Диссертация (1150109), страница 3
Текст из файла (страница 3)
Такимобразом, происходит значительное повышение эффективности образованияаналитической формы, что особенно важно при автоматизации кинетическизамедленных реакций. Однако данный метод имеет существенный недостаток,который состоит в необходимости замены удерживающих частиц для каждогопоследующего анализа вследствие того, что поверхность частиц трудно поддаетсярегенерации.Проточный фармацевтический анализ с созданием равновесных условийобразования аналитических форм аналитов реализован в FBА [30, 31]. Отличиемданной разновидности проточных методов является наличие смесительной камеры,объединенной с кюветой проточного детектора соответствующего типа. В этихкамерах,снабженныхмагнитноймешалкой,происходитэффективноеперемешивание пробы и растворов реагентов, за счет чего достигаютсяравновесные условия измерения аналитического сигнала. Однако включение всхему FBА специальных устройств для перемешивания растворовусложняетконструкцию анализатора.
При автоматизации спектрофотометрических методиксовмещение смесительной камеры с кюветой детектора ограничивает возможностиварьирования объема пробы и увеличения длины оптического пути при измерениианалитического сигнала.ВкачествеиллюстрациивозможностейFBАприводитсяметодикаопределения амоксициклина в таблетках и капсулах [32]. Методика FBA основанана реакции диазотирования о-нитроанилина с амоксициклином в щелочной среде собразованием окрашенного соединения, имеющего максимум поглощения придлине волны 435 нм:17OHNO2NO2NH2N2NaNO2/HClCHCONHSCH3NH2CH3NOHCOOHONO2O2NONNNNRCR=CONHSNH2CH3CH3NOВпредложеннойсхемеFBAсмесительнаяCOOHкамерасовмещенасфотометрической кюветой, электромагнитное излучение через которую подаетсяпосредством двух оптоволоконных кабелей (Рисунок 7).Рисунок 7.
Схема FВА для определения амоксициклина в ЛП [32].В соответствии с разработанной FBA методикой раствор нитрита натрияинжектировали в поток о-нитроанилина и направляли в смесительную камеру.Также в смесительную камеру подавали аликвоты пробы и раствора гидроксида18натрия. В смесительной камере с помощью вкладыша магнитной мешалкипроисходило перемешивание раствора, образование продукта реакции и измерениеаналитического сигнала при длине волны 435 нм. Производительность методики –50 проб в час.
Методика показала хорошую воспроизводимость (СКО=3,7 %) ибыла использована для анализа различных ЛП.Последним вариантом из равновесных проточных методов, предложеннымдля фармацевтического анализа, является ЦИА [33, 34]. В отличие от аналогов всхему ЦИА для обеспечения равновесных условий образования аналитическойформы включена реакционная емкость (РЕ), перемешивание растворов в которойосуществляется потоком газа, как правило, воздухом. Основная концепция ЦИАпредполагает строгое воспроизведение всех стадий анализа, характерных длястатических методик, что значительно упрощает их автоматизацию и адаптациюметодик ЦИА в лабораториях. Принципиальная схема ЦИА для автоматизацииметодик анализа жидких, газообразных и легкорастворимых твердофазных пробнезависимо от применяемых методов детектирования представлена на рисунке 8.Несомненным преимуществом метода ЦИА явилась унификация гидравлическихсхем, исключившая необходимость их перекомпоновки при переходе от однойметодики анализа к другой.Рисунок 8.
Принципиальная схема ЦИА [33].Анализ фармацевтических препаратов в условиях ЦИА проиллюстрирован вработе по спектрофотометрическому определению аскорбиновой кислоты в ЛП19[35]. В ее основе лежит экспрессная реакция АК с реагентом – гуанидиниевойсолью 11-молибдовисмутофосфорной гетерополикислоты (МВФК). Для этогочерез кран-переключатель с помощью реверсивного насоса в РЕ подавали 0,3 млраствора ЛП, 0,1 мл раствора МВФК, 0,1 мл H2SO4 и поток азота, обеспечивающийперемешивание растворов в РЕ (Рисунок 9). После этого раствор аналитическойформы из РЕ при переключении крана-переключателя и реверса насосаперекачивали в кювету спектрофотометрического детектора, измеряли оптическуюплотность раствора и раствор сбрасывали.
Предел обнаружения АК методом ЦИАсоставил 1,5·10-2 г/л, производительность – 12 проб/час.Рисунок 9. Cхема определения АК в условиях ЦИА по реакции с МВФК [35].Все проточные методы анализа преимущественно ориентированы на анализрастворов.Какправило,твердыепробытребуютпредварительнойпробоподготовки, чтобы сформировать жидкую пробу аналита, и в этом случаеосновные этапы пробоподготовки проводятся в статическом режиме [36–38]. Вслучае анализа легкорастворимых твердофазных проб ЛП, стадия растворенияможет быть включена в общую схему проточного анализа.Вработе[39]показанавозможностьавтоматизациирастворениялекарственного препарата «Лендормин» в условиях ПИА с последующим анализомприготовленного раствора на содержание в нем активного компонента –20бротизолама. Для этого 6 точно взвешенных таблеток помещали в специальноеустройство – систему для автоматизированного растворения (Рисунок 10).
Припомощи ПИА системы автоматически с помощью насосов в сосуды подавалипорции растворителя (по 500 мкл дистиллированной воды) и в течение 30 минутпри постоянном перемешивании и температуре 37 оС происходило растворениетаблетированных проб. Затем аликвоту пробы объемом 100 мкл при помощи кранадозатора помещали в непрерывный поток носителя – 0,2 М раствор солянойкислоты. Растворы через реакционную спираль проходили к флуориметрическомудетектору и далее на сброс.
Длина волны возбуждения – 300 нм, длина волныиспускания – 480 нм. Производительность составила 200 проб в час.Рисунок 10. Cхема ПИА с автоматизированным растворением твердофазных проб[39].Возможность автоматизации растворения и анализа твердофазных образцов вусловиях SIA проиллюстрирована в работе [40] на примере анализа таблетокибупрофена. Шесть из десяти портов крана-переключателя были подключенных кшести сосудам (Рисунок 11). В них помещали образцы и порции растворителя(фосфатный буферный раствор). На концах шести кранов располагалисьмембранные фильтры. В течение 30 минут при постоянном перемешивании итермостатировании (t = 37,0±0,5оС) проводили растворение проб. Затем спомощью шприцевого насоса в удерживающую спираль подавали растворносителя – 200 мкл дистиллированной воды.
Далее при помощи кранапереключателя и насоса в удерживающую спираль подавали 600 мкл растворенной21пробы. Затем 400 мкл пробы подавали обратно в сосуд для промывки мембранногофильтра. Раствор из спирали прокачивали в детектор, где происходило измерениеего оптической плотности при λ=222 нм. После этого проводили промывкуспирали раствором носителя и измерение оптической плотности стандартногораствора ибупрофена.
Производительность составила 42 пробы в час.Рисунок 11. Cхема SIA с автоматизированным растворением твердофазных проб[40].Однако в случае определения АК, флавоноидов или антрахинонов в ЛРС илиЛП стадия растворения или извлечения аналитов из твердофазных проб невключена в общую схему проточного анализа (Таблица 1).Таблица 1. Сравнительная таблица проточных методов определения АК,флавноидов и антрахинонов в ЛРС и ЛП.АналитПолнотаПроизводиавтоматительность,зациипроб/часПределМетодобнаруженияопределенияЛитератураSIA cНет150,4·10-3 г/дм3[25]ким детектированиемАскорбиноSIA cваякислотаспектрофотометричесНет600,15·10-3 г/дм3спектрофотометрическим детектированием[24]22ПИА cНет0,5·10-3 г/дм3180спектрофотометричес[135]ким детектированиемЦИА сНет1,5·10-2 г/дм312спектрофотометричес[35]ким детектированиемПИА сНет2·10-3 г/дм380хемилюминесцентныФлавоноим детектированиемдыПИА сНетДо 10-8 г/дм330[22]электрохимическим[57]детектированиемПроточноеАнтрахиноныЧастично2извлечение c-[99]спектрофотометрическим детектированиемВтаблице2автоматизированныхпредставленныхприведеныметодикданныханалитическиеанализавидно,характеристикифармацевтическойчтомаксимальнаянекоторыхпродукции.Изпроизводительностьфармацевтического анализа обеспечивается в условиях ПИА и SIA и можетдостигать до 200 проб в час.
Кроме того, все проточные методы можно разделитьпо способу детектирования аналита в анализируемой пробе. В проточных методахвстречаются спектральные, электрохимические и гибридные методы определениявеществ.Таблица2.Аналитическиехарактеристикипроточныхметодиканализафармацевтической продукции.ПроизводитеОпределяемоевеществоМатрицаМетод определенияльность,определений/часДиазепамТаблеткиПИА с100Диапазонопределяемыхконцентраций(2–110)·10-3Литература[12]23г/дм3спектрофотометрическим детектированиемв УФ-областиПИА сВенлафаксинТаблеткиспектрофотометрическим детектированием30(30–150)·10-3г/дм3[13]в УФ-областиПИА сКетопрофенГели испектрофотометричесампулыким детектированием85(7,5–75)·10-3г/дм3[14]в УФ-областиМетилдопа: (1–50)·10-3 г/дм3ПИА сКатехоламиныТаблеткиспектрофотометрическим детектированием180в видимой областиДопамин: (2–50)·10-3 г/дм3[15]Адреналин: (5–70)·10-3 г/дм3ПИА сЛеводопаТаблеткиспектрофотометрическим детектированием130(4,1–20,3)·10-4моль/дм3[16]в видимой областиПИА сБенсеразидТаблеткиспектрофотометрическим детектированием21(0,85–4,25)·10-4моль/дм3[16]в видимой областиПИА сКапсулы: (5–21)·10-3 г/дм3ДифенилгидраКапсулы,спектрофотометричесминсиропким детектированием100Лимоннаясоки,кислотафрукты,порошкиПарацетамолТаблеткиПИА спотенциометрическим65детектированиемПИА с[17]188)·10-3 г/дм3в видимой областиСиропы,Сироп: (75–-(3,84–91,2)·10-6моль/дм32,5·10-6–1·10-3[18][19]24моль/дм3амперометрическимдетектированиемПИА сМелатонинТаблеткиамперометрическим135детектированием1·10-8–1·10-5моль/дм3[20]ПИА сАскорбиноваякислотаТаблеткиспектрофотометрическим детектированием40(0,8–3,52)·10-3г/дм3[21]в видимой области(6–12)·10-3ПИА сКверцетинЛРСхемилюминесцентны80г/дм3[22]м детектированиемSIA сБромазепамТаблеткиспектрофотометрическим детектированием20(0,1–8) г/дм3[41]в видимой областиSIA сТриметопримТаблеткихемилюминесцентным детектированием в(0,5–100)·10-3120г/дм3[42]видимой областиSIA сПрометазинТаблетки,спектрофотометричессиропыким детектированием200(5–40)·10-5моль/дм3[43]в видимой областиРибофлавинМультивиSIA стаминныевольтамперометричестаблеткиким детектированием40SIA сКаптоприлТаблеткипотенциометрическим140детектированиемSIA сДиклофенакТаблеткипотенциометрическимдетектированием32(0,01–0,8)·10-6моль/дм32·10-4–1,4·10-3моль/дм31·10-6–1·10-4моль/дм3[44][45][46]25(6,5–31)·10-3SIA сВитамин В6Таблеткипотенциометрическим-г/дм3[47]детектированиемSIA сАскорбиноваякислотаТаблеткиспектрофотометрическим детектированием600,4–1,2 г/дм3[48]в видимой областиSIC сАмброксолМультивиспектрофотометричестаминыким детектированием(2–100)·10-37г/дм3[27]в УФ-областиSIC сДоксициклинМультивиспектрофотометричестаминыким детектированием(2–100)·10-37г/дм3[27]в УФ-областиCIA cFe (II), Fe (III)Витаминспектрофотометричесыким детектированием(5–20)·10-360г/дм3[28]в видимой областиFB сАмоксициклинТаблеткиспектрофотометрическим детектированием(25–400)·10-350г/дм3[32]в видимой областиBIA сПротемазинТаблеткиспектрофотометрическим детектированием12(0,5–8)·10-3г/дм3[29]в видимой областиЦИА сАскорбиноваякислотаТаблеткиспектрофотометрическим детектированием120,05–0,3 г/дм3[35]в видимой областиНаиболее часто для проточного фармацевтического анализа используютспектральные методы детектирования, в т.ч.
спектрофотометрию [15–17, 49–52].Это связано с тем, что спектральные детекторы обеспечивают высокую26воспроизводимость и чувствительность анализа, что позволяет достигать низкихпределов обнаружения, а также высокую точность получаемых результатов. Крометого, данные методы детектирования отличаются экспрессностью, доступностью ипростотойэксплуатацииоборудования.Однаконедостаткомявляетсяограниченная селективность методик в связи с отсутствием в большинстве случаевспецифических реагентов.При проточном анализе фармацевтической продукции с электрохимическимспособом детектирования обычно применяются потенциометрические [18],амперометрические [19, 20] и вольтамперометрические детекторы [53–56].Электрохимические детекторы характеризуются высокой чувствительностью,возможностью достигать низкие пределы обнаружения, высокой селективностью,особенно при использовании био- и иммуносенсоров.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
