их хранения после лиофильной сушки до 6 месяцев.Разработана также блок-схема аппарата автоматизированной системы для применения разработанной методики инкапсуляции ТИА препаратов в клиническойпрактике (рис. В.1.).183Рис.
В.1. Блок-схема аппарата автоматизированной системы для примененияразработанной методики инкапсуляции ТИА препаратов в клинической практике184Список использованной литературы:1.Б.И.Ткаченко.Функцииклетоккрови,Гемостаз,Регуляциякроветворения,основы транфузиология / Б.И.Ткаченко // Нормальная физиологиячеловека. – М.: Медицина, 2005.
– с. 309-345.2. Барсуков Л.И. Липосомы / Л.И. Барсуков // Соросовский образовательныйжурнал. – 1998. – № 10. – с. 2-9.3. Википедия. Эритроциты [Электронный ресурс] / Википедия. – URL:https://ru.wikipedia.org/wiki/Эритроциты. – (дата обращения:15.3.2017).4. Гистиоцитоз X / Л.А. Юсупова, Е.И. Юнусова, З.Ш. Гараева [и др.] //Практическая Медицина.
– 2014. – Т. 8. – № 84. – с. 2-5.5. Горбачёв В.И. Экстракорпоральная фармакотерапия: реалии и перспективы[Электронныйресурс]/В.И.Горбачёв,М.В.Зарубин.–URL:https://refdb.ru/look/2591162.html. – (дата обращения:10.1.2017).6. Демидов Л. Рак почки : эволюция подходов / Л. Демидов, И. Тимофеев //ВРАЧ. – 2007. – Т. 10. – с. 84-87.7.
Кленин В.И. Характеристические функции светорассеяния дисперсных систем/ Кленин В.И, Щеголев С.Ю, Лаврушин В.И. – Саратов: Сратовскииуниверситет, 1977. – 177 с.8. Микрокапсулы: перспективы использования в современной фармацевтическойпрактике [Электронный ресурс] / Э.Ф. Степанова, М.Е. Ким, К.Б. Мурзагулова [идр.].–URL:https://science-education.ru/ru/article/view?id=14927.–(датаобращения:23.3.2016).9. Направленный транспорт лекарственных препаратов: современное состояниевопроса и перспективы / А.Г. Ивонин, Е.В. Пименов, В.А. Оборин [и др.] //Известия Коми научного центра УрО РАН.
– 2012. – Т. 1. – № 9. – с. 46-55.10. Орехов А.П. Химия алкалоидов / Орехов А.П.; под ред. Р.А. Коноваловой,А.А. Коноволовой. – Москва: Издательство академии наук СССР, 1955. – 862 с.18511. От липосом семидесятых к нанобиотехнологии XXI века / Швец В.И, КаплунА.П, Краснопольскийц Ю.М [и др.] // Российские Нанотехнологии. – 2008.
– Т. 3.– № 11-12. – с. 52-66.12. Петровна Г.Т. Эритроциты млекопитающих в направленном транспортебиологически активных веществ : 03 00.13 — физиология человека и животных16.00.04 — ветеринарная фармакология и токсикология / Г.Т. Петровна. –Боровск: Ульяновского сельскохозянстве ного института, 1992. – 20 с.13. Проницаемость мембран эритроцитов у больных с инфекционной патологией/ О.И.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
