Диссертация (1150109), страница 11
Текст из файла (страница 11)
Аналитические характеристики методики представлены в таблице 9.Разработанная методика в отличие от ранее предложенных проточных аналоговобеспечилаполнуюавтоматизациюанализа,включаястадиюизвлеченияаскорбиновой кислоты из ЛРС и продуктов питания в раствор. Методика позволяетпроводить определение АК в ЛРС и продуктах питания с производительностью 17проб в час.ТаблицаАналитические9.спектрофотометрическойхарактеристикиметодикициклическойопределенияинжекционнойаскорбиновойкислотывлекарственном растительном сырье и продуктах питания.ПараметрОптимальное значениеКонцентрация соляной кислоты5(мМ)Концентрация 2,6-ДФИФ (мкМ)20оТемпература извлечения ( C)25Объем экстрагента (мл)1,5Масса пробы (г)0,01Время извлечения в УЗ-поле (мин)5Диапазон определяемых0,01 – 0,32концентраций (%)Предел обнаружения (%)0,003Коэффициент корреляции0,999Sr, % (n = 5)7Производительность (проб/час)175.4.
Мешающее влияние примесных компонентовВ работе было изучено влияние на определение АК некоторых соединений,имеющих фенольные, карбоксильные и гидроксильные группы. Исследованиемешающеговлияниябылопроведенонамодельныхводныхрастворах,75содержащих 17 мкМ АК и различные количества примесных компонентов, всоответствии с разработанной автоматизированной методикой. Для оценкиселективности реакции использовали фактор селективности, величина которогорассчитывается по уравнению: F=Ci/CА, где Ci – концентрация примесногокомпонента; CА − концентрация аналита. Полученные результаты приведены втаблице 10.
Не было найдено мешающего влияния в присутствии глюкозы, винной,лимонной, яблочной и фолиевой кислот больше, чем в 10-кратном избытке поотношению к АК. Мешающее влияние цистеина было найдено в 2-кратномизбытке. Найденные соотношения [мешающее соединение]/[АК] гораздо больше,чем те, что обычно содержатся в ЛРС [123].Таблица 10. Факторы селективности для различных примесных компонентов приопределении аскорбиновой кислоты.Примесный компонентФактор селективностиFe (II)2Sn (II)2Цистеин2Cu (II)3,5Глюкоза10Лимонная кислота15Винная кислота25Фолиевая кислота50Яблочная кислота505.5.
Испытание методики на реальных объектах анализаРазработанная методика апробирована на различном ЛРС и продуктахпитания (Таблица 11). Правильность полученных результатов подтвержденаметодом КЭ с УФ-детектированием.Важным фактором, влияющим на время миграции и разделение веществ в КЭ,является выбор фонового электролита. Применение боратного буферного раствора76(pH=8,0) обеспечивает появление воспроизводимых и хорошо разрешенных пиковАК на электрофореграмме через 6 мин.Перед началом работы капилляр промывали в течение 2 мин 0,1 М растворомNaOH, в течение 2 мин дистиллированной водой и в течение 5 мин боратнымбуферным раствором (pH=8,0).
Между инжекциями капилляр промывалиборатным буферным раствором (pH=8,0) в течение 3 мин.В ходе оптимизации условий анализа было изучено влияние концентрацииэлектролита. Симметрия пиков и стабильность фонового сигнала наблюдались приконцентрации боратного буферного раствора равной 50 мМ, которая была выбранадля дальнейших экспериментов. Раствор Трилона Б, входящий в состав боратногобуферного раствора, необходим для того, чтобы связать ионы металловнаходящиеся в растворе, так как они являются катализаторами реакций окисленияАК.
Для расчета эффективных электрофоретических подвижностей в качествемаркера электроосмотического потока был взят ацетон.Также было изучено влияние времени инжекции экстракта на аналитическийсигнал. Для этого 0,05 мМ раствор АК отбирали в прибор для высокоэффективногокапиллярного электрофореза в течение 2, 4, 6, 8 и 10 с. При времени инжекциибольше, чем 4 с, чувствительность анализа значительно не изменялась, однако приэтом наблюдалась ассиметрия пиков.
Поэтому время инжекции равное 4 с быловыбрано в качестве оптимального.Для определения АК методом КЭ навеску ЛРС помещали в ступку,измельчали и добавляли 1 мл 50 мМ боратного буферного раствора (pH=8,0), затемвсе помещали в мерную колбу на 100 мл и доводили дистиллированной водой дометки. Полученное извлечение фильтровали через мембранный фильтр Millipore сдиаметром пор 0,22 мкм. Ввод пробы производили гидродинамически поддавлением – 150 мбар.с. Электрофоретическое разделение осуществляли вборатном буферном растворе, при напряжении +20 кВ, температуре +20 °C инормальной полярности.
Детектируемая длина волны составляла 254 нм. Дляанализа были использованы кварцевые капилляры (Lобщ/Lэф=60/50, внутреннийдиаметр 75 мкм). Охлаждение капилляров использовалось жидкостное (t=20 °C).77При проведении эксперимента была использована процедура градуировки приборапо стандартным растворам АК, которые подвергались аналогичным процедураманализа, что и реальные объекты. На рисунке 31 представлен градуировочныйграфик для определения АК в ЛРС и продуктах питания методом КЭ.Рисунок 31. Градуировочный график для определения АК в ЛРС методом КЭ.Некоторые из полученных электрофореграмм представлены на рисунке 32.78Рисунок 32.
Электрофореграммы: А – экстракт сладкого красного перца; Б –экстракт киви; В – экстракт плодов рябины (1 – ацетон; 2 – АК) (концентрациятетраборат-иона – 25 мМ, pH=8, время инжекции – 4 с, приложенное напряжение –+20 кВ, температура – +20 °C, длина волны – 254 нм).Результаты, полученные методами ЦИА с извлечением в УЗ-поле и КЭ, былисравнены с помощью F- и t-тестов и представлены в таблице 11.Полученные F-значения ≤ 6,39 указывают на незначительное различие ввеличинах стандартных отклонений, а полученные t-значения ≤ 2,31 указывают нато, что нет статистически значимого различия между результатами, полученнымипри помощи двух методик.Таблица 11. Результаты определения АК в ЛРС и продуктах питания (n=5, P=0,95).ПробаОбщее содержание АК, %ЦИАКЭЛистья смородины0,21±0,010,20±0,021,901,70Плоды рябины0,14±0,010,12±0,012,302,07Киви0,18±0,010,180±0,0052,100,86Яблоко «Антоновка»0,060±0,0040,060±0,0031,500,930,270±0,0070,250±0,0032,302,100,15±0,010,13±0,021,352,20Сладкий красныйперецЯблочное пюре«Агуша»F-значение t-значение79Глава 6.
Разработка методики циклического инжекционногоспектрофотометрического определения общего содержания антрахинонов влекарственном растительном сырье6.1. Оптимизация условий извлечения антрахинонов из лекарственногорастительного сырьяМетоды анализа ЛРС, как правило, включают стадию извлечения аналитов вжидкую фазу – экстрагент. При анализе ЛРС выбор оптимального экстрагентаимеет большое значение. К экстрагентам предъявляются следующие требования:они должны быть избирательными по отношению к аналитам, максимальноизвлекать БАВ из ЛРС, хорошо смачивать растительный материал. Экстрагенты недолжны вступать в химическое взаимодействие с аналитами, а также должны бытьбезопасными и доступными для использования [127].
На сегодняшний день особыйинтерес представляет собой применение в качестве экстрагентов растворовповерхностно-активных веществ (ПАВ). Экстракцию с использованием ПАВ вконцентрации выше критической концентрации мицеллообразования (ККМ)принятоназыватьмицеллярно-опосредованнымизвлечением(МОИ).Преимуществами данного метода являются достижение высоких коэффициентовконцентрирования микрокомпонентов при использовании малых объемов проб,возможность выделения и разделения веществ различной природы, в том числезаряженных форм, удобство сочетания с разными физико-химическими методамианализа [128–131].
Указанные преимущества обуславливают перспективностьиспользования МОИ в фармацевтическом анализе.Антрахиноны, как правило, извлекают из ЛРС в органические растворителиили в водную фазу при нагревании и под давлением. В данной работе реализованальтернативный метод их извлечения из корней и корневищ марены и корыкрушины, который включает в себя процесс МОИ. Было установлено, чтоиспользование МОИ при температуре помутнения является эффективнойальтернативойиспользованиюорганическихрастворителейдляпроцесса80извлечения. В данном случае раствор ПАВ, концентрация которого выше его ККМ,используется в качестве экстракционного растворителя. При такой концентрациимолекулы ПАВ образуют мицеллы [57], которые способны извлекать из ЛРСцелевые аналиты, предпочтительно неполярные.Для достижения эффективного извлечения антрахинонов из ЛРС былиоптимизированы такие параметры, как состав экстрагента и его объем, время итемпература извлечения в условиях ЦИА.Различные экстрагенты, такие как ацетон (80 %), этанол, растворы ЦПХ,додецилсульфата натрия и Triton X-100 с концентрацией выше ККМ были изученыдля извлечения антрахинонов из растительного сырья.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
