Диссертация (1154715), страница 9
Текст из файла (страница 9)
Клинико-анамнестический метод и объективное исследованиеС целью установления анамнеза жизни и заболевания проводился расспросродителей, законных представителей или ближайших родственников ребенка,анализировалась медицинская документация детей с результатами обследования вдругих медицинских учреждениях до поступления под наше наблюдение,амбулаторные карты детей, 115 историй болезни во время нахождения детей встационаре, из них 36 историй болезни повторных госпитализаций. При сборегенеалогического анамнеза уточнялись заболевания родственников первой ивторой степеней родства. При сборе анамнеза учитывались сведения, полученныепри расспросе родителей или ближайших родственников ребенка, а также данные,имевшиеся в медицинской документации (амбулаторные карты детей, выписки изистории болезни).Объективное исследование пациентов проводилось по стандартной схеме ивключало общепринятые методы обследования: осмотр, пальпацию, перкуссию,аускультацию.
У всех детей оценивались антропометрические данные, у детейстарше двух лет рассчитывался индекс массы тела (ИМТ = вес (кг): рост (м2))50[220]. Показатели ИМТ оценивались согласно классификация ожирения по ИМТ(табл. 2.10).Таблица 2.10Классификация ожирения согласно индексу массы тела [161]Типы массы телаИМТ (кг/м2)Дефицит массы тела< 18,5Нормальная масса тела18,5-24,9Избыточная масса тела(предожирение)25,0-29,9Ожирение I30,0-34,9Ожирение II35,0-39,9Ожирение III>40Наблюдавшиеся дети консультировались специалистами: эндокринологом,аллергологом-иммунологом, пульмонологом, по показаниям – неврологом,окулистом.2.2.4. Лабораторно-инструментальные исследованияОбщеклиническиелабораторныеисследованиявключалиобщийклинический и биохимический анализы крови.Уровни глюкозы измеряли в цельной капиллярной крови, взятой из пальца(лабораторными методами или с помощью глюкометра) либо в цельной крови илиплазме крови из вены (лабораторными методами).
Всем пациентам со стажнымСД1 проводилось определение уровня HbA1c хроматографическим методом сиспользованиеммикроколоноквбиохимическойлабораторииЭндокринологического Диспансера Департамента Здравоохранения Москвы, а с2009 г. рефлектометром «NycoCard» (Axis-Shield, Норвегия) в биохимическойлаборатории МДГКБ.51Исследование газов крови и кислотно-основного состояния включалоопределение уровней парциального напряжения кислорода (PaO2), парциальногонапряжения углекислого газа (PaCO2), рН, дефицита буферных оснований, калия,натрия, кальция, лактата, гематокрита в капиллярной крови с помощью газовогоанализатора«GEM Premier 3000» (Instrumentation Laboratory, США). Кетонемияоценивалась с помощью прибора «Optium» (ABBOTT Diabetes Care, США).Данные исследования выполнены в клинической и биохимической лабораторияхМДГКБ (зав.
лабораторией – А.В. Буллих).Всем пациентам с БА проводились аллергологические исследования,включавшиеопределениеконцентрациивсывороткекровиобщегоиспецифических IgE к основным классам аллергенов (панель из 80 аллергенов,включающая бытовые, пищевые, пыльцевые, грибковые и бактериальныеаллергены): методом иммуноферментного анализа (ИФА) – у 55 больных, кожныескарификационные тесты – у 24 больных. Определение уровня общего IgEпроведено 64 пациентам основной группы, 44 пациентам группы сравнения с БА.Оценка уровня общего IgE проводилась согласно референтным значениям повозрастам (табл. 2.11) [41].Таблица 2.11Содержание общего IgE в сыворотке крови здоровых [41]Возрастная группаНоворожденные3-6 месяцев1 год5 лет10 летВзрослыеСодержание IgE, кЕ/л0-23-108-2010-5015-6020-100Уровень специфических IgE-антител выражали в степенях реакции отнулевого (отсутствие антител) до четвертого (максимальный уровень), в качествеположительных учитывали значения второго – четвертого классов [41].
Реакциикожных скарификационных тестов оценивали в зависимости от кожной реакциикакотрицательная(-),52сомнительная(+/-),слабоположительная(+),положительная (++), резко положительная (+++), очень резко положительная(++++) [2]. Данные исследования были проведены в лаборатории клиническойиммунологии кафедры клинической аллергологии и иммунологии Московскогогосударственного медико-стоматологического университета им.
А.И. Евдокимована базе Городской клинической больницы им. Е.О. Мухина Департаментаздравоохранения города Москвы (зав. кафедрой аллергологии и иммунологии –д.м.н., проф., академик РАН Хаитов М.Р., гл. врач – к.м.н. А.А. Извеков, зав.лаборатории – д.м.н., проф. Гришина Т.И.), либо по месту жительства больных.Тридцати пациентам основной группы была проведена иммунологическаядиагностика с определением аутоантител к различным антигенам β-клеток: костровковым клеткам (ICA), к инсулину (IAA), к глутаматдекарбоксилазе (GADA)и к тирозинфосфатазе (IA2). Антитела к островковым клеткам (АОК) определялиметодомнепрямойиммунофлуоресценции,предложеннымвкачествестандартного Международной рабочей группой по иммунологии СД.Принцип метода:на антигенный субстрат (криостатные срезы поджелудочной железы)-наносят тестируемую или контрольную сыворотку;-после инкубации сыворотку отмывают буферным раствором;-для выявления сывороточных антител, связавшихся с антигеннымсубстратом, на срезы наносят вторичные антитела, конъюгированные сфлюорохромом;после-инкубациивторичныеантителаотмываютбуфернымраствором;-срезы анализируют под люминесцентным микроскопом.Антигенным субстратом служили криостатные срезы поджелудочнойжелезымультиорганногоположительногоконтролядонорасгруппойиспользоваликровиI(0).АОК-позитивнуюВкачествесывороткуМеждународного фонда детского сахарного диабета (Juvenile Diabetes FoundationInternational, JDF) с титром АОК 160 ед JDF.
В качестве отрицательного контроляиспользовалиАОК-негативную53сливнуюсыворотку,приготовленнуювлаборатории путем смешивания сывороток 50 здоровых АОК негативных доноровкрови. В качестве вторичных антител использовали конъюгат ФИТЦ с Fab2'фрагментами поликлональных антител козла против IgG человека (Sigma, США).Для построения калибровочных кривых использовали АОК позитивнуюсыворотку, которую последовательно разводили АОК негативной сливнойсывороткой (в соотношениях 1:1, 1:3, 1:7 и т.д.). Иммунную реакцию считалиположительной, если на одном срезе выявляли не менее 4 специфическиокрашенных островков.
Титр АОК в тестируемой сыворотке определяли путем еепоследовательных разведений. Тест на АОК считали положительным при титреАОК 10 ед JDF [45].ИсследованиявыполненыведущимнаучнымсотрудникомОтделаклеточной и молекулярной патологии Института молекулярной медициныФГАОУ ВО «Первый Московский государственный медицинский университетим. И.М. Сеченова Минздрава России (Сеченовский Университет)» к.б.н. А.В.Тимофеевым (зав.
отделом д.м.н., проф. А.А. Иванов).Пациентам с обострениями БА проводились рентгенография органовгрудной клетки, транскутанное исследование уровня сатурации артериальнойкрови (SpO2) с помощью пульсоксиметра «MD300C5» (Choicemmed, Китай).Исследования ФВД проводили вне обострения заболевания, в условияхотносительногопокоя,доингаляцийбронхолитиков,всоответствиисимеющимися международными и отечественными рекомендациями [155].Объективно оценить показатели ФВД можно преимущественно у детей старше 7лет, так как пациенты младше данного возраста не способны методическиправильно выполнять глубокий форсированный выдох.Исследование ФВД методом спирометрии было проведено у 58 детей,страдающих БА и СД, и у 42 пациентов группы сравнения, страдающих толькоБА.
Определялись и оценивались показатели жизненной емкости легких (ЖЕЛ) иОФВ1 в % от нормальных величин. Данные исследования выполнены к.м.н. А.К.Абдулаевым на базе отделения кардиоревматологии и пульмонологии МДГКБ54(зав. отделением – А.А. Глазырина) и к.м.н. В.В. Назаровой на базеконсультативно-диагностического центра МДГКБ (зав. отделением – Д.Ю.Корнеев)сиспользованиемспирографов«SpirolabIII»(MIR,Италия),«MasterScreen» (Jaeger, Германия).2.2.5. Патологоанатомическое исследованиеПатологоанатомическое исследование (аутопсия) проведено у 1 пациентаосновнойгруппы.Аутопсийноеисследованиевключаловсебяобщеемакроскопическое описание, водную пробу для выявления пневмоторакса иплавательную пробу мелких кусочков легких для выявления воздушностипаренхимы ткани.Для гистологического исследования, при проведении аутопсии, тканьоргановбраласьвсоответствиис«Инструкциейпоунификациимикроскопических методов исследования секционного и биопсийного материаладля патологоанатомов педиатрического профиля» Минздрава СССР от 1980 г.[14].Длярутиннойсветовоймикроскопиииспользовалосьокрашиваниепарафиновых срезов гематоксилином и эозином по стандартной методике.Длявыявленияизбыточногоскоплениясоединительнойтканииспользовалось окрашивание пикрофуксином по Ван-Гизону.Для определения наличия в тканях гликопротеинов, полисахаридов,мукополисахаридов,гликолипидовирядажирныхкислотприменялосьокрашивание PAS (Periodic Acid Schiff (PAS) reaction, PAS-реакция, ШИКреакция).Кроме того, проводилось иммуногистохимическое исследование тканилегкого с маркером субпопуляций Т-лимфоцитов (CD4+).Исследования были выполнены врачом-патологоанатомом Т.С.
Парсеговойв патологоанатомическом отделении МДГКБ (зав. отделением – к.м.н. А.Н.Кисляков).552.2.6. Статистическая обработка данныхСтатистическаяобработкаданныхвыполняласьсиспользованиемпрограммного обеспечения Microsoft Excel 2013, StatSoft. STATISTICA 10, IBMSPSS Statistics V20.0. Все количественные показатели в группах были проверенына нормальность распределения с использованием критерия Шапиро-Уилка(критическим уровнем достоверности ненормального распределения был принятуровень р<0,1). Для описания распределения нормально распределенныхколичественных показателей рассчитывалось среднее значение и стандартноеотклонение,дляраспределенныхописанияраспределениянепараметрически,количественныхрассчитывалисьпоказателей,значениямедианыиинтерквартильного размаха.
Для качественных показателей рассчитывалисьчастоты встречаемости признака.Длясравненияраспределенныхнесвязанныхпоказателей,междунормально,выборок,группамиколичественныхиспользовалсядлясравненияраспределенныхt-критериймеждуненормально,показателей,Стьюдентагруппамидляколичественныхкачественныхпорядковыхпоказателей использовался непараметрический ранговый критерий Манна-Уитни.Статистическую значимость различий между частотными показателями групп сожидаемыми частотами более 10 оценивали с использованием критерия χ2 (хиквадрат) с учетом поправки Йетса.
При наличии значений ожидаемых частот 10 именееприменялиточныйкритерийФишера.Анализсвязимеждуколичественными показателями, распределенными ненормально, качественнымипорядковымипоказателямикоэффициенткорреляцииприменялсяСпирмена.непараметрическийКритическоезначениеранговыйуровнястатистической значимости нулевой гипотезы во всех случаях принимали равным0,05.56ГЛАВА 3.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
