Диссертация (1155054), страница 28
Текст из файла (страница 28)
После получения ЭФ; б. После 1 недели хранения; в. После 3 недель хранения; г. После 4недель храненияИз полученных результатов видно, что хранение ТИА инкапсулированныхЭН при +4 0С в Na-фосфатном буфере является оптимальным. В дальнейшемрассматривались характеристики изменения ТИА-ЭН только при хранении в холодильнике при +4 0С. Степень гемолиза определяли методом, описанным выше.Результаты представлены в таблицах 6.18, 6.19 (Приложение А, рис.16, 17).Таблица 6.18. Степень гемолиза ТИА инкапсулированных эритроцитарных формпри хранении +4 0СЭритроцитарная формаЭритроциты (Erythrocytes)VCR-Ery-IVCR-Ery-IIVCR-Ery - IIIVCR-Ery - IVVLB-Ery_I1 нед.K(Hb)11,09631,12591,14811,10371,1481Время хранения (недели)2 нед.3 нед.K(Hb)K(Hb)1,44443,25561,72964,39261,69634,50371,74814,61111,64074,53702,21485,06674 нед.K(Hb)10,325911,796311,688912,070414,011114,7630175VLB-Ery_II1,1704VCR-PEG-4000_1:51,0185VCR-PEG-4000_1:101,0407VCR-PEG-4000_1:201,0481VCR-PEG-4000_1:501,0667VCR-PEG-4000_1:1001,1037VLB-PEG-4000_1:101,0222VLB-PEG-4000_1:201,0407VLB-PEG-400_1:201,0481VLB-PEG-4000_1:501,1074VLB-PEG-4000_1:1001,1185VCR-ATФ1,1037VLB-ATФ1,1333VCR-ДМСО1,0704VLB-ДМСО1,0593*Abs- контрольный эритроцит – 0,2702,25191,98892,00742,04072,10002,19261,99632,03332,00372,21482,23702,57042,62222,13332,15565,09634,17784,21854,46674,58894,52594,61484,74814,41114,73704,82225,38525,5635,15565,192614,544411,174111,325911,440711,729612,129612,544411,166711,525912,166712,463013,363013,985211,514811,7889Таблица 6.19.
Количественное содержание инкапсулированных ТИА после хранения при +4 0СЭритроцитарныеформыпрепаратаИнкапсулированное количество ТИА(мкг)Температура хранения +4 0СДни хранения37Найдено препаратов после хранения%%%VCR-ЭН I873,47599,11VCR-ЭН II846,86698,18VCR-ЭН III859,27795,31VCR-ЭН IV893,068VCR-ПЭГ-1:201078,86999,01VCR-ПЭГ-1:201026,90898,93VCR-ПЭГ-1:201059,13197,50VCR-ПЭГ-1:201024,6851246,90899,19VCR-ДМСО1179,73198,72VCR-ДМСО1248,66897,06VCR-ДМСО1206,786VCR-ДМСОVLB-ЭН I891,73399,29VLB-ЭН II871,72798,19VLB-ЭН III911,73895,97VLB-ЭН IV906,678VLB-ПЭГ 1:201057,17899,01VLB-ПЭГ 1:201091,37898,69VLB-ПЭГ 1:201089,11697,38VLB-ПЭГ 1:201096,5431291,73198,95VLB-ДМСО1269,17398,49VLB-ДМСО1209,15697,19VLB-ДМСО1245,867VLB-ДМСО*Количества ТИА препаратов, применяемых для инкапсулирования – 2000 мкг114%20,9929,9123,6621,3128,9923,94176Таблица 6.20.
Метрологическая характеристика среднего результата количественного содержания инкапсулированных ТИА после хранения при +4 0СМетрологическая характеристика среднего результата ( ̅ )Количественное содержание инкапсулированных ТИА в ЭН после хранения при +4 0С(%)1 д.3 д.7 д.14 д.̅ = 99,09%̅ = 98,53%̅ = 95,96%̅ = 24,80%2 =22 =s 0,02s = 0,092s 0,1859s2 = 14,49SD = 0,128SD = 0,303SD = 0,43SD = 3,81RSD = 0,00129RSD = 0,0031RSD = 0,0045RSD = 0,1535∆ ̅ =0,1344∆ ̅ = 0,32∆ = 0,45∆ ̅ = 3,99ξ = 0,14%ξ = 0,32%ξ = 0,47%ξ = 16,11%Рис.
6.15. Графическое представление изменения количественного содержанияинкапсулированных ТИА от времени хранения при +4 0СПолученные данные демонстрируют, что выдерживание ТИА инкапсулированной эритроцитарной формы при +4 0С является оптимальным условием дляхранения ЭФ-ТИА препаратов. При хранении количественное содержание ТИАпрепаратов в эритроцитах изменяется. Установлено, что после 3 дней храненияЭН, содержание ТИА в них, в среднем значении, составляет 98,54% ± 0,32; после7 дней - 95,96 % ± 0,52, а после 14 дней - 24,80% ± 3,99 (P = 95%) от инкапсулированной дозы.
Относительная погрешность среднего результата (ξ) не превышала 16,11%. На основании полученных результатов можно сделать вывод, чтоТИА инкапсулированные ЭН можно хранить при +4 0С максимум до 7 дней, безизменения их терапевтической дозы ниже 95% от инкапсулированной (таблица6.21).177Таблица 6.21. Сроки годности ЭН при различных режимах храненияВид эритроцитарной формыСвободные ЭНVCR-ЭНVCR-ПЭГ-1:20VCR-ДМСОVLB -ЭНVLB -ПЭГ-1:20VLB -ДМСОТемпература хранения, 0С441020Рекомендуемый срок храМаксимальный срок хранения,нения (дни)(дни)71017373373373373373373-ВЫВОДЫ К ГЛАВЕ 61. Физико-химические параметры ТИА инкапсулированных эритроцитов демонстрируют наличие повреждений эритроцитов в процессе инкапсулирования.
Содержание воды в эритроцитах при инкапсулировании уменьшается приблизительно на 3%, процентное содержание сухого вещества увеличивается приблизительно на 3%, а размер эритроцитов уменьшается по сравнению с контрольными эритроцитами. Такие явления могут быть в результате потери значительного количества гемоглобина из эритроцитов в процессе инкапсулирования.2. Полученные значения ППЭМ свидетельствуют об увеличении проницаемостиэритроцитарной мембраны в процессе инкапсулирования. ЭН, инкапсулированные в модифицированной среде с ПЭГ 1:20, имеют гораздо меньшие значенияППЭМ, чем инкапсулированные в немодифицированной среде. На основе вышесказанного, можно предположить гипотезу, что ПЭГ стабилизирует и восстанавливает эритроцитарные мембраны при загрузке ТИА в эритроциты.3.
Определены характеристики высвобождения инкапсулированных препаратовиз эритроцитов. В результате in vitro исследований установлено, что в течении 6ч. высвобождается VCR - 54,93 ± 3,29%, VCR: ПЭГ4000 1:5 - 53,33 ± 2,60%,VCR: PEG 4000 1:10 - 40,13 ± 4,74%, VCR: ПЭГ4000 1:20 - 39,99 ± 2,86 %, VCR:ДМСО 2 мг/мл - 54,24 ± 8,87%, VLB - 68,07% ± 14,55; VLB: PEG 4000 1:1063,89% ± 6,75; VLB: PEG 4000 1:20- 60,75% ± 6,11; VLB: PEG 400 1:20- 60,35% ±7,63; VLB: ДМСО 2 мг/мл - 64,50% ± 1,91 из ЭН.1784. Cкорость высвобождения из эритроцитарных форм, инкапсулированных в модифицированных средах ПЭГ и ДМСО значительно меньше, чем инкапсулированных в немодифицированной среде. Данные результаты, вероятно, связаны стем, что ПЭГ поддерживает осмотический градиент через эритроцитарную мембрану при высвобождении ТИА.5. Инкапсулированные ЭН демонстрируют меньшую ОРЭ, чем нормальныеэритроциты. Степень гемолиза ТИА инкапсулированных эритроцитов незначительно выше, чем неинкапсулированных эритроцитов.6.
Инкапсулирование эритроцитов в модифицированной среде с ПЭГ показываетповышение устойчивости к гемолизу нежели эритроцитов, инкапсулированных внемодифицированной среде.7. Выдерживание ТИА инкапсулированной эритроцитарной формы при +4 0Сявляется оптимальным условием для хранения ЭН-ТИА препаратов. Количественное содержание ТИА препаратов в эритроцитах практически не изменяетсяпри хранении до 7 дней, при этом терапевтическая доза не снижается ниже 95%от капсулированной.Таким образом, эффективность «загрузки» эритроцитов ТИА зависела отналичия в среде инкубации модифицирующих агентов: ПЭГ-4000, ПЭГ-400,ДМСО и АТФ.
В немодифицированной среде (при отсутствии апротонного растворителя, ПЭГ или АТФ) эффективность «загрузки» VCR и VLB в эритроцитысоставила 42,96 ± 3,946% и 44,27 ± 3,866% (P = 95%; ξ ≤ 9,184%) соответственно.Модифицирование среды ДМСО приводило к статистически значимому повышению уровня включения препаратов в клетки – до 61,07 ± 3,2102 % для VCR идо 62,43 ± 3,144 % (P = 95%; ξ ≤ 5,2636%) для VLB. Ввиду наличия у молекулVCR и VLB ионногенных групп наиболее вероятным механизмом их связыванияс эритроцитами является фиксация на клеточной мембране.
Кроме того, возможно проникновение ТИА, диссоциирующих на ионы, внутрь эритроцитов черезбелковые каналы мембраны. Известно, что молекулы ДМСО обладают амфифильностью, что позволяет им погружаться в липидную фазу биомембран, изме179нять ее стабильность и проницаемость для других соединений. Повышениеуровня насыщения эритроцитов ТИА в присутствии ДМСО, по-видимому, связано именно с этим явлением. Отсутствие достоверных различий между показателями включения VCR и VLB в эритроциты в одних и тех же условиях свидетельствовало о схожести механизмов аккумуляции препаратов эритроцитами.Модифицирование среды ПЭГ в соотношении 1:20 приводило к повышениюуровня включения препаратов в клетки – до 65,70 % для VCR и до 55,86 % дляVLB.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
