Диссертация (1150109), страница 8
Текст из файла (страница 8)
Объемраствора в колбе доводили до метки дистиллированной водой и тщательноперемешивали. Для достижения требуемого значения рН добавляли по каплям 0,1М раствор двузамещенного фосфата калия при перемешивании. рН раствораконтролировали с помощью рН-метра.Приготовление боратного буферного раствора (рН=8,0)Смешивали 56 мл 0,05 М раствора тетрабората натрия, 22 мл 0,2 М растворасоляной кислоты и 22 мл 0,4 М Трилона Б.
По каплям добавляли 1 М раствор50гидроксида натрия до достижения требуемого значения рН. рН раствораконтролировали с помощью рН-метра.Приготовление ацетатного буферного раствора (рН=4,5)Навеску 8,85 г ацетата натрия из стаканчика для взвешивания количественнопереносили в мерную колбу вместимостью 1 л, промывали стаканчик не менеепяти раз по 20 мл дистиллированной воды, сливая промывные воды в ту же колбу,и добавляли 2 мл ледяной уксусной кислоты.
Объем раствора в колбе доводили дометки дистиллированной водой и тщательно перемешивали. Для достижениятребуемого рН добавляли по каплям 0,1 М раствор уксусной кислоты или ацетатанатрия при перемешивании. рН раствора контролировали с помощью рН-метра.3.5. Изготовление картриджей с пористыми ПТФЭ фильтрамиВ одноразовые полипропиленовые картриджи воронкообразной формы(высота – 50 мм, внутренний диаметр – 5 мм) помещали пористые ПТФЭ фильтрысоответствующих размеров, изготовленные из порошка ПТФЭ (Фторопласт – 4).Для получения фильтра порошок ПТФЭ спекали при температуре 380 оC в течение3 часов в металлической форме (20 × 50 × 50 мм), после чего ПТФЭ пластинуизмельчали.
С помощью сит отбирали 0,45 – 0,9 мм фракцию порошка ПТФЭ,которую повторно спекали в металлической форме с отверстиями (диаметр – 5 мм,высота – 7 мм) при температуре 380 оC в течение 1,5 ч.3.6. Пробоотбор и пробоподготовка ЛРСРастительный материал хранили при комнатной температуре в защищенномот света и влаги месте.
Анализируемое ЛРС сушили в сушильном шкафу вусловиях, указанных в таблице 5. Затем при помощи лабораторной мельницыизмельчали анализируемое сырье и просеивали через сито с диаметром отверстий 1мм.51Таблица 5. Условия высушивания анализируемого ЛРС, содержащего различныеприродные БАВ.БАВТемпература, оСВремя, чФлавоноиды1501АК801Антрахиноны506Измельченный материал тщательно перемешивали, рассыпали ровнымтонким слоем в виде квадрата на бумажном листе и делили на четыре сектора.Содержимое двух противоположных секторов отбрасывали, оставшиеся двасектораповторно перемешивалиирассыпалитонким слоем. Операциюквартования проводили многократно до получения средней пробы (0,5 – 1 г).Далее при определении флавоноидов или антрахинонов 0,01 г или 0,1 гподготовленного ЛРС соответственно помещали в фарфоровую ступку, добавляли1 г хлористого калия и тщательно растирали смесь при помощи пестика.52Глава 4.
Разработка методики циклического инжекционногоспектрофотометрического определения флавоноидов в лекарственномрастительном сырье4.1. Влияние ПАВ на образование комплексов флавоноидов с ионамиалюминия (III)На основе обзора известных решений проблемы определения флавоноидов вЛРС и ЛП был сделан вывод, что для проточного определения флавоноидов врастительном сырье наиболее предпочтителен спектрофотометрический методдетектирования, обеспечивающий высокую надежность и простоту анализа. Дляопределенияфлавоноидовобразованияихрекомендованабылакомплексовдлявыбранасионамиопределенияизвестнаяалюминияфлавоноидоввселективнаяреакция(III).ДаннаяреакцияЛРСГосударственнойфармакопеей XI издания [73].Формирование комплексов флавоноидов с ионами алюминия (III) можетбыть выражено следующим химическим уравнением [120]:OHAl(H2O)4HOOOOOHOH23 AlCl3RutOOOH(H2O)44 HClOH2OAl(H2O)4Cl5OO Al OOHORutRutOOOHOHOОднако выбранная реакция является кинетически замедленной.
Общимрешениемдляпреодолениякинетическихограниченийприобразованиианалитических форм является проведение фотометрических реакций в средах ПАВза счет катализа подобных аналитических реакций [121, 122]. Но возможностьреализации данного методического решения для случая определения флавоноидовтребовала экспериментальной проверки, т.к. ранее это не было изучено.Влияниекатионных, анионныхи неионогенныхПАВ на скоростьобразования аналитической формы рутина было исследовано на примерах53цетилпиридиния хлорида (ЦПХ), додецилсульфата натрия и Triton X-100соответственно:ClOH3CS10OO-N+Na+CH3O14Додецилсульфат натрияЦетилпиридиния хлоридOHOnH3CH3CCH3 H3CCH3Triton X-100Для этого в мерную колбу вместимостью 25 мл помещали 1 мл 0,8 мМраствора рутина и 1 мл 40 мМ раствора хлорида алюминия.
При изучении влиянияПАВ 1 мл 2,8 мМ раствора соответствующего ПАВ был добавлен в колбу. Затемсодержимое колбы доводили до метки 70 % этиловым спиртом. Далее измерялиоптическую плотность растворов при длине волны 415 нм через каждые 5 мин.Согласно полученным данным (Рисунок 14), при прочих равных условияхдобавление любого из ПАВ к реакционной смеси приводит к увеличениюоптической плотности раствора, достигаемой за одно и то же время.Максимальный эффект проявляется в присутствии ЦПХ (Рисунок 14, кривая 4).
Вэтомслучаескоростьпротеканияфотометрическойреакциизначительновозрастает. Для достижения близкого к максимальному значению оптическойплотности достаточно 5 мин вместо 30 мин (без ПАВ). Электростатическоевзаимодействие между отрицательно заряженными центрами флавоноидов иположительно заряженными группами ПАВ приводит к более эффективномувзаимодействию флавоноидов с ионами алюминия (III). В данных условияхформируются комплексы, обусловленные взаимодействием молекул катионных54ПАВ с молекулами флавоноидов, которые в свою очередь образуют агрегативноустойчивые и интенсивно окрашенные растворы аналитических форм с ионамиалюминия (III).
Кроме того, введение ЦПХ приводит к увеличению молярногокоэффициентасветопоглощения.Приэтоммолярныйкоэффициентсветопоглощения комплекса рутина с ионами алюминия (III) равен 1,9·104л/моль·см (λ=415 нм), а без введения ЦПХ – 1,6 ·104 л/моль·см соответственно.Рисунок 14. Влияние различных ПАВ на скорость образования комплекса рутина сионами алюминия (III): 1 – без ПАВ; 2 – Triton X-100; 3 – додецилсульфат натрия;4 – ЦПХ (C(рутин) – 0,8 мМ, C(ПАВ) – 2,8 мМ, С(Al (III)) – 40 мМ).В рамках данной работы были найдены константы скоростей реакцийкомплексообразования рутина с ионами алюминия (III) в присутствии и без ЦПХпутем построения кинетических зависимостей. Для этого в мерную колбувместимостью 25 мл помещали 1 мл (0,3 – 1,3) мМ раствора рутина и 1 мл 40 мМраствора хлорида алюминия.
При изучении влияния ПАВ 1 мл 2,8 мМ раствораЦПХ был добавлен в колбу. Затем содержимое колбы доводили до метки 70 %этиловым спиртом. Далее измеряли оптическую плотность растворов при длиневолны 259 нм, которая соответствует максимуму поглощения раствора рутина вУФ-области, через каждые 30 с. В качестве раствора сравнения использовали 1 млраствора рутина соответствующей концентрации, разбавленный до 25 мл 70 %этиловым спиртом.Было рассчитано изменение концентрации рутина (с) в зависимости отвремени (t), а также построены кинетические зависимости в координатах 1/c2 – t.55Установлено, что общий вид кинетического уравнения образования аналитическойформы рутина в среде ПАВ аналогичен уравнению в спиртовой среде. Наосновании полученных кинетических зависимостей были рассчитаны константыскоростей реакций образования комплексов флавоноидов с ионами Al (III) вэтаноле и в присутствии ПАВ по тангенсам углов наклона их линейных участков,которые составили соответственно (1,8 ± 0,1)·104 и (8,8 ± 0,1)·103 мин-1.моль-2.л2.
Изполученныхданныхследует,чтовприсутствииЦПХскоростьспектрофотометрической реакции удваивается.4.2. Выбор условий спектрофотометрического определения флавоноидовДля достижения оптимальных условий протекания спектрофотометрическойреакции в условиях ЦИА было изучено влияние концентрации ЦПХ и ионовалюминия (III) на величину аналитического сигнала. Согласно выбранной схемеанализа в РЕ (8) подавали 100 мкл 50 мкМ раствора рутина (5, a), 300 мкл 0,7–7,0мМ AlCl3 (5, f) и 300 мкл 0,01–1,0 мМ ЦПХ (7, e) (Рисунок 20).
Растворы в РЕ (8)перемешивали потоком воздуха (кран 5, d) в течение 10 с со скоростью 6 мл/мин ивыдерживали 5 мин при температуре 25оС. На следующем этапе раствораналитической формы из РЕ (8) при переключении кранов-переключателей (5, 7) иреверсанасоса(6)спектрофотометрическогопоследовательнодетектора(11),перекачивалиизмеряливкюветуоптическуюплотностьраствора (λ=415 нм) в условиях остановленного потока в течение 10 с и растворсбрасывали.Затем коммуникации системы промывали 70 % раствором этанола (7, d) иизмеряли фоновый сигнал.Экспериментально было найдено, что максимальное значение оптическойплотности раствора аналитической формы рутина наблюдалось при концентрацииионов алюминия (III) равной 1,7 мМ (Рисунок 15).
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
