Диссертация (1154825), страница 8
Текст из файла (страница 8)
При этом различия в показателяхсоматическойзаболеваемости,менструальногоцикла,социально-бытовыхусловиях у женщин четырех групп были статистически не значимыми.46ГЛАВА 3. ВЛИЯНИЕ КИССПЕПТИНА НА ЭСТРАЛЬНЫЙ ЦИКЛ КРЫС:КЛИНИКО-ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНЫЕ ДАННЫЕВпроведенномэкспериментальномисследованиидлявозможностисопоставления полученных в эксперименте и в клинической практике данныхприменялся принцип аллометрии [28].3.1 Влияние блокады кисспептинергических рецепторов на эстральный циклвзрослых половозрелых самок крысВ ходе первого этапа исследования было установлено, что у всех 36животных,включенныхвисследование,эстральныйциклрегулярный,включающий 4 фазы: диэструс (стадия покоя, или межтечки); проэструс (стадияподготовки к течке, или предтечки); эструс (течка); метэструс (стадия послетечки).Длительность эстрального цикла не превышала 5 суток.Межтечка (диэструс) — покой вагинального эпителия, обусловленныйнизким уровнем эстрогенов в организме.
В стадии диэструса, составляющей около2-х суток эстрального цикла (48-51 ч), в мазке у 100,0% животных преобладалислизь и лейкоциты (Рисунок 3).Рисунок 3 — Влагалищный мазок крысы. Стадия диэструса.1 — слизь; 2 — лейкоциты. Окраска метиленовым синим. Увеличение 10х20В стадии проэструса, продолжающейся около 12 ч, мазок состоял почти из47одних эпителиальных клеток, слущенных со стенок влагалища. Он совпадал снаиболее высоким уровнем секреции эстрогенов созревающими фолликуламияичника и характеризовался гипертрофией и гиперплазией эпителиальных клетоквлагалищаипоследующимотторжениемклеток,секретирующихслизь(Рисунок 4).Рисунок 4 — Влагалищный мазок крысы.
Стадия проэструса.1 — слущенные эпителиальные клетки.Окраска метиленовым синим. Увеличение 10х20В стадии эструса (длительность около 24-27 ч) в мазке содержалисьпреимущественно чешуйки — безъядерные, ороговевшие клетки, образующиесяиз-за расслоения клеток эпителия (Рисунок 5). Этот период в норме сочетался сактивизацией полового поведения и по времени примерно совпадал с овуляцией.Рисунок 5 — Влагалищный мазок крысы. Стадия эструса.1 — безъядерные, ороговевшие клетки (чешуйки).Окраска метиленовым синим. Увеличение 10х2048В метэструс, длительность, которого у животных обеих подгрупп непревышала 6 часов и регистрировалась не у всех животных из-за периодичностиосмотров в 24 часа, происходило резкое снижение активности половых гормонов сотторжением базального слоя клеток (Рисунок 6).Рисунок 6 — Влагалищный мазок крысы.
Стадия метаэструса.1 — базальные эпителиальные клетки.Окраска метиленовым синим. Увеличение 10х20Нормальное протекание эстрального цикла у животных, включенных вэксперимент, подтверждалось и динамикой изменения ректальной температуры укрыс в период эстрального цикла. Поскольку эстрогены способствуют снижениюректальной температуры, а прогестерон — ее повышению, то в первой фазе циклаона была более низкой, а во второй повышалась.
Непосредственно перед овуляциейнаблюдали всплеск эстрогенов, что обеспечивало еще большее снижениетемпературы. Таким образом, ректальная температура при овуляции была самойнизкой на графике. Если нормальная ректальная температура у крыс составляла38,0-38,1°С, то в фазу эструса (иногда проэструса) она составляла в среднем36,9±0,2°С (Рисунок 7), что свидетельствовало о произошедшей овуляции.Выявлено было также достоверное повышение температуры в фазу диэструса (до38,8-38,9°С) по сравнению с фазой эструса, что объясняется функционирующимижелтыми телами в период диэструса.4939,53938,53837,5Ректальная температура3736,53635,5ДиэструсПроэструсЭструсМетэструсРисунок 7 — Динамика изменения базальной температурыу крыс с нормальным эстральным цикломПолученные данные у здоровых самок крыс с устойчивым эстральнымциклом представлены в Таблице 15.Таблица 15 — Кольпоцитологические индексы у крыс линии Wistar до примененияблокатора кисспептинергических рецепторов – kisspeptin-234 trifluoroacetate salt(Sigma, USA)ПоказательИСКИЭстрогеннаястимуляцияДиэструс0/0/09,6±3,6↓↓↓Проэструс0/24/7675,6±7,2↑↑Эструс0/15/8581,7±6,2↑↑↑Метэструс65/25/1025,6±5,3↓↓Для подтверждения регулярности эстрального цикла у каждого животногобыло зафиксировано не менее 3-х последовательных циклов.Таким образом, было установлено, что у всех животных как опытной, так иконтрольнойгруппотмеченнормальныйрегулярныйэстральныйцикл,совпадающий по продолжительности фаз.
Его структура представлена наРисунке 8.50МетэструсПроэструсДиэструс6ч12 ч48 чДиэструсПроэструсЭструс48 ч12 ч24-27 чОпытная группа6чМетэструсРисунок 8 — Соотношение фаз эстрального цикла у контрольной и опытнойгрупп крыс линии Wistar до применения блокатора кисспептинергическихрецепторов – kisspeptin-234 trifluoroacetate salt (Sigma, USA)После введения в носовые ходы крыс блокатора кисспептинергическихрецепторов – kisspeptin-234 trifluoroacetate salt в фазу диэструса у всех 18 животныхбыло отмечено нарушение регулярного эстрального цикла, что выражалось вудлинении фазы диэструса в 3-4 раза по сравнению с исходными значениями.Введения физиологического раствора в аналогичный период к изменениюэстрального цикла не приводило (Рисунок 9).2.1.Рисунок 9 — Влагалищный мазок крысы после введения 10 мкл (2х10-3 моль)блокатора кисспептинергических рецепторов.Пролонгированная стадия диэструса.
1 — слизь; 2 — лейкоцитыСоотношение фаз эстрального цикла контрольной и опытной групп51представлены на Рисунке 10.33Контрольнаягруппа22441115Опытная группа1. Диэструс: в контрольной группе – 48 ч (2 сут), вопытной – 144-192 ч (6-8 сут)2. Проэструс3. Эструс4. Метэструс5. Фаза смешанного клеточного составаРисунок 10 — Соотношение фаз эстрального цикла у контрольной и опытнойгрупп крыс линии после применения блокатора кисспептинергическихрецепторов – kisspeptin-234 trifluoroacetate salt (Sigma, USA)Измерение базальной температуры у крыс после применения блокаторакисспептинергических рецепторов – kisspeptin-234 trifluoroacetate salt показалоизменение характера температурной кривой, которая стала фактически монофазной(разница базальной температуры не превышала на протяжении цикла 0,2°С), чтокосвенно свидетельствовало об отсутствии овуляции у самок крыс на фоневведения блокатора кисспептинергических рецепторов (Рисунок 11).5238,53837,5РектальнаятемператураДиэструсПроэструсЭструсМетэструсРисунок 11 — Динамика базальной температуры крысна фоне введения блокатора кисспептинергических рецепторовКроме этого, отмечено появление во влагалищных мазках крыс послепролонгированной фазы диэструса смешанной цитологической картины (на 8-9-йдень после введения блокатора кисспептинергических рецепторов – kisspeptin-234trifluoroacetate salt), что выражалось в одновременном появлении клеточныхэлементов, характерных для различных фаз эстрального цикла при наличиибольшого количества слизи (Рисунок 12).Рисунок 12 — Влагалищный мазок крысы на 9-й день после введения блокаторакисспептинергических рецепторов.
1 - промежуточные клетки; 2 - базальныеклетки; 3 - эпителиальные клетки; 4 - «чешуйки».Окраска метиленовым синим. Увеличение 10х20Расчет индексов кольпоцитограммы показал, что после блокады рецепторов53к кисспептину происходило нарушение уровня эстрогенной стимуляции ворганизме самок крыс, что подтверждало роль кисспептина в регуляцииэстрального цикла (Таблица 16).Таблица 16 — Кольпоцитологические индексы у крыс линии Wistar послеприменения блокатора кисспептинергических рецепторов – kisspeptin-234trifluoroacetate salt (Sigma, USA)ПоказательИССлизьКИЭстрогеннаястимуляцияДиэструс (пролонгированный), днинаблюдения после введения блокаторакисспептинергических рецепторов1-й3-й5-й7-й0/0/00/0/00/0/00/0/0++++++++++↓↓↓↓↓↓↓↓↓↓↓↓Смешаннаяцитологическаякартина9-й11-й30/34/36 10/23/67+++15,6±3,3 55,7±3,9↓↓↑Дальнейшее наблюдение за животными из опытной группы на протяжении10днейпоказалопостепеннуюнормализациюцитологическойкартинысодержимого влагалища и восстановление обычного эстрального цикла, чтообъяснялось, на наш взгляд, физиологическим ресинтезом кисспептинергическихрецепторов и восстановлением регуляции эстрального цикла со стороныкисспептина.Таким образом, на основании полученных данных можно говорить о том, чтоблокада кисспептинергических рецепторов приводит к длительному нарушениюэстрального цикла, заключающемуся в исчезновении фазы овуляции и сниженииэстрогенной стимуляции в организме крыс.3.2 Роль кисспептина в нормализации эстрального циклавзрослых половозрелых самок крысНа 5-е сутки 18 (1-я группа) из 36 крыс внутрь носового хода вводили 10 мклраствора kisspeptin-234 (2х10-2 Моль), а 18 (2-я группа) животным аналогичныйобъем 0,9% раствора NaCl.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
