Диссертация (1154834), страница 7
Текст из файла (страница 7)
Забор крови производился натощак из локтевой вены одноразовойиглой (диаметр 0,8-1,1 мм) в одноразовый шприц объёмом 5 мл илиспециальную вакуумную систему (с ЭДТА).Исследование проводилось в день обращения, через 1, 3 и 6 мес. послеэрадикационной терапии и через месяц после назначения препаратов в фазеремиссии.2.2.2.2. Определение уровня холецистокинина и секретина.У 30 детей с ХГД и 10 детей контрольной группы проводилась оценкасодержание холецистокинина (ХЦК) и секретина иммуноферментнымметодом в крови с использованием набора реактивов фирмы PeninsulaLaboratories, Inc. (США).Концентрацию ХЦК и секретина определяли в базальных условиях ичерез 30 мин после стандартной пищевой нагрузки (150 г отварной говядиныи 250 мл несладкого чая).2.2.2.3.
Бактериологическое исследование кала.Забор образцов кала для исследования на дисбиоз кишечникапроводился согласно стандартным рекомендациям в следующие сроки: перед41проведением эрадикационной терапии, по окончании лечения, 3 и 6 мес.после эрадикационной терапии и через месяц после назначения препаратов вфазе ремиссии.Полученные результаты оценивались в соответствии с отраслевымстандартом «Протокол ведения больных. Дисбактериоз кишечника», приказ№231 от 9 июня 2003г. При интерпретации данных, нами учитывалисьследующие бактериологические критерии [178]:1) снижение количества или исчезновение бифидобактерий и/илилактобацилл;2) снижение количества или исчезновение полноценной кишечнойпалочки;3) увеличение количества гемолитической и/или лактозонегативнойкишечной палочки;4) изменение общего количества кишечной палочки;5) наличие условно-патогенной флоры (УПФ) – энтеробактерии, кокки,дрожжеподобные грибки;6) изменение количества энтерококков.Приоценкеколичественныхкритериев,помимореферентныхзначений, принимались во внимание соотношение полноценной кишечнойпалочки (не менее 75% от общего количества), лактозонегативной кишечнойпалочки – не более 10%, при отсутствии гемолизирующей кишечной палочки[178].
Избыточный рост Candida spp. свыше 1000 КОЕ/г, согласно даннымМ.А. Шевякова (2004), расценивался как кандидозный дисбиоз [200].2.2.2.4. Определение состава и количества микроорганизмов стенкитонкой кишки методом хромато-масс-спектрометрии.Для оценки состояния пристеночной микробиоты тонкой кишки у 30пациентов применялся метод газовой хроматографии - масс-спектрометрии(ГХ-МС), определяющий видоспецифичные жирные кислоты структурныхкомпонентов бактериальных клеток [138]. Метод позволяет значительнорасширитьспектропределяемыхмикроорганизмовзасчет42труднокультивируемых бактерий, грибов, вирусов; обладает высокойчувствительностьюиспецифичностью,иудобствомприменениясполучением результата в течение 2,5 часов [139].Забор материала проводился при нанесении капиллярной или венознойкрови в количестве 100 мкл.
(2-3 капли) на фильтровальную бумагу. Бумагаподсушивалась под лампой накаливания. Исследование проводилось вЦентре дисбиозов, химико-токсикологической лаборатории НД№1 в фазеобострения, через 3, 6 мес. после эрадикационной терапии и через месяцпосле назначения препаратов в фазе ремиссии.2.2.3. Инструментальные методы исследования2.2.3.1.
Эндоскопическое исследование.Эзофагогастродуоденоскопия(ЭГДС)выполняласьгибкимифиброгастроскопами фирмы Olympus GIF-P30 по традиционной методике безпремедикации и предварительной анестезии. Эндоскопическая картинаоценивалась в соответствии с Сиднейской системой [14, 15]. В ходеэндоскопического исследования проводилось взятие двух биоптатов изантрального отдела желудка и тела желудка и одного биоптата - из луковицыДПК.
Оценка биопсийного материала проводилась в фазе обострения, через 3мес. и через 6 мес.2.2.3.2. Методы гистологического исследования биоптатов.Впроцессеподготовкикморфологическомуисследованиюбиопсионый материал после забора помещался на 24 часа в 10% растворформалина, забуференный по Лилли, с последующим приготовлениемпарафиновых срезов толщиной 5 мкм. Срезы окрашивались гематоксилиноми эозином, альциановым синим и по методу Гимзе–Романовского. Оценкапрепаратов проводилась с помощью стандартной визуально – аналоговойшкалы.
Учитывались следующие морфологические признаки: степень отёкаСОЖ,фиброза,гиперсекрециислизи,наличиекровоизлиянийимикротромбозов, лимфоидных фолликулов, изучался состав клеточногоинфильтрата.43Для выявления НР использовали окраску по Гимзе–Романовскому сколичественной оценкой по методике Л.И. Аруина с соавторами (1993, 1998),где слабая степень – до 20 микробных тел в поле зрения, средняя степень –до 50 микробных тел в поле зрения и высокая степень – более 50 микробныхтел в поле зрения.2.2.3.3. Исследование кислотообразующей функции желудка.Кислотообразующаяфункцияжелудкаоцениваласьметодомтопографической интрагастральной pН-метрии с помощью ацидогастрометра«АГМ 03» фирмы (Исток-система). Замеры рН в базальную фазу секрециипроводились непрерывно в реальном масштабе времени в течение 1 часа [95].По отношению показателей рН в теле и антральном отделе желудкаопределяликислотообразующуюикислотонейтрализующуюфункциижелудка (таблица 2.2).Таблица 2.2.Критерии оценки кислотообразующей и кислотонейтрализующейфункций желудка [94]Состояние базальной кислотопродукцииПоказатели кислотностигипоацидность2,1-5,9нормоацидность1,6-2,0гиперацидность≤1,5В зависимости от величин рН антрального и фундального отделовжелудка определялось компенсированное кислотообразование (когда рНантрального отдела превышает рН тела желудка) и декомпенсированноенепрерывное кислотообразование (когда различие рН в указанных зонахпрактически отсутствовало) [95, 123].2.2.2.4.Определение Нelicobacter pylori.«Хелпил-тест».
Для проведения «Хелпил-теста» (производство ООО«Синтана-СМ») использовался биопсийный материал из антрального отделажелудка. Тест направлен на выявление уреазной активности НР по44появлению индикационного эффекта - синего пятна на жёлтом фоне припомещении биоптата на тест-билет. Уровень инфицированности НРрасценивался как высокий, если время появления синего пятна было меньше1 минуты, умеренный – если время появления составляло от 1 до 3 минут.Отсутствие индикационного эффекта после трехминутной экспозициисвидетельствовало об отрицательном результате теста.«Хелик-тест». Тест основан на определении аммиака - продуктажизнедеятельности НР, образующегося при гидролизе мочевины подвоздействием фермента уреазы.
Увеличение концентрации аммиака ввыдыхаемом воздухе определяется с помощью индикаторных трубок,заполненных селективным хемосорбентом – учитывается длина окрашенногостолбика в трубке (1мм - соответствует концентрации 0,3 мг/м3). Послеизмерения фоновой концентрации аммиака натощак, пациент принимаетдозированную порцию мочевины (500 мг) в 20 мл дистиллированной воды,прополаскивает рот водой, после чего проводится повторное измерениеконцентрации аммиака. Результат оценивается путем сравнения исходной(С1) и нагрузочной (С2) концентраций аммиака и их разности (ΔС).Диагностикахеликобактернойинфекцииосуществляласьвсоответствии со «Стандартами (протоколами) диагностики и леченияболезней органов пищеварения Министерства здравоохранения РФ, 1998г.».Отрицательный результат после эрадикационной терапии подтверждался наосновании негативных результатов трех методов исследования – «Хеликтеста», «Хелпил-теста» и идентификации возбудителя в СОЖ с помощьюгистологического метода.Для выявления фактора патогенности НР (белок CagA) определялисьАТ IgА иммунохимическим методом с хемилюминесцентной детекцией(CLIA), ИФА, ELISA.
Анализатор Immulite (Siemens AG), Германия; тестсистема EUROIMMUN, Германия.45Полученные результаты оценивались следующим образом: менее 0,8 отрицательный результат; 0,8-1,1 - сомнительный результат; более или равно1,1 - положительный результат.2.2.2.5. Ультразвуковое исследование органов брюшной полости изабрюшинного пространства.Ультразвуковое исследование (УЗИ) органов брюшной полости и забрюшинного пространства всем детям проводилось одним и тем жеквалифицированным специалистом на аппарате фирмы LOGIQ 400 пообщепринятым методикам. При выполнении исследования оценивалисьэхоструктура, эхогенность и основные размеры печени, поджелудочнойжелезы. Определялись форма, размеры, толщина стенки, однородностьсодержимого жёлчного пузыря (ЖП). Оценка двигательной функции ЖПосновывалась на эходинамическом наблюдении ритма его сокращения послеиспользованиястандартногохолекинетическогозавтрака[151]сопределением величины максимального сокращения.
При исследованиифункции ЖП фракция выброса определялась по формуле:Фракция выброса = (Объём ЖП натощак – Объём ЖП после еды)/Объём выброса ЖП натощак х 100% (D. Festi и др., 2006).Моторная функция ЖП считалась не нарушенной, если на 40-50минутах ультразвукового исследования после приёма жёлчегонного завтракамаксимальное сокращение объёма ЖП составляло 60-70% от исходного, апроцесс сокращения характеризовался равномерным уменьшением егообъёма.2.2.2.8.
Ультразвуковое исследование моторной функции желудкаМоторная функция желудка оценивалась на основании определенияскорости эвакуации содержимого из желудка (в качестве стандартногозавтрака использовали овсяную кашу, приготовленную на воде) [253]. Объёмзавтрака рассчитывался, исходя из рекомендованных объёмов порций длядетей разных возрастных групп, и составлял от 200 мл (для девочек) до 350мл (для мальчиков).46Исследование проводилось одним и тем же экспертом, при помощиаппарата фирмы LOGIQ 400, оборудованного конвексным датчиком счастотой 3,5МГц. Датчик располагали на уровне транспилорическойплоскости для одновременной визуализации антрального отдела, верхнейбрыжеечной вены и аорты, измерения антрума проводилось от внешнегоконтура стенки.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
